磷的測(cè)量方法

二、磷含量的測(cè)定(HG2636-2000)——磷鉬酸喹琳重量法1、 方法原理在酸性介質(zhì)中，正磷酸根與喹鉬檸酮試劑反應(yīng)生成磷鉬酸喹琳沉淀，經(jīng)過(guò)濾、洗滌、干燥、稱量測(cè)定其磷含量。2、 試劑硝酸(HNO3)：1+1水溶液(V/V)；鉬酸鈉Na2MoO4；檸檬酸(C6H8O7-H2O)；丙酮(CH3COCH3)；喹琳(C9H7N)(Ouinoline)2.6喹鉬檸酮試劑：溶液1：溶解70g鉬酸鈉于150ml水中；溶液2：溶解60g檸檬酸于150ml水和85ml硝酸的混合液中；溶液3：攪拌下將溶液1緩慢加入溶液2中；溶液4：加5ml喹琳于25mL硝酸和100ml水的混合液中；溶液5：將溶液4加入溶液3中，搖勻，放置24小時(shí)，過(guò)濾，濾液中加入280ml丙酮(4.4)，用水稀釋至1000ml，混勻。置于帶塞聚乙烯瓶中，存入于暗處。3、 儀器3.1坩堝式過(guò)濾器：孔徑15gm；3.2電烘箱：能控溫180±5°C4、 分析步驟準(zhǔn)確移取溶液A10.0ml置于300ml燒杯中，加入10ml硝酸(2.1)，用水稀釋至100ml，加熱煮沸，加入50ml喹鉬檸酮試劑，蓋上表面皿，在水浴或電熱板上加熱煮沸1min取下，冷卻至室溫，冷卻過(guò)程中攪拌3-4次。用預(yù)先在180±5C干燥至恒重的坩堝式過(guò)濾器過(guò)濾上層清液，用傾瀉法洗滌沉淀6次，將沉淀轉(zhuǎn)移至坩堝中，繼續(xù)用水洗滌燒杯及沉淀3-4次。將坩堝置于180±5C的烘箱中干燥45min，取出，于干燥器中冷卻至室溫后稱量。2樓同時(shí)作空白試驗(yàn)。5、結(jié)果計(jì)算：P%={(m1-m2)x0.01400x250/mx10}x100 (2)式中：ml......試液生成沉淀的質(zhì)量，g；m2......空白溶液試驗(yàn)生成沉淀的質(zhì)量，g；m 試樣質(zhì)量，g；0.01400......磷鉬酸喹啉沉淀與P的轉(zhuǎn)換系數(shù)。6、允許差取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.2%。食品中磷的測(cè)定GB/T5009.87—20031范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用分光光度法測(cè)定食品中的磷含量。本標(biāo)準(zhǔn)第一法、第二法適用于各類食品中總磷的測(cè)定，第三法適用于西式蒸煮、煙熏火腿中復(fù)合磷酸鹽（以磷酸鹽計(jì)）的測(cè)定。本方法第一法、第二法檢出限均為2pg,線性范圍：第一法分光光度法為5Pg?50pg,第二法分子吸收光譜法為2pg?10pg。第一法分光光度法2原理食物中的有機(jī)物經(jīng)酸氧化，使磷在酸性條件下與鉬酸銨結(jié)合生成磷鉬酸鍍。此化合物被對(duì)苯二酚、亞硫酸鈉還原成藍(lán)色化合物——鉬藍(lán)。用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)660am處測(cè)定鉬藍(lán)的吸收光值，以定量分析磷含量。3試劑.1硫酸：相對(duì)密度1.84。.2高氯酸一硝酸消化液；1+4混合液。3.315%硫酸溶液：取15mL硫酸徐徐加入到80ml,水中混勻。冷卻后用水稀釋至100mL。3.4鉬酸銨溶液：稱取0.5g鉬酸銨［（NH。）。Mo,O:。?4H。O］用15%硫酸稀釋至100ml。。3.5對(duì)苯二酚溶液：稱取0.5g對(duì)苯二酚于100ml,水中，使其溶解，并加人一滴濃硫酸（減緩氧化作用）。3.6亞硫酸鈉溶液：稱取20g無(wú)水亞硫酸鈉于100m1.水中，使其溶解。此溶液需于實(shí)驗(yàn)前臨時(shí)配制，否則可使鉬藍(lán)溶液發(fā)生混濁。3.7磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100pg/mL）:精確稱取在105"（:下干燥的磷酸二氫鉀（優(yōu)級(jí)純）O.一4394g，置于1000mI。容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度。此溶液每毫升含100pg磷。.8磷標(biāo)準(zhǔn)使用液（10pg/mL）:準(zhǔn)確吸取10mL磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于100ml，容量瓶中，加水稀釋全刻度，混勻。此溶液每毫升含磷10pg。4儀器.1實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。.2分光光度計(jì)。5分析步驟.1試樣處理.1.1稱取各類食物的均勻干試樣0.1g?0.5g或濕樣2g?5g于'［00mL凱氏燒瓶中，加人3m1.硫酸、3mL高氯酸一硝酸消化液，置于消化爐上。瓶中液體初為棕黑色，待溶液變成無(wú)色或微帶黃色清亮液體時(shí)，即消化完全將溶液放冷，加20mL水，趕酸。