臨床化學檢驗試劑

§1

臨床診斷試劑的研發(fā)現(xiàn)狀1.1醫(yī)學檢驗的發(fā)展1.2國內(nèi)臨床診斷試劑的發(fā)展歷程1.3臨床診斷試劑現(xiàn)狀1.3.1臨床生化試劑

試劑盒發(fā)展及現(xiàn)狀方法學：化學法→酶法→免疫法物理性狀：液體型試劑（自配）→凍干型試劑→干(片)粉型試劑→液體型試劑組合方式：多劑型試劑→單劑型試劑→雙劑型（多劑型）試劑操作方式：手工多步操作→離心式生化儀→分立式（雙試劑功能）生化儀臨床生物試劑測定物分類名稱酶類α-淀粉酶、α-羥丁酸脫氫酶、γ-谷氨酰轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶、肌酸激酶、肌酸激酶MB型同功酶、堿性磷酸酶、門冬氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶糖類葡萄糖、果糖胺脂類膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白膽固醇、載脂蛋白A-1/B§2國內(nèi)臨床診斷試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展的前景（1）

免疫診斷試劑將會逐漸取代臨床化學試劑，成為診斷試劑發(fā)展的主流（2）

診斷技術正在向兩極發(fā)展。一是高度集成、自動化的儀器診斷，另一種是簡單、快速便于普及的快速診斷（4）產(chǎn)品更新應用加快，由于遺傳工程、基因重組以及單克隆抗體等現(xiàn)代生物技術的不斷應用和發(fā)展，使這些精確的診斷試劑能迅速由研究階段進入臨床階段，縮短了開發(fā)時間（3）檢驗產(chǎn)品種類將快速擴大

§3化學試劑等級標準3.1國產(chǎn)化學試劑通用的化學試劑，共分為四個純度。市售化學試劑在瓶子的標簽上用不同的符號和顏色標明它的純度等級。試劑的純度不同，其適用范圍不同。見下表國產(chǎn)化學試劑的品質(zhì)規(guī)格級別名稱符號色標說明一級優(yōu)級純GR綠色純度高,適用于研究和配制標準液

二級分析純AR紅色純度較高,適用于定量分析

三級化學純CP藍色純度略低于二級試劑,用途與其相同四級實驗試劑LR黃色質(zhì)量較粗,用于一般定性試驗

3.2國外生產(chǎn)化學試劑國外化學試劑規(guī)格種類繁多，頗不一致，和國產(chǎn)試劑規(guī)格對照,見表等級

規(guī)格符號

相當于國產(chǎn)試劑規(guī)格

Ⅰ

AR,GR,ACS,PA一級品

Ⅱ

CP,PUSS,LAB,Reinse二級品

Ⅲ

LR,EP,Pract,Rein三級品

Ⅳ

Pure四級品

3.4.2基準試劑、色譜純試劑(液相色譜淋洗劑)、色譜標樣(色譜標準物)、標準物質(zhì)和標準溶液、優(yōu)級純試劑、三類試劑(顯色劑/染色劑/指示劑)、教學試劑、高純金屬單質(zhì)(金屬粉劑/金屬粒劑/金屬片劑)、摩爾酚劑、PH緩沖劑、滴定分析用當量（摩爾）標準溶液、滴定分析（容量分析）用標準溶液、雜質(zhì)測定用標準溶液(離子液)、分析室常用制劑、培養(yǎng)基等§

