第三章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)

第三章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)韶關(guān)學(xué)院生科院易道生內(nèi)容掌握抗原抗體反應(yīng)的原理與特點(diǎn)，了解抗原抗體結(jié)合力和比例。掌握免疫組化（IHC）的原理和方法，熟悉一抗、二抗的選擇與使用。掌握酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）反應(yīng)的原理方法。掌握免疫印痕（Westernblot）的技術(shù)原理與方法。了界放射免疫檢測(cè)技術(shù)（RIA）的原理與方法。目標(biāo)：掌握ELISA、IHC、Westernblot的操作方法免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)就是利用抗原和抗體高度特異性結(jié)合的原理和方法，檢測(cè)分析各樣品中的目標(biāo)物質(zhì)，以監(jiān)控物品質(zhì)量、檢測(cè)機(jī)體免疫機(jī)能和診斷某些疾病的體外檢測(cè)方法。免疫檢測(cè)是微量檢測(cè)方法，靈敏、特異。隨著方法和技術(shù)的改進(jìn)，免疫檢測(cè)方法已滲入工、農(nóng)、食品、醫(yī)藥等各個(gè)領(lǐng)域。從20世紀(jì)50年代美國(guó)學(xué)者Berson和Yallow發(fā)明了放射免疫測(cè)定技術(shù)檢測(cè)胰島素起，免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)經(jīng)歷了從定性到定量；從常量分析到微量、超微量分析；從手工檢測(cè)到全自動(dòng)化；從單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)到高通量檢測(cè)等一系列長(zhǎng)足的進(jìn)步。本章主要學(xué)習(xí)血清學(xué)檢測(cè)方法——抗原抗體檢測(cè)方法。年代學(xué)者貢獻(xiàn)1894J.Bordet補(bǔ)體與溶菌活性1896H.Durham,M.vonGruber特異凝集反應(yīng)1896G.Widal,A.Sicad肥達(dá)試驗(yàn)1897R.Kraus沉淀試驗(yàn)1900J.Bordet,O.Gengou補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1900K.Landsteiner人類ABO血型及其抗體1906A.Wassermann梅毒補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1935M.Heidelberger,F.Kendall純化抗體,定量沉淀反應(yīng)1941A.Coons免疫熒光標(biāo)記1946J.Oudin凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)1948O.Ouchterlony,S.Elek雙擴(kuò)散沉淀反應(yīng)1953P.Grabar,C.Williams免疫電泳分析,Ig多樣性1960R.Yallow,S.Berson放射免疫標(biāo)記1966S.Avrames,J.Uriel,etal酶標(biāo)免疫技術(shù)1975G.Kohler,C.Milstein雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展史第一節(jié)免疫學(xué)檢測(cè)的基本原理抗原抗體反應(yīng)指抗原與相應(yīng)抗體間的特異性結(jié)合反應(yīng)。曾叫血清學(xué)反應(yīng)。

抗體結(jié)構(gòu)CCFcFabNNNNCC一、抗原抗體的特異性結(jié)合抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)，在體內(nèi)可介導(dǎo)溶細(xì)胞效應(yīng)、溶菌、中和病毒、促吞噬作用，形成一整套機(jī)體體液免疫功能。體外反應(yīng)有凝集作用、沉淀作用、調(diào)節(jié)作用、中和作用等。1、抗原抗體的互補(bǔ)性和親和性抗原抗體的結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）與抗體超變區(qū)分子間的互補(bǔ)性和親和性?；パa(bǔ)性指抗原表位的空間結(jié)構(gòu)與抗體分子超變區(qū)內(nèi)的抗原結(jié)合位點(diǎn)間的空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)嵌合。親和性指抗體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)與相應(yīng)抗原表位間互相適應(yīng)產(chǎn)生的吸引力?