冷卻，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水多次洗滌凱氏燒瓶，洗液合并倒入容量瓶?jī)?nèi)，加水至刻度，混勻。此溶液為試樣測(cè)定液。631GB/T5009.87—20035.1.2取與消化試樣同量的硫酸、高氯酸一硝酸消化液，按同一方法做空白溶液。5.2磷標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確吸取磷標(biāo)準(zhǔn)使用液O、0.5、1.o、2.O、3.0、4.O、5.0mL(相當(dāng)于含磷量0、5、10、20、30、40、50pg)，分別置于20ml。具塞試管中，依次加入2mL鉬酸溶液搖勻，靜置幾秒鐘。加入1mI.亞硫酸鈉溶液，1mI.對(duì)苯二酚溶液，搖勻。加水至刻度，混勻。靜置0.5h以后，在分光光度計(jì)660nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以測(cè)出的吸光度對(duì)磷含量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.3測(cè)定準(zhǔn)確吸取試樣測(cè)定液2m1.及同量的空白溶液(5.1.2)，分別置于20mI。具塞試管中，以下操作步驟同標(biāo)準(zhǔn)曲線(5.2)。以測(cè)出的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試樣液中的磷含量。5.4結(jié)果計(jì)算見(jiàn)式(1)。x一墮X娶X優(yōu)V。式中：x——試樣中磷含量，單位為毫克每百克(mg/100g)；m?！蓸?biāo)準(zhǔn)曲線查得或回歸方程算得試樣測(cè)定液中磷的質(zhì)量，單位為毫克(mg)v，——試樣消化液定容總體積，單位為毫升(mL)；v:——測(cè)定用試樣消化液的體積。單位為毫升(mL.)；m 試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。6精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的5%。第二法分子吸收光譜法7原理食品中的有機(jī)物經(jīng)酸破壞以后，磷在酸性條件下與鉬酸銨結(jié)合生成磷鉬酸銨。用氯化亞錫、硫酸肼還原磷鉬酸銨成藍(lán)色化合物——銅藍(lán)。藍(lán)色強(qiáng)度與磷含量成正比，可進(jìn)行比色定量。8試劑8.1硝酸。8.2硫酸：相對(duì)密度1.84。8.3高氯酸。8.415%硫酸溶液：取15mL,硫酸，加入到80mL水中，混勻。放冷以后用水稀釋至100ml。。8.55%硫酸溶液：取5m1。硫酸，加入到90mL水中，混勻。放冷以后用水稀釋至100mL。8.63%硫酸溶液：取3mI，硫酸，加入到90mL水中，混勻。放冷以后用水稀釋至100ml.。8.7鉬酸銨溶液：同3.4。8.8氯化亞錫一硫酸肼混合液：稱取0.1g氯化亞錫（Sn（:l。-2Hz0），o.2g硫酸肼（NHzNHz?H。sO.），加3%硫酸溶液并用其稀釋至100mLo此溶液置棕色瓶中，貯冰箱至少可保存一個(gè)月。8.9磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱取在105°C干燥至恒量的磷酸二氫鉀（優(yōu)級(jí)純）0.4394g，用水溶解于‘100mL容量瓶中，并加水至刻度，混勻。此溶液每毫升含1mg磷。置聚乙烯瓶貯于冰箱中保存。8.10磷標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確吸取磷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00mL于100mL，容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。632此溶液每毫升含10pg磷。9儀器分光光度計(jì)。10分析步驟GB/T5009.87—200310.1試樣處理稱取各類食品的均勻十樣0.1g?0.5g，濕樣5g左右于100mL三角瓶中，加硝酸15rag,高氯酸2mL，硫酸2mL，混勻。于電熱板或電爐上小火加熱消化，瓶中液體開(kāi)始變棕黑色時(shí)，不斷沿瓶壁補(bǔ)加硝酸全有機(jī)質(zhì)分解完全；加大火力，全消化液產(chǎn)生濃密的白煙，溶液澄明或微帶黃色。消化液放冷，加水20mL。放冷以后轉(zhuǎn)移奎100mI，容量瓶中，用水多次洗滌三角瓶，合并洗液于容量瓶中，加水至刻度，混勻。作為試樣測(cè)定溶液。取與消化試樣同量的硝酸、高氯酸、硫酸，按同一方法做試劑空白溶液。10.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制取磷標(biāo)準(zhǔn)使用液O、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL(相當(dāng)于磷0、2.o、4.O、6.O、8.O、10.0vg),分別置于25mL比色管中，各加水約15mL,5%硫酸溶液2.5mL,鉬酸銨溶液2mL,氯化亞錫一硫酸肼混合液0.5mL,各備均補(bǔ)加水至25mL,混勻。