4危險、有害化學品

4.1爆炸品注意避免撞擊、摩擦、打火花和加熱爆炸性物質(zhì)（E符號）4.2氧化劑能使易燃物質(zhì)燃燒或使存在的火燒的更旺，使得救火更難。注意：保持遠離易燃物質(zhì)氧化性物質(zhì)（O符號）4.3極度易燃物質(zhì)閃點在0OC以下的液體和沸點/開始沸點最大值為35OC的液體。注意：避免同所有的火源接觸4.4高度易燃物質(zhì)易燃物質(zhì)（F符號）（3）對濕氣敏感的物質(zhì)，同水接觸時易形成易燃燒氣體的化學試劑。注意：避免接觸濕氣或水極易燃物質(zhì)（F＋符號）（2）各種氣體、氣體混合物（還有液氣體），在正常壓力下同氣體接觸有著火范圍。注意：避免形成易燃氣體混合物，保持遠離火源（1）自發(fā)易燃的物質(zhì)，在空氣中易著火的化學試劑。注意：避免接觸空氣（5）在火源短期作用后，很易著火的固體物質(zhì)。注意：避免同所有火源接觸（4）閃點低于21OC的液體。注意：保持遠離開放火源、熱源和發(fā)生火花處4.5很毒、有毒物質(zhì)當吸入、吞入或同皮膚接觸時對健康是很危險的，甚至可導致死亡。非重復、重復或長期接觸這些物質(zhì)，可導致不可逆的損害。注意：避免同人體接觸，如有不適，立即看醫(yī)生有毒物質(zhì)（T符號）和極高毒性物質(zhì)（T＋符號）吸入和食入或皮膚滲入這些物質(zhì)對人的健康是有害的。非重復、重復或長期接觸這些物質(zhì)導致不可逆的損害。注意：避免同人體接觸，包括吸入蒸汽，如有不適，立即看醫(yī)生4.6有害化學品有害物質(zhì)（Xn符號）4.7腐蝕性化學品生活組織以及儀器同這些化學品接觸后會破壞。注意：不要吸入蒸汽，避免接觸皮膚、眼及衣服腐蝕性物質(zhì)（C符號）4.8有刺激性化學品注意：不要吸入蒸汽、避免同皮膚和眼接觸刺激性物質(zhì)（Xi符號）§

5化學試劑的保管化學實驗所用藥品種類多，有些對人有毒害作用，另一些易燃、易爆或有劇毒性的，藥品的管理要以安全、不變質(zhì)為原則?；瘜W試劑的保管應分類保管。5.1一般試劑的保管（1）試劑必須按固體、液體分類并歸類按需排列，[無機物按單質(zhì)(金屬和非金屬)，氧化物(堿性氧化物、酸性氧化物和兩性氧化物)，堿，酸和鹽]進行分類做好登記，貯存與陰涼、避光、通風、干燥處。（2）密封（3）避光（4）陰涼5.2危險品的保管凡是能發(fā)生燃燒、爆炸、中毒、灼燒等災害的化學試劑都屬于化學危險品。保存要嚴格遵守公安部門的使用規(guī)定。具有燃點低、易揮發(fā)，遇到高溫、劇烈摩擦或撞擊，極易著火和爆炸等特性。常用的易燃試劑有丙酮、乙醚、乙醇、異丙醇等，易爆試劑有苦味酸、疊氮鈉等。

5.2.1易燃和易爆試劑5.2.2腐蝕性試劑對人、金屬、塑料等都有不同程度的腐蝕作用。常用的有硫酸、冰醋酸、醋酸酐、硝酸、溴、氨水等。5.2.3劇毒試劑凡生物試驗半數(shù)致死量在50mg/Kg以下者均為劇毒藥品，如氰化物、三氧化二砷、氯化汞等少量進入人體或接觸皮膚即可造成中毒甚至死亡。應指定專人專柜加鎖保管，嚴格登記請領制度。§6標準參考物質(zhì)

基準試劑、標準物質(zhì)標準參考物（標準品）的分級三種方法和三個參考物質(zhì)的概念，在每一等級的測定方法與參考物質(zhì)間有對應的關系。6.1方法的分級6.1.1決定性方法（definitivemethod）（1）定義：是指準確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)詳細的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，測定結果為“確定值”，與“真值”最接近。（2）用途只用于發(fā)展及評價參考方法和一級標準品。國際上只有少數(shù)實驗室進行研究，不能作為常規(guī)測定。6.1.2參考方法（referencemethod）（1）定義是指準確度與精密度已經(jīng)充分證實的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，與重復測定的隨機誤差相比可以忽略不計，有適當?shù)撵`敏度、特異性、直線性及較寬的分析范圍。（2）用途在條件優(yōu)越的實驗室中應經(jīng)常使用，主要應用于鑒定常規(guī)方法，評價其誤差大小，干擾因素，并決定其是否可以被接受。它也用于鑒定二級標準品，為質(zhì)控血清定值，也可用于評價商品試劑盒等。6.1.3常規(guī)方法（routinemethod）方法的性能指標符合臨床或其他目的的需要，有適當?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟實用。其中有些方法準確度已經(jīng)確定的方法。常規(guī)方法在作出評價以后，經(jīng)有關學術組織認可后可以作為推薦方法。用作服務性實驗室的定量分析。臨床化學方法的關系圖6.2標準物質(zhì)分級6.2.1一級標準物質(zhì)（原級參考物）（1）定義是一種穩(wěn)定而均一的物質(zhì)，它的一種或多種理化性質(zhì)已充分了解，它的數(shù)值已由決定性方法確定，或由高度準確的方法確定，所含雜質(zhì)也已定量，一般有權威機構（如美國國家標準局，英國物理實驗室等）提供，有證書。（2）用途用于校正決定性方法，評價及校正參考方法以及為二級標準品定值。（3）分類國家確認的參考物質(zhì)：由國家確認、其中成份含量在國家規(guī)定范圍以內(nèi)，并附有證書的參考物。如美國國家標準局（NBS）的參考物質(zhì)屬此類。生物源性參考物質(zhì)：通常此類參考物質(zhì)與測定標本完全是同類，也就是用混合人血清將其中成份用決定性方法測定后進行定值。另一種擬似測定標本的生物源性參考物（其性質(zhì)與病人標本很接近），其成份濃度必須用決定性方法或幾種不同類型的高準確的方法進行定值，已知干擾或可能干擾的物質(zhì)須有說明。生物源性參考物質(zhì)常用于評價方法的可靠程度或用它證實干擾物質(zhì)對參考方法或常規(guī)方法的偏差，以及了解決定性方法、參考方法和常規(guī)方法三種結果之間的相互關系。如定值的參考血清屬于此類。6.2.2二級標準物質(zhì)（次級參考物）（1）定義包括用于常規(guī)分析的標準液。這類標準品可有實驗室自己配制或為商品，它的示值必須用一級標準品和參考方法，并由訓練有素、能熟練掌握參考方法的操作者確定。（2）用途主要用于常規(guī)方法的評價或為控制物定值和常規(guī)測定的結果計算。（3）分類純物質(zhì)（通常用水溶液或有機溶劑溶液）和生物源性介質(zhì)（如透析后血清）中含參考物質(zhì)的成份的制品純物質(zhì)本身就是第一標準物質(zhì)或具有第一標準物質(zhì)定值的物質(zhì)。生物源性介質(zhì)配制的所含各種被測成份須經(jīng)參考方法定值。自制定值參考血清即屬此類。6.2.3質(zhì)控物質(zhì)是用生物源性介質(zhì)制成（如人或動物血清），基本應用于常規(guī)室內(nèi)或室間質(zhì)量控制。有凍干與液體兩種。6.2.4標準物質(zhì)與測定方法的關系見下頁

決定性方法

用途：評價參考方法及一級參考物一級標準

用途：發(fā)展及評價參考方法，校正決定方法及參考方法，生產(chǎn)二級標準物質(zhì)參考方法

用途：為二級標準定值、評價常規(guī)方法（準確性、偏差、干擾因素）二級標準

用途：常規(guī)方法的工作標準及為質(zhì)控定值常規(guī)方法

用途：服務性實驗室的定量分析

質(zhì)控

用途：質(zhì)量控制6.3.3標準液配制標準液屬于二級標準物質(zhì)，其示值的準確性對檢驗質(zhì)量有重大影響，必須在標準物質(zhì)選者、恒重方法程序、基質(zhì)（包括水）的質(zhì)量、最優(yōu)化的配方和制備工藝上都要嚴格要求6.3.4一般注意事項（1）試劑規(guī)格要求（2）對水的要求（3）合理選用衡器和量器6.3.5配制方法方法：直接法與間接法（1）直接法①用固體溶質(zhì)配制試劑一般采用稱重法②用液體溶質(zhì)配制試劑采用容量法（2）間接法對于易失恒重或含量不準的液體試劑可采用間接配制法說明：（1）對多數(shù)原料配制時，需先烘干，烘干的溫度因物而已，多為105~110OC，烘干的標準是恒重，要置于干燥器冷卻后方能稱重，配制標準液所用的水質(zhì)要求較高；（2）從理論上講，作為臨床生化測定標準液最好采用與被測物質(zhì)相近的介質(zhì)-血清作為介質(zhì)，但因現(xiàn)在不能制備一級標準血清，故一般還采用水溶液作介質(zhì)。從發(fā)展的方向看，水溶液樣品必將被標準血清所取代。6.4酶校準物6.4.1酶校準物的使用方法使用酶校準物的方法就是用公認的酶校準物使一種或多種常規(guī)方法測定的結果與標準方法相同，也就是通過酶校準物將不同方法得出的結果的數(shù)值按標準物測定所選定的標準方法來表達。它是利用標準物作為載體，使測定結果數(shù)值在標準方法和常規(guī)方法見傳遞。這樣使用標準的校準物，就是可能統(tǒng)一測定結果。6.4.2公認酶校準物的來源有關公認的酶校準物的來源目前已有幾個國家和國際組織發(fā)表了測定酶催化活性的參考方法。歐洲標準局（BCR）和美國國家標準技術研究院（NIST）已經(jīng)研制出了某些酶的一級標準物（有證參考物，certifiedreferensematerialCRM或standardreferencematerialSRM）。推出的部分酶有證參考物（CRM）名稱代碼來源類型GGTCRM319豬腎ALPCRM371豬腎肝、骨、ALTCMR426豬心臟胞漿CKCRM299人胎盤LDCRM410人前列腺*保存條件為-20℃6.4.3使用酶校準物的優(yōu)點6.4.4制備溫度標準：以鎵的熔點（29.77OC）作為30OC標準。測定方法：以國際臨床生化學會（IFCC）推薦法為準。制備參考物：規(guī)定酶必須來源于人體或?qū)嶒炞C明于人體的酶極為相似，并純化達到一定要求。介質(zhì)必須是血清，最好是人血清。6.5脂類標準品─膽固醇標準參考物質(zhì)的制備6.5.1制備1.血清采集：采集健康人血液（膽固醇水平適當，即在5.2mmol/L），在無菌條件下分離血清，剔除溶血和乳靡血清。2.大量血清的混合：6.5.2定值6.6質(zhì)控血清的制備質(zhì)量控制血清的名稱來自英文controlserum6.6.1基礎物的選擇人血清最理想，但大量制備時血源有困難。國內(nèi)應用較多的為豬血清。要求：清澈、無肉眼可見的溶血；無肝炎和支原體的健康牛的血清，并測定布氏桿菌凝集試驗為陰性。6.6.2收集血清和分離血清血清的收集采血可用靜脈放血或屠宰動物時接血兩種方法分離血清方法（1）攪動血液直到血塊出現(xiàn)，用手拉出凝快，棄去纖維蛋白?？墒茄寮凹t細胞成游離狀態(tài)，離心沉淀時分離快；但注意不能過分攪動，要避免溶血可使血鉀含量升高。（2）待血液自然凝固后劃成小塊，使血清盡快自行析出。收集血清置大型離心機沉淀兩次，要除凈紅細胞等有形成分。操作過程盡量采用無菌技術并避免溶血。將血清置于-20~-50OC的低溫條件下冰凍24小時以上，取出在室溫中融化，增加凍融次數(shù)可減輕血清的濁度（7次）。另一方法是化學沉淀法。6.6.3加入及調(diào)節(jié)各成分質(zhì)控血清一般分為高、中和低濃度三種。測定血清中各成分的含量，根據(jù)需要進行透析除去小分子物質(zhì)，或用將血清稀釋后補加水溶性成分或酶等方法來制備不同濃度的血清。6.6.4過濾WHO材料介紹要進行微生物檢定。將除菌后所得的血清，1滴加入巰基乙酸鹽培養(yǎng)基中，置37OC；1滴加入胰酶水解大豆肉湯中，置25OC，1滴于血液瓊脂平板上劃線，置37OC。均經(jīng)48小時孵育，檢查有無細菌生長。8.6.5液體血清的保存

6.6.6分裝6.6.7貼瓶簽6.6.8儲存

6.6.9鑒定3.無菌檢察。4.含水量測定。6.6.10單項質(zhì)控血清的制備高脂質(zhì)控血清6.6.11對質(zhì)控血清的要求（1）均勻一致，瓶間差異小，不大于均數(shù)的0.5%，一般不致明顯影響分析的精密度。（2）穩(wěn)定，在有效期內(nèi)控制成分應穩(wěn)定不變或改變很小，不影響質(zhì)控的使用。（3）質(zhì)控成分應有一個適合的濃度，最好有三種不同濃度（低值、正常值、病理性高值）的質(zhì)控血清，且高濃度、低濃度分別應達到該項目分析范圍的上限和下限。用3種濃度的血清更容易發(fā)現(xiàn)分析范圍線性的變化，更準確的判斷系統(tǒng)誤差的性質(zhì)和大小。如僅有一種濃度時，應采用生理參考值上限偏高為宜。（4）一種控制血清的“控制”項目應包括常做的所有實驗項目?！?/p>

7.臨床化學試劑盒優(yōu)點:節(jié)約了實際、時間和勞動力，提高了實驗室的工作效率;保證實驗室結果的可靠;節(jié)約實驗時間。試劑盒的生產(chǎn)必須考慮到:使用方便及方便性、低干擾、質(zhì)量和結果的可靠性及成本—存在一個平衡關系，研制試劑盒時就要找到一個盡可能好的平衡點。對試劑盒的效期要求一般在半年以上。§

7.1試劑盒分類按物理性狀分：固體型（片劑型或干粉型，凍干型）；液體型；干片型按組合方式：單劑型；雙劑型；多劑型交叉組合分類：凍干單劑型；凍干雙劑型；液體單劑型；液體雙劑型7.1其他類型的試劑盒1.快速反應試劑盒2.一步試劑盒3.多項同測組合試劑盒4.卡式試劑盒5.濃縮試劑盒7.1液體雙試劑盒的特點1.提高了抗干擾反應的能力2.使試劑更科學合理3.穩(wěn)定性能良好4.試劑組分高度均一7.2臨床生化試劑盒的質(zhì)量控制7.2.1線性及線性范圍

7.2.2準確性主要測定回收率、質(zhì)控血清的定值、對照試驗劑干擾試驗7.2.3精密度

7.2.4抗干擾作用

7.2.5靈敏度7.2.6穩(wěn)定性穩(wěn)定性的指標有三個（1）原包裝試劑的穩(wěn)定性（2）復溶后試劑的穩(wěn)定性（3）不同溫度下保存期7.2.7正常參考范圍7.3常用臨床化學試劑盒配置所用的水均為二級交換水，化學試劑除特殊指定的外均為分析純，配制溫度為室溫，試劑在分裝前均需用2號沙芯漏斗過濾，除去不溶物質(zhì)。7.4試劑盒性能的評價7.4.1說明書審查7.4.2理學檢驗與評價

7.4.3性能指標的檢驗與評價§

8.試劑級水8.1自來水中污染物8.2實驗室用水分級

8.2.1美國NCCLS等級水的規(guī)定8.2.2GB6682-92分析實驗室用水等級標準美國NCCLS等級水的規(guī)定指標Ⅰ級Ⅱ級Ⅲ級微生物含量（CFU/ml）<10<103

未定pH未定未定5.0~8.0電阻率(MΩ.cm)25OC102.00.1硅酸鹽（SiO2mg/L）<0.05<0.1<1.0顆粒物質(zhì)0.2μm微孔膜過濾未定未定有機物質(zhì)活性碳過濾未定未定分析實驗室用水規(guī)格（GB6682-92）指標一級二級三級pH值范圍25

OC——5.0~7.