；パa(bǔ)性是Ag和Ab結(jié)合的基礎(chǔ)，親和性是Ag和Ab間固有的作用力。2、抗原抗體結(jié)合力抗原和抗體分子的結(jié)合可以是游離形式的，也可以結(jié)合在細(xì)胞表面。這種結(jié)合也是非共價(jià)鍵結(jié)合?？乖c抗體相互結(jié)合只局限于分子表面的特定部位，即抗原決定簇和抗體結(jié)合位點(diǎn)之間，且以親和力的作用方式結(jié)合在一起。由這些特定部位之間的短程分子力相互作用的結(jié)果。這些吸引力只有在極短的距離內(nèi)才有效。因此抗原決定簇與抗體結(jié)合位點(diǎn)在空間上必須處于緊密接觸狀態(tài)，才能產(chǎn)生足夠的結(jié)合力。這種分子間的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)決定了抗原抗體結(jié)合的專一性?？乖贵w間的作用力有：抗原抗體分子間的作用力，即親和力包括以下幾種：1、鹽鍵（離子鍵）2、范德華力3、疏水作用4、氫鍵3、親水膠轉(zhuǎn)化為疏水膠抗體和大部分抗原在溶液中是親水膠，不會(huì)聚沉。一旦破壞電荷和水化層，如Ag+Ab，減少電荷，由親水膠轉(zhuǎn)化為疏水膠，形成可見(jiàn)的Ag–Ab復(fù)合物沉淀。利用此沉淀反應(yīng)可檢測(cè)相應(yīng)的抗原或抗體。二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1、特異性抗原與抗體相互結(jié)合必須有空間構(gòu)型的互補(bǔ)性，因此，有很強(qiáng)的特異性。但，如果兩種抗原存在相同（似）的表位，或抗原、抗體間構(gòu)型有部分或全部相同，就可能出現(xiàn)交叉結(jié)合——凝集或沉淀。既可能干擾實(shí)驗(yàn)，也可以用于擴(kuò)大應(yīng)用范圍。2、比例性抗原（多價(jià)）抗體（2價(jià)或以上）不等價(jià)性，使抗原抗體反應(yīng)時(shí)存在比例關(guān)系，生成物的量與反應(yīng)物的量（濃度）有關(guān)。比例性：抗原抗體結(jié)合生成復(fù)合物的量與反應(yīng)物濃度的關(guān)系。只有2者分子比例合適，結(jié)合價(jià)相互飽和，才生成可見(jiàn)的復(fù)合物。在等價(jià)帶區(qū)的溶液中幾乎不存在游歷的抗原和抗體。滴度（效價(jià)）指抗原或抗體與一定量的對(duì)應(yīng)物產(chǎn)生明顯可見(jiàn)的反應(yīng)所需的最小量?？乖`抗體稿反應(yīng)點(diǎn)的等暴價(jià)帶也（zo胃ne策o余f杠eq糟ui燒va胳le震nc圾e）：曲線蘆的高裂峰部爬分，惑抗原床抗體桂分子縣比例很合適傘的范稼圍。在此唯范圍戀內(nèi)，極抗原限抗體悉充分直結(jié)合銅，沉廟淀物茄形成鞋快而杯多。最適救比（op忘ti義ma則l垮ra占ti機(jī)o）：其中菊有一追管反阻應(yīng)最本快，捐沉淀座物形辯成最碎多，撈上清字液中北幾乎購(gòu)無(wú)游來(lái)離抗捉原或怕抗體么存在內(nèi)，表回明抗懶原與偉抗體燈濃度勁的比認(rèn)例最把為合昆適。帶現(xiàn)停象（zo匹ne較p趕he傷no巴me突no白n）：等價(jià)紛帶前榜后分隙別為園抗體含或抗航原過(guò)蜜剩則奪無(wú)沉閱淀物資形成。前帶登（pr孝ez吳on皇e）：抗體傅過(guò)量后帶符（po追st判zo扒ne）：抗原樂(lè)過(guò)剩?？乖目贵w乖比例炒對(duì)反革應(yīng)現(xiàn)鑄象的逃影響3、可挑逆性抗原純抗體丟的結(jié)配合反炒應(yīng)是支一個(gè)?？赡嬉獾姆床顟?yīng)。Ag督+AbAg教-Ab高親遇和力使抗原濟(jì)表位炸和抗首體超燥變區(qū)遷的構(gòu)聚型非襖常適漿合，子結(jié)合博牢固慮，不櫻易解晴離。開(kāi)解離該取決些于：抗體晝對(duì)相在應(yīng)抗齡原的短親和娘力環(huán)境付因素聾對(duì)復(fù)嫂合物鞠的影當(dāng)響當(dāng)抗齊體與番抗原賀結(jié)合咬時(shí)，宇如果礎(chǔ)是顆送粒抗遇原，呼則出撕現(xiàn)凝冊(cè)集現(xiàn)證象；外如果謝是可替溶性串抗原滑，則盛產(chǎn)生吃沉淀脫作用吵。4、階度段性抗原袖抗體稿反應(yīng)肅被人笨為分倒為2階段檢。結(jié)合饞階段蓬：當(dāng)抗彎原與寬同型擔(dān)抗體霞相遇掛時(shí)，熔在合罵適條橫件下允，不行論彼摧此量擠的多僚少，烈都立短即發(fā)抹生特沃異性勝的結(jié)拔合形排成抗史原抗沖體復(fù)它合物楊，這極一過(guò)漂程通牲常只謙需要誦幾秒鄭的時(shí)準(zhǔn)間便堡可完竿成，閣稱為紐奉反應(yīng)足的一擦級(jí)階堪段。反應(yīng)窗階段估：在一泡級(jí)階掏段之滾后，必繼發(fā)舟出現(xiàn)易抗原評(píng)與抗封體間帝進(jìn)一佛步交株聯(lián)而運(yùn)形成印網(wǎng)絡(luò)包狀凝域集物遞，進(jìn)膊而出蟲(chóng)現(xiàn)可陸見(jiàn)的替凝集炕和沉蛋淀，借稱為揭反應(yīng)蹈的二培級(jí)階游段。儉這一駁階段雞是抗睛原抗駛體網(wǎng)勝格生魚(yú)長(zhǎng)的火階段難，速鄙率要改慢的曠多，陜且在營(yíng)很大燙程度合上依窯賴于欠溫度砍、離深子強(qiáng)伏度等堤外界掙條件斤，但祝更重慮要的困是需群要合煙適的世抗原百抗體考分子雖比例疤。只晴有當(dāng)機(jī)二者壩的結(jié)備合價(jià)朱彼此輔飽和眼時(shí)，兇才能萬(wàn)連接欺成一胸個(gè)大濾網(wǎng)格路樣凝厲集物混，出礎(chǔ)現(xiàn)凝楚集或售沉淀養(yǎng)。三、畜影響島抗原市抗體扔反應(yīng)饑的因腫素抗原業(yè)抗體冬自身桌因素抗原毫：理如化性濱狀墻決定侄簇種德類和酸數(shù)量抗體抄：來(lái)源峰：惕兔等湊，良馬愚、人貴單克乒隆抗算體濃度特異以性和縣親和方力2環(huán)境盾因素電解蜓質(zhì)Na+和C1－，可分姓別中勞和膠棒體粒祝子上出的電影荷，修使膠捕體粒偽子的身電勢(shì)恐下降詠，促套使抗劇原抗霉體復(fù)業(yè)合物往從溶稍液中純析出趣，形員成可毯見(jiàn)的胸沉淀漿物或鏟凝集象物。酸堿更度抗原最抗體匠反應(yīng)裂一般票在pH為6～8進(jìn)行葵。PH過(guò)高者或過(guò)期低都病將影揭響抗由原與仰抗體翅的理碗化性妨質(zhì)，年例如pH達(dá)到洞或接僵近抗烈原的自等電平點(diǎn)時(shí)疲，即沿使無(wú)榮相應(yīng)析抗體編存在憂，也邊會(huì)引鋸起顆胸粒性調(diào)抗原尚非特弄異性百的凝文集，惰造成輔假陽(yáng)姓性反炮應(yīng)。溫度溫度繩升高奴可加竹速分竹子運(yùn)凡動(dòng)，郊抗原章與抗虹體碰葬撞機(jī)犧會(huì)增右多，氣使反什應(yīng)加怕速。勿但若騙溫度她高于56周℃時(shí)，巧可導(dǎo)開(kāi)致已裁結(jié)合頭的抗怒原抗友體再魯解離奶，甚制至變笑性或補(bǔ)破壞佛；在40趕℃時(shí)，開(kāi)結(jié)合剝速度爪慢，菊但結(jié)第合牢虜固，衰更易竟于觀抹察。演常用袖的抗售原抗童體反罰應(yīng)溫淡度為37瓦℃。適當(dāng)孟振蕩/攪拌可促漲進(jìn)抗手原抗息體分疾子的找接觸情，加悼速反蛛應(yīng)AbAg高親和力AbAg低親和力特異日性結(jié)合景力的抓表示映方法親和擇力和糧親合型力低親合力高親合力Ag嘩-Ab反應(yīng)副的原淋理Ab過(guò)剩Ag過(guò)剩比例適當(dāng)，交聯(lián)成網(wǎng)絡(luò)Ag率-Ab反應(yīng)節(jié)的可報(bào)見(jiàn)性常見(jiàn)亂血清萍學(xué)檢羞測(cè)1.凝集貓反應(yīng)直接凝集反應(yīng)1:刑2稀釋軟待測(cè)芽血清1:朗4鍬1滋:8井1勺:1傻6細(xì)菌到、細(xì)迷胞等茂顆粒雄性Ag或表少面包帽被抗瘦原的幟顆粒多狀物費(fèi)質(zhì)與什相應(yīng)Ab在電販解質(zhì)陳存在蘆的情餅況下匯結(jié)合顫，出珠現(xiàn)肉邪眼可嚼見(jiàn)的蓋凝集剛團(tuán)現(xiàn)切象。玻片煌法試管挪法常用文于菌唐種鑒結(jié)定或AB廚O血型帽鑒定常用互于檢晝測(cè)抗蠻體的膽滴度斑或效趣價(jià)，桿見(jiàn)于繩臨床昏診斷街傷寒游或副柔傷寒次所用臘的肥晨達(dá)氏永反應(yīng)洪和診漿斷布碼氏菌泰病所腸用的釘瑞特妹試驗(yàn)產(chǎn)。間接烘凝集近反應(yīng)將可黨溶性Ag場(chǎng)/Ab先吸絹附在毅某些獻(xiàn)顆粒衛(wèi)載體哥上，曲形成奮致敏免顆粒姜，然建后再害與相炕應(yīng)Ab/A黃g進(jìn)行阻反應(yīng)腿產(chǎn)生睜凝集院，叫粱間接紋凝集撲反應(yīng)累。如圈將溶龜血毒甲素O吸附余于乳漠膠顆蓄粒上點(diǎn)的抗補(bǔ)“O”試驗(yàn)馳、人Ig論G作為Ag吸附樣于乳肝膠顆窄粒上見(jiàn)的類顫風(fēng)濕艷因子淹檢測(cè)預(yù)。凝集旅反應(yīng)匹常用姜于溶寸血性塔疾病傘的診罩?jǐn)啵?YYYYYYYYYYYY病人送的RB輛C體內(nèi)an烤ti貝-Rh由于澇抗體殲多屬度于Ig布G，分麥子量亂較小繁，抗陷體與魂紅細(xì)害胞間畝的結(jié)側(cè)合力筍不能派克服遺細(xì)胞懲間的忠排斥懲力，革不出武現(xiàn)凝住集+YYYYYYYYYYYYYYY體外紀(jì)加入托抗人Ig驗(yàn)G出現(xiàn)毀凝集浸現(xiàn)象滿，叫直接刃庫(kù)姆誦試驗(yàn)正常概人O型血護(hù)的Rh+的RB逮C+YYYY患者陸血清叉內(nèi)的警游離an乓ti疾-Rh+Y體外忍加入池抗人Ig次GYYYYYYYYYYYYYY出現(xiàn)國(guó)凝集徑現(xiàn)象乳，叫間接底庫(kù)姆盆試驗(yàn)2.沉淀患反應(yīng)AgAgAgAgAbingel單向侮免疫可擴(kuò)散Ag1AbAg2Ag3Ag4雙向雜免疫凝擴(kuò)散免疫身比濁過(guò)量AbAbAbAb毒素柏、組犧織浸剛液及張血清前中的祖蛋白蘋等可史溶性毯抗原粘與相挺應(yīng)抗鎮(zhèn)體反摩應(yīng)后爛，出查現(xiàn)肉終眼可碧見(jiàn)的畜沉淀貍物，畫(huà)稱為患沉淀致反應(yīng)院。沉已淀反儉應(yīng)可論在液潔體中多進(jìn)行薦，也瘋可在草半固兵體瓊團(tuán)脂凝典膠中閃進(jìn)行幸。鑒定校多種荒抗原植是完裝全相蜻同、噴部分罩相同志或完盯全不鄰?fù)糜谏翊_定目抗原謀濃度沉淀房誠(chéng)反應(yīng)—免疫幕電泳存在腥于不眠同區(qū)透域的渠抗原類與抗榜體結(jié)幻玉合，禍在比屢例適苦宜處臉形成飾沉淀懶弧。扁沉淀青弧的搖數(shù)量綠、位坑置和貧形狀猴與標(biāo)儉準(zhǔn)品雹相對(duì)岸比，謝可分歇析樣偏品的恨成分耍及其蕩性質(zhì)傲。第二昆節(jié)算免疫俯組織錄化學(xué)鉆檢測(cè)靠技術(shù)抗原您＋抗延體（飯?zhí)禺惏晷裕┓牛覆順?biāo)記串抗體呈，通濱過(guò)酶歸與底愿物作并用生凈成有禿色反梳應(yīng)物州，定火位組陰織或煌細(xì)胞吹內(nèi)抗錄原的借一門丑技術(shù)換。免疫戚組織竹化學(xué)：用傅帶標(biāo)年記物倦的抗僚體或惰抗原愛(ài)在組辮織細(xì)戒胞原屋位通雙過(guò)抗慈原抗屈體反級(jí)應(yīng)或雙組織住化學(xué)吐反應(yīng)廁，對(duì)軍相應(yīng)騙抗或彎抗體傲進(jìn)行泄定性歷、定潔量、被定位益測(cè)定角的技疑術(shù)。免疫返組化捧分類免疫攔組織贏化學(xué)年技術(shù)衣按照暮標(biāo)記椒物的順?lè)N類匯可分盲為：免疫宋熒光羨法免疫芒酶法免疫運(yùn)鐵蛋其白法免疫舒金法放射泊免疫石自顯堆影法按標(biāo)掘記抗釀體的費(fèi)方式許分：標(biāo)記紗抗體IH賤CT法非標(biāo)止記抗肆體IH的CT法非標(biāo)紛記抗嫌體IH野CT法的浮二抗低不被妻標(biāo)記誼，用該以免月疫動(dòng)艷物制北備抗得酶抗瘦體，喬以酶-抗體據(jù)再與芒二抗攀結(jié)合嚴(yán)。按染壯色步促驟分奴：直接陵法（養(yǎng)一步卸法）間接貧法（2步法聲或多符步法年）一、享檢測(cè)炊原理通過(guò)差免疫儉學(xué)中體抗原有抗體吊結(jié)合看反應(yīng)當(dāng)，用騰特異班性抗累體(單克威隆或探多克果隆)或抗秀原檢秩測(cè)組缸織、車細(xì)胞損內(nèi)相稈應(yīng)的務(wù)抗原河或抗久體物越質(zhì)，照形成含抗原-抗體友復(fù)合幅物；全利用仁此復(fù)察合物他上帶逗有預(yù)撞先標(biāo)巾記的譽(yù)標(biāo)記勢(shì)物，旱通過(guò)殺與標(biāo)幻玉記物灶相對(duì)劉應(yīng)的各檢測(cè)董系統(tǒng)挑，如早酶底痛物顯貼色反怎應(yīng)可鉆使之釀呈現(xiàn)噸某種脆顏色榴，從挖而可那檢測(cè)割組織撒細(xì)胞拿內(nèi)的磁抗原港，以鄰達(dá)到擁診斷椅、鑒必別診伍斷和債研究光的目綿的?？勺骺s慧為抗離原的蔬物質(zhì)遷有酶、劈燕受厭體、御抗仍體、脈細(xì)本胞外積基質(zhì)狠激素浙、溉細(xì)胞住結(jié)構(gòu)例蛋白暮、病峽原體當(dāng)。二、顧免疫遇標(biāo)記羊物顯補(bǔ)色原喂理免疫鍬酶測(cè)唐定法免疫因熒光溉技術(shù)放射責(zé)免疫謹(jǐn)測(cè)定揭法免疫鴿膠體般金技犧術(shù)①免氣疫酶釘測(cè)定氏法夾心司法EL挽IS掌A間接EL澆IS戰(zhàn)ABA犧S—錘EL兇IS預(yù)A利用晃生物維素和兼抗生深物素賠蛋白目為橋穩(wěn)梁微粒剃捕獲脅酶免鳳疫分叢析技叉術(shù)將已惰知特矮異性冤抗體肚致敏棵的免剖疫微窄粒與糠生物惹素、鳥(niǎo)親和項(xiàng)素、曲酶相友結(jié)合紛，最尺后酶奧作用適于熒嬸光底吩物發(fā)幼光，咐通過(guò)寄檢測(cè)霜熒光障強(qiáng)度賠判斷邊未知教抗原抱的含職量。a）b）免疫滅組化誦技術(shù)定位細(xì)、定政性、者定量獨(dú)檢測(cè)②免躲疫熒啞光技狠術(shù)海馬春細(xì)胞微管輸?shù)鞍琢＞G色(胞體塔、樹(shù)悼突)軸突澡終末振蛋白啊紅色(突觸)培養(yǎng)趨的成寬纖維刷細(xì)胞微管昂呈綠裙色撐核呈徑藍(lán)色③放擺射免初疫測(cè)刪定用放窮射性擁核素伸標(biāo)記容抗原土或抗參體進(jìn)腥行的叼免疫呼測(cè)定然。將警同位思素的命敏感走性與拆抗原離抗體冒結(jié)合灶的特糾異性博結(jié)合膝起來(lái)鐮，具岔有重麗復(fù)性查好、忘準(zhǔn)確訂性高忘等優(yōu)奮點(diǎn)，居廣泛放應(yīng)用糕于激延素、錫藥物幅等微性量物蝕質(zhì)的巷檢測(cè)已。常妄用的躺有13看1I、12績(jī)5I。④化高學(xué)發(fā)蔥光免醒疫技權(quán)術(shù)將化拿學(xué)發(fā)劇光分汽析和圈免疫逝反應(yīng)根相結(jié)捎合而迫建立啊的一宇種新撒的免禿疫分慘析技隆術(shù)。池最常暑用的艘發(fā)光共物質(zhì)累是魯嫁米諾含。靈敏鹽度高累、簡(jiǎn)柳便、擦可實(shí)赤現(xiàn)自象動(dòng)化旬分析內(nèi)。⑤免絞疫膠疏體金暴技術(shù)用膠揮體金蛛顆粒泳標(biāo)記Ab/A迅g，以糊檢測(cè)飾未知Ag匪/Ab的方兄法。氯金杠酸在脫還原擋劑作摧用下揉，可召聚合畏成特靜定大膚小的池金顆叫粒，且形成眼帶負(fù)竊電的嗽疏水騙膠溶懶液，雁因靜將電作望用而煉呈穩(wěn)史定的乳膠體鋸狀態(tài)宣。該技鼻術(shù)可西應(yīng)用卡于免溫疫組?；?光鏡塔下檢痛查)和免柳疫層唱析快凱速診鉆斷。⑥免篩疫印牽跡法-W幫es饒te運(yùn)rn勺b夢(mèng)lo世tt激in屠g三、濟(jì)標(biāo)記雁抗體激的特?fù)睃c(diǎn)與典應(yīng)用脊原理1、一痰級(jí)抗敘體（木第一絹抗體恥）希屬識(shí)碎別系隱統(tǒng)，任特異療性識(shí)露別來(lái)珍自樣索本的擇靶抗饑原。常用鞭單抗魂或多汪抗，五實(shí)驗(yàn)妄前-2較0濾℃—嫩-冤40翼℃保存越（1-潛2年有仗效）企，應(yīng)精用液4℃約一毯周。援一抗歉的使窩用濃質(zhì)度在回不同疑實(shí)驗(yàn)統(tǒng)中是旺不一則樣的軋，最飄佳用傷量需拳經(jīng)預(yù)少實(shí)驗(yàn)死確定蒸，一毅般選糾頂準(zhǔn)獸陽(yáng)性爬的稀腦釋度辰。2、二亂級(jí)抗棚體（快第二促抗體床）沃連接醒放大算和酶物標(biāo)顯癥色指成示系螺統(tǒng)的紹抗體蠻。屬道橋連院抗體看，一鉗手連泊一抗跨，一科手連臂標(biāo)志暢物（際酶）秀，根據(jù)佛一抗練的物蹈種來(lái)縣源選沫擇相逃應(yīng)的寒抗該銷物種岔的二葛抗。如要瀉在實(shí)膜驗(yàn)中陣同時(shí)填確定歇一抗堤、二夢(mèng)抗的退濃度鄭，最趟簡(jiǎn)單百的是雀方陣龍（棋含盤）偵滴定他法。3、非覺(jué)標(biāo)志江抗體IH蠶CT和放車大檢喂測(cè)系登統(tǒng)的芬應(yīng)用雕原理1）酶-抗酶持法（PA妨P）利用點(diǎn)酶聯(lián)洋抗體未將酶鴨與組臺(tái)織切敲片中搭抗原吵相結(jié)譯合，詞通過(guò)惕與適脊當(dāng)?shù)准奈锓粗?jǐn)應(yīng)（爸通常瞎是H2O2）以朗及二表氨基鞭聯(lián)苯楊胺(di混am蘆in冶ob準(zhǔn)en凝zi躍di銅neDA畢B)的顯胖色劑右，產(chǎn)四生一捷種不優(yōu)溶性阻棕色谷反應(yīng)若產(chǎn)物張。該兄法已宜被進(jìn)區(qū)一步松改進(jìn)判發(fā)展姿為更窯敏感掃的多愛(ài)級(jí)橋抬聯(lián)法量，后奶者利議于增醫(yī)加在蘋抗原指部位鏈反應(yīng)將產(chǎn)物挨的沉曲積。PA換P法是挨酶-酶抗逢體(P挑AP因)復(fù)合陳物（著常用籠辣根醉過(guò)氧毀化物鄰酶）議組成資的可殖溶性導(dǎo)復(fù)合江物為勒五環(huán)巾狀結(jié)寬構(gòu)，3個(gè)分凍子辣販根過(guò)巖氧化丸物酶凡和二特個(gè)抗妄體分姑子組掛成，鐘極為遇穩(wěn)定軋，比睬免疫味熒光吸法敏倡感10墻0-條10耍00倍，棵比酶譽(yù)橋法貸敏感20倍，浙其原汽理是提特異愚性初套級(jí)抗夫體（挨一抗勾）的Fa牙b段與染組織惱抗原蜓結(jié)合傳，二躺抗（予橋抗訓(xùn)）在膝一抗華與PA犧P復(fù)合喇物之鉗間形醫(yī)成分溉子橋亮聯(lián)（違此時(shí)放一抗走與PA桿P中的副免疫箭球蛋護(hù)必須骨是同癥一種世屬，潛以使械得衍首生自看其它僚種屬嫂的二題抗，兇對(duì)一癢抗分粘子PA展P中的FC段及茄穩(wěn)定撒成份痰都具穗有特溉異性摘），狗洗滌卷后用H2O2和DA憲B顯色腸，陽(yáng)駛性為環(huán)褐紅愉色，叼陰性茂無(wú)色勺。2）標(biāo)訪記的肆親和滋素-生物貿(mào)素法歷（LS察AB）生物軟素是腿一種懸低分起子量悟的維生楚素，可黃以與棵抗體采（二于抗）鈔共價(jià)裙結(jié)合蚊。親迷合素燭是一儉種從發(fā)卵白醫(yī)素中籍提取否的具判有4個(gè)生就物素真結(jié)合擁位點(diǎn)粉的糖星蛋白廁，借撐生物腔素與蓮親和肺素的麥結(jié)合謝，將償抗體牙與酶券相連道，這佛一特具性能泥使之梨成為灣多級(jí)詢免疫莖酶學(xué)店系統(tǒng)例各成匪分之推間的坑橋接內(nèi)物。19扮81年Hs浩u等人遍建立讀了抗體-生物慰素-親和州素-過(guò)氧接化物殖酶(Av持id錘iNBi盟ot歪iN債-p貧er齊ox摸id四as肥eCo平mp道le壘x洪AB暖C)系統(tǒng)。該紅方法黎是通蠢過(guò)生濾物素描相關(guān)瓦的次斑級(jí)抗殲體將遠(yuǎn)一抗把連接央到親其和素-生物范素-過(guò)氧餐化物伸酶復(fù)慘合物作上。比PA單P法敏黨感8-藍(lán)40倍，塘特異我性強(qiáng)乏、非辜特異失性背虛景著盤色低愚、方遭法簡(jiǎn)狹便、綱應(yīng)用啦廣。AB俱C系統(tǒng)表通過(guò)價(jià)將鏈企球菌散抗生量物素綢蛋白慎代替東親和黃素蛋雹白而古得到寬進(jìn)一轉(zhuǎn)步改辭進(jìn)，援稱為鏈球隔菌抗?fàn)T生物脫素蛋保白-生物受素系深統(tǒng)(St錫re毛pt蜘av倡id點(diǎn)iNbi島ot柄iNsy媽st泉em某S芳AB希)。鏈球防菌抗倘生物勾素蛋刑白在蚊生理PH環(huán)境柜中為藝電中君性，傷而不沸產(chǎn)生證非特香異性久結(jié)合蠅，而確抗生扁物素捷蛋白花在生匙理PH環(huán)境距中帶納正電浪荷。明應(yīng)用堅(jiān)抗生傘物素克蛋白-生物局素法桐時(shí)，總內(nèi)源喂性生魄物素娃能與性抗生杰物素伶蛋白-過(guò)氧刃化物雜酶復(fù)疲合物湯直接朗結(jié)合幻玉而產(chǎn)戶生非浪特異涼性或姑稱假胞陽(yáng)性限染色罰，避少免的廉方法拼可先歸通過(guò)需切片峽與游抬離抗牲生物柏素蛋村白反朝應(yīng)以造去除觸游離撲生物液素。葡萄叫球菌A蛋白(S回ta允ph藍(lán)yl錫oc炕oc贈(zèng)ca盜lpr偽ot價(jià)ei好NA格SP萬(wàn)A)是金世黃色鈴葡萄習(xí)球菌質(zhì)細(xì)胞堅(jiān)壁上疤的一練種蛋裂白成更分，單鏈止多肽魯，分階子量糧為42梨00漿0，SP匙A最大郊的特德點(diǎn)是牛能與匆不同晉種屬星血清巾中免娘疫球字蛋白棟分子芝穩(wěn)定FC段結(jié)姥合，丸此外揀還能誼與其蕉它物艘質(zhì)如融熒光恢素、已過(guò)氧仙化物杜酶、濫鐵蛋莫白、嚴(yán)膠體腰金等爹結(jié)合巖，并說(shuō)不影阻響其收生物適活性畝，因電此被椅用來(lái)倆發(fā)展祝為一粉種簡(jiǎn)痰便而陰迅速喬的免降疫過(guò)驕氧化曲物酶餡法，扇即用SP叢A代替PA互P技術(shù)述中的檔次級(jí)丑抗體令，因SP桑A可與提多種解動(dòng)物雕的抗悲血清陽(yáng)反應(yīng)寨，而珍不需斜因不鄉(xiāng)豐同種多動(dòng)物錘而制慚備相農(nóng)應(yīng)的拐第二縱抗體飄。SP役A可以選結(jié)合衡大多氧數(shù)Ig收G分子龜，可士以充率當(dāng)?shù)谘菀豢够俭w和漫衍生難自不感同種軟屬的喜抗過(guò)直氧化永物酶學(xué)抗體友的橋炮接物冶即SP陡A-過(guò)氧京化物否酶聯(lián)犬法。市同時(shí)祥由于SP奴A與FC段的除高親旱和力表可以忠減少捏非特元異性葬背景削染色杯。3）多移聚螯藏合物宣法將抗該體和HR冷P共同穗連接觸在葡銀聚糖賤聚合搭物上蠢，形抖成抗透體—多聚五化合野物—酶。每靈敏賠度高調(diào)，每嘆個(gè)聚碑合物涉有超逃過(guò)20個(gè)點(diǎn)項(xiàng)與一櫻抗結(jié)蹤蝶合。4、現(xiàn)蓮色系楊統(tǒng)主要鄰有DA淋B，AE妨C（3-氨基-9徑-乙基訴卡巴滅唑(A批EC崗)）均索以HR文P為供留氫體余。固紅仁，固劣藍(lán)，予氯藍(lán)棄四唑扛（NB謀T），渠以堿暮性磷妥酸酶哄為現(xiàn)碧色劑濟(jì)。四、富基本旁操作她過(guò)程全過(guò)義程為粉：抗梁原制筐備與血純化非；抗烈體制商備；私標(biāo)記于抗體郵制備咽；標(biāo)固本采哥集與灑制備題；免殼疫組蕩化反魂應(yīng)與粱現(xiàn)色刪；結(jié)扔果觀拜察與昆分析急。1、標(biāo)殼本采冰集與毅制備石蠟劈燕切片宰細(xì)嶄胞爬降片冰凍直切片體細(xì)績(jī)胞涂而片組織茂印片石蠟催切片芒過(guò)程置：取張材—固定—沖洗—脫水—透明—浸蠟—包埋—切片—貼片—烤片—脫蠟—復(fù)水—染色—脫水—透明—封藏群等步盲驟。組織迷標(biāo)本組織映標(biāo)本冰凍織切片州操作歷方法姜及技亞術(shù)要我點(diǎn)：①取科材，此未能注固定第的組云織取連材，顆不能弊太大羅太厚怖，厚冬者冰寬凍費(fèi)眨時(shí)，蘋大者潛難以拼切完即整，見(jiàn)最好容為24船×2擊4×次2m藝m。②取電出組刃織支泉承器飽，放蠟平擺饞好組適織，豪周邊兼滴上四包埋捧劑，府速放捎于冷棗凍臺(tái)倡上，懶冰凍內(nèi)。小森組織月的應(yīng)密先取竿一支家承器存，滴什上包乳埋劑好讓其筆冷凍催，形生成一母?jìng)€(gè)小斜臺(tái)后吩，再閘放上否細(xì)小壁組織價(jià)，滴差上包誓埋劑搜。③將凡冷凍郵好的絞組織系塊，幻玉夾緊慎于切月片機(jī)臉持承季器上澇，啟交動(dòng)粗勸進(jìn)退傍鍵，伙轉(zhuǎn)動(dòng)滴旋鈕妙，將慨組織都修平粒。④調(diào)雙好欲霜切的烤厚度滲，根螞據(jù)不怨同的房誠(chéng)組織連而定炕，原財(cái)則上令是細(xì)包胞密狐集的寺薄切嗚，纖臨維多昌細(xì)胞勤稀的溪可稍綠為厚恥切，慶一般肆在5～10館um間。要注也意的鋤是：①組繡織快顯大小名合適②選膛擇合蜜適的癢冷凍于度答未固完定過(guò)母的組苗織-1模0—測(cè)-1帖5℃，脾、劣腎、浴肌肉嗓等-1蟲(chóng)5—哀-2談0℃，含柿脂肪序組織-2鋸5—川-3奸0℃。③及爬時(shí)清磁除殘思余的蘇包埋現(xiàn)劑，孫防止曉撕裂侄組織抱。④組稈織塊伶無(wú)須辭固定⑤用扎于附壤貼切俗片的紹載玻帝片室慶溫存擺放，拴無(wú)須獻(xiàn)冷凍勝。⑥切到片不皇能馬偶上染匙色的挖可晾解干低寬溫冷悄藏，濫或置洽組織黑培養(yǎng)饒液內(nèi)傲。0-椅4繩℃保存唉。2、免曾疫化感學(xué)染錫色酶法也染色免疫風(fēng)熒光旅染色追標(biāo)稍本處滑理—熒光殿試劑—封片宗觀察一般勸為冰眉凍切撤片，倚石蠟鐵切片著效果盛差。免疫魂膠體考金染話色免疫菌金銀伏染色免疫環(huán)雙重/多重塘標(biāo)記院染色島同一愛(ài)切片情的同障一組帝織上滲同時(shí)紡顯示2種/以上短的抗口原成搬分，灰也稱永免疫端組化胖雙染教法。征要求2種抗貼原分頁(yè)布于厚細(xì)胞箱不同凈部位瓣。針勻?qū)故[原使互用不餃同顏懇色的析熒光攔素、償酶或傻不同裙直徑恢的顆虜粒。五、撒免疫對(duì)組化律的影殊響因柄素與膠對(duì)策1、非接特異師性著擠色由內(nèi)市源性易酶和旗生物芹素干怒擾余滅活營(yíng)酶，厚用親沒(méi)和素賀飽和到生物危素。電荷兵吸附BS蹦A或二染抗動(dòng)興物血待清封津閉非棵特異喪位點(diǎn)奴?？贵w錦原因抗體畏不純振或標(biāo)舌本含聾與靶界抗原出類似唱的表墻位。巡壽用單骨抗。洗滌賺不充眼分加去聯(lián)污劑弟等洗恨。DA守B不溶能性顆代粒未打除掉序而沉蔥積在衛(wèi)組織瓶上。制片她不當(dāng)賴壞死外、變鋪性、銹炎癥孕組織販、切睜片拱錘起、塘皺縮血、邊鉛沿缺帶損等想。二?？箘?dòng)體物血著清封紛閉或誰(shuí)重切帥。2、組創(chuàng)化染待色的衛(wèi)假陰盜性標(biāo)本雖保存啞不當(dāng)晨老舊劃標(biāo)本跟、固脂定不便當(dāng)或畝固定或時(shí)間鵲太長(zhǎng)稀、溫潛度過(guò)煎高等細(xì)，改鄉(xiāng)豐善條公件，畜重做遠(yuǎn)?？贵w鳥(niǎo)等試津劑質(zhì)昨量差母滴度倍、純碼度、榆特異癥性或妥保存翁不當(dāng)瓦，更同換新將試劑谷再做燭。操作側(cè)失誤盾嚴(yán)格遙按操夜作規(guī)爺程作中。3、雜凡音免疫撇組化膊中的茂非正患常的平背景更著色卵。常見(jiàn)云于抗積體濃演度過(guò)帥高、掀切片艦粘貼書(shū)不牢洪，邊姥沿松肌動(dòng)等第三休節(jié)配免疫棟印跡損技術(shù)19攪79年Re醒na唉rtan新dTo曠wb呼in將So芝ut尖he拍rn旅b扣lo朋tt紫in心g技術(shù)表應(yīng)用趴與蛋券白質(zhì)申研究冰，并娃與酶貴免疫挽技術(shù)役結(jié)合虹建立鴨的蛋鐮白檢編測(cè)技泛術(shù)。靈敏耕度高翠，1-碎5ng。簡(jiǎn)輔單、鎮(zhèn)快速民、經(jīng)簡(jiǎn)濟(jì)。目前拼，廣廚泛用疏于蛋柏白質(zhì)責(zé)相互到作用恭研究脹和抗孕原性菌研究順。一、今原理加：蛋白光質(zhì)組隔分經(jīng)SD竭S-衛(wèi)PA獄GE分離暮后，荒平行往轉(zhuǎn)移仇到固籃相支歲持體勸（NC膜或PV逝DF膜）豎上，勝通過(guò)疲免疫旱試劑濤來(lái)檢污測(cè)靶戚蛋白熔。浸泡塔式電等轉(zhuǎn)移源的條對(duì)件溫編和，綢對(duì)蛋拴白樣傲本損僚失較魂小，缺點(diǎn)餐是耗含時(shí)長(zhǎng)隸，需艱大量辛緩沖鍵液；例半干踐式電番轉(zhuǎn)移解時(shí)間短，尊但有輛可能烈損傷盛樣品膨。今瞞天采橋取浸藝泡式紛電轉(zhuǎn)蟻移。靶蛋衡白的康檢測(cè)凳通常悶采用筆兩步翼法或諷間接豬法，榆用一糖抗結(jié)合靶油蛋白院，再濱用過(guò)叨氧化御物酶茄（HR蔑P）標(biāo)記賠的二盜抗結(jié)合率一抗舒，然糊后HR聲P催化秤化學(xué)鳥(niǎo)顯色耗反應(yīng)注或化惕學(xué)發(fā)光反腫應(yīng)。調(diào)當(dāng)前悲多采歷取化忠學(xué)顯油色反攪應(yīng)。免疫戶學(xué)檢起測(cè)封閉加一計(jì)抗網(wǎng)洗膜加二限抗洗膜加底印物試驗(yàn)耀記錄搖育撫過(guò)夜搖育解2h（3旋次，掉每次子10mi遇n嬸）搖育沒(méi)1h二、亭操作陶過(guò)程1.斥S勵(lì)DS糊-P香AG池E電泳2.電轉(zhuǎn)彼移：將冷脈卻管怕接上燈水龍銳頭，販接上拒電源湯，根旨據(jù)凝宿膠面免積調(diào)抗節(jié)電命流（0.弦65丑mA蚊/c筒m2），時(shí)間2小時(shí)蹄。3.電轉(zhuǎn)敞移結(jié)舞束后池，打嚴(yán)開(kāi)夾的板，榆剪下NC膜左址右上殺角做洋標(biāo)記誘（即券標(biāo)記本有蛋澇白結(jié)胸合面豎）。滔然后農(nóng)把NC膜分厭為兩帳份，鏟其中叉一份萄放入童氨基砍黑染擱色液卸中染是色30～60秒，10％乙滑酸漂燥洗，門觀察滴膜上嗓有無(wú)顏蛋白芳條帶徑。如果撓有，莫可用凝另一誼份繼索續(xù)以貪下的川實(shí)驗(yàn)礙。4.封閉季：（將NC膜上拜無(wú)蛋鋤白結(jié)坊合處腎封閉哥，防拿止探營(yíng)針的晌非特凱異性業(yè)結(jié)合憶）在競(jìng)一培被養(yǎng)皿澇內(nèi)倒撥入封冷閉液春（5％脫般脂奶克粉）作，將囑未染鏟色的NC膜放槽入浸剛泡，用室溫區(qū)放置1小時(shí)灑。5.探針壓結(jié)合昨：封奪閉結(jié)村束后宇，用PB脈S漂洗嬌一次狠。倒疲干PB脊S后，屢加入HR辜P標(biāo)記貍羊抗稿鼠Ig驕G稀釋渡液，37oC孵育1小時(shí)捏。6.孵育移完成垂后，PB堵S漂洗介三次掃（每來(lái)次浸樸泡3分鐘蜻），侵將未腫結(jié)合營(yíng)探針燙盡可雨能洗賞掉。延倒干PB克S后，圓加入貞底物然工作任液，貨避光爪顯色10分鐘蔬，觀讀察顏?zhàn)枭冡t(yī)化。三、肢影響膝因素岔與對(duì)紅策1、影賣響SD茫S-導(dǎo)PA便GE的因接素2、影息響蛋旨白轉(zhuǎn)抵移的繭因素幕轉(zhuǎn)移仗膜的姨活化行與大綠小、語(yǔ)緩沖邪液、別是否櫻平整有、有包無(wú)氣應(yīng)泡、熄電壓拋、溫爺度、棄轉(zhuǎn)移嶼時(shí)間錢等。3、封躁閉窮封墓閉試排劑濃鍛度不枯能過(guò)狐高過(guò)冒低。4、顯駁色譯設(shè)棍立陰限陽(yáng)性賭對(duì)照裂，DA稍B顯色仁后立四即照扒相，喊否則朗易腿候色。酶免義疫技燭術(shù)按舊目的分類（一協(xié)）酶養(yǎng)免疫劣組織返化學(xué)闊測(cè)定久技術(shù)（二拔）酶暢免疫棚測(cè)定到技術(shù)Ab*＋Ag暢→Ab*A洋g＋Ab*Ab＋Ag相*狀→Ab族Ag*＋Ag若*（1）Ho肅mo敲ge畜no晝us（均殺相測(cè)談定）（2）He國(guó)te幣ro舌ge氏no亭us（異涂相測(cè)鏟定）——旬S想ol堆id要p耳ha錘se——謝li麻qu滿id恭p腳ha秩se第四會(huì)節(jié)酸酶聯(lián)拌免疫復(fù)檢測(cè)血技術(shù)一、EL毫IS捎A的基取本原繪理EL疤IS藥A(臂En森zy和me-L身in呈ke得dim姨mu揭no天so虹rb很en舊tas柳sa果y)的基攝礎(chǔ)是免抗原豈或抗果體的授固相糾化及晝抗原蕉或抗比體的厭酶標(biāo)鴨記。灶這一付方法孩的基屋本原銀理如往下。（1）使獸抗原真或抗績(jī)體結(jié)狼合到淡某種壁固相侄載體柴表面洋，并源保持藍(lán)其免煌疫活躁性；（2）使續(xù)抗原留或抗基體與政某種昨酶連拒接成危酶標(biāo)惱抗原落或抗威體，傻這種就酶標(biāo)秩抗原浴或抗嘴體既擴(kuò)保留組其免蛾疫活許性．?dāng)⒂直Ｌ蚜裘冈斓幕顗|性。二、則基本守操作索流程測(cè)定橡抗原僚常用席雙抗引體夾冶心法未，測(cè)頭定抗尚體用狂間接哭法。基本截過(guò)程為：固相馬包被驗(yàn)（吸卵附已如知成播分、疼洗滌嚇、封鑼閉、偵洗滌鑼）加待飛測(cè)樣糾品妥促反穩(wěn)應(yīng)內(nèi)洗濫滌僑加酶腎結(jié)合狼物促反蓄應(yīng)廢洗屆滌狹加瓣酶底姓物宮促反國(guó)應(yīng)替終蘭止反逗應(yīng)測(cè)定思（比偉色、躍熒光饒）EL幅IS奪A的類善型：EL鋪IS艦A可用斧于測(cè)料定抗訊原，識(shí)也可毒用于兼測(cè)定換抗體肯。用預(yù)于這撤些目舍的的粥檢測(cè)線方法宇主要森有以叛下幾搬種類夏型。1雙抗尖體(原)夾心兩法2間接筑法3競(jìng)爭(zhēng)豈法4雙位扭點(diǎn)一斷步法5捕獲棗法測(cè)Ig激M抗體6應(yīng)用杠親和慮素和勉生物煎素的EL傻IS世AEL惹IS奶A的類利型EL攀IS然A可用苗于測(cè)弊定抗曠原，選也可獄用于巨測(cè)定授抗體來(lái)。在位這種死測(cè)定等方法拘中有煉三個(gè)辭必要銅的試槍劑：（1）固拉相的驚抗原略或抗據(jù)體，毯即"免疫石吸附灰劑"（im緊mu刻no世so莖rb販en覆t）；（2）酶標(biāo)付記的惡抗原噸或抗瘦體，沫稱為"結(jié)合循物"（co體nj殼ug依at臘e）；（3）酶反叮應(yīng)的遣底物喚?？稍O(shè)貞計(jì)出辭各種榴不同悠類型匪的檢衡測(cè)方圾法。1、夾筒心法過(guò)程旁：包伐被勉加待廢測(cè)樣虜品喬洗之滌騎加酶插標(biāo)記饑物批洗滌加底美物雖測(cè)定1）雙敲抗體柄夾心覺(jué)法測(cè)穗抗原此法擠適用異于檢濃驗(yàn)各拴種蛋困白質(zhì)手等大塊分子債抗原鬧（二洋價(jià)及噸以上押），羊例如HB售sA差g、HB屋eA駱g、AF怨P等。晴只要宇獲得堆針對(duì)耀受檢佳抗原厘的異蓄性抗蠻體，仇就可嘴用于博包被歉固相匠載體裙和制負(fù)備酶借結(jié)合滲物而切建立儉此法拴。2）雙販抗原昂夾心滴法測(cè)皇抗體用特姓異性變抗原趴進(jìn)行貪包被獸和制腹備酶架結(jié)合湖物。恭此法掙中受鋼檢標(biāo)漿本不轎需稀拾釋，廢可直奏接用胞于測(cè)籃定，抄因此崗其敏牲感度轎相對(duì)個(gè)高于嶄間接濤法。茂乙肝特標(biāo)志對(duì)物中宣抗HB占sA耍g的檢測(cè)該常采邪用本夾法。論本法腳關(guān)鍵屈在于冰酶標(biāo)單抗原迫的制付備，因應(yīng)根捏據(jù)抗頭原結(jié)荷構(gòu)的聾不同膚，尋內(nèi)找合乖適的野標(biāo)記絡(luò)方法咬。2、間濫接法堡測(cè)抗忌體1）間融接測(cè)河抗體地法傳染杯病的懶診斷惑。間悟接法付的優(yōu)縣點(diǎn)是外只要還變換陽(yáng)包被赤抗原球就可受利用累同一臟酶標(biāo)淹抗抗兵體建摧立檢神測(cè)相仙應(yīng)抗征體的彈方法悄。2）間侍接測(cè)酷抗原霧法3、雙傅位點(diǎn)物一步代法測(cè)定近抗原由雙沾抗體杠夾心碗改進(jìn)唱而來(lái)拉，將逃雙抗凳體夾順心中吧針對(duì)寸同一羨抗原貌決定昨簇的2種抗誓體改昆為針柳對(duì)抗豆原不看同決茅定簇疑的2種單輩抗。評(píng)敏感灶性和費(fèi)特異棒性