在室溫放置20rain以后，用2cm比色杯，在660111"廣波長(zhǎng)處，以零管作參比，在分光光度計(jì)上分別測(cè)定其吸光度，以吸光度對(duì)磷含量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。10.3測(cè)定準(zhǔn)確吸取試樣測(cè)定溶液1mL?2mL及同量的試劑空白液，分別置于25mL比色管中，各加水約15。L，5%硫酸溶液2.5mL，鋁酸銨溶液2mL，氯化亞錫一硫酸肼混合液0.5mL。各管均補(bǔ)加水全25mL，混勻。在室溫放置20rain以后，用2cm比色杯，在660nm波長(zhǎng)處，用水作參比，在分光光度計(jì)上分別測(cè)定其吸光度。以測(cè)出的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試樣液的磷含量。11結(jié)果計(jì)算見(jiàn)式⑵。x:墮警X揣式中：X——試樣中磷含量，單位為毫克每百克(mg/100g)；。，——由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試樣測(cè)定溶液中磷的質(zhì)量，單位為微克(pg)m。——空白溶液中磷的質(zhì)量，單位為微克(pg);m 試樣的質(zhì)量，單位為克(g);v，——試樣消化的總體積，單位為毫升(mL)；U——測(cè)定用試樣消化液的體積，單位為毫升(mL)。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。12精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的5%。第三法食品中磷酸鹽的測(cè)定13原理試樣中的磷酸鹽與酸性鉬酸銨作用，生成淡黃色的磷鉬酸鹽，此鹽可經(jīng)還原呈顯藍(lán)色，一般稱為鋁633GB/T5009_87—2003藍(lán)。藍(lán)色的深淺，與磷酸鹽含量成正比。{4試劑1稀鹽酸（1+1）。2鉬酸銨溶液（50g/L）:稱取25g鉬酸銨溶于300mL水中，再加75%（體積分?jǐn)?shù)）硫酸溶液（溶解75mL濃硫酸于水中，再用水稀釋至100mL）使成500mL。14.3對(duì)氫醌（對(duì)苯二酚）溶液（5g/L）:稱取0.5g對(duì)氫醌（對(duì)苯二酚），溶解于100mL水中，加硫酸1滴以使氧化作用減慢。14.4亞硫酸鈉溶液（200g/L）:稱取20g亞硫酸鈉溶解于100mL蒸餾水中。此溶液應(yīng)每次試驗(yàn)前『艋時(shí)配制，否則可能會(huì)使鉬藍(lán)溶液發(fā)生混濁。5磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0.7165g磷酸二氫鉀（KH。PO。）溶于水中，移人1000mL容量瓶中，并用水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于500pg磷酸鹽。吸取10.0mL此溶液，置于500mL容量瓶中，加水至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于10pg磷酸鹽（PO?！埃?5分析步驟15.1標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制分別吸取磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（每毫升相當(dāng)于10gg磷酸鹽）o.0，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0mL，分別置于25mL比色管中，再于每管中依次加入2.0mL鉬酸銨溶液，lmL200g/L亞硫酸鈉溶液，1mL對(duì)氫醌（對(duì)苯二酚）溶液，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，靜止30min后，以零管溶液為空白，在分光光度計(jì)于660nm處比色，測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液的光密度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2測(cè)定15.2.1將瓷蒸發(fā)器在火上加熱灼燒、冷卻，準(zhǔn)確稱取均勻試樣2g?5g，在火上灼燒成炭分，再于550°C下成灰分，直至灰分呈白色為止（必要時(shí)，可在加入濃硝酸濕潤(rùn)后再灰化，有促進(jìn)試樣灰化至白色的作用），加稀鹽酸（1+1）10mL及硝酸2滴，在水浴上蒸干，再加稀鹽酸（1+1）2mI，，用水分?jǐn)?shù)次將殘?jiān)耆慈?00mL容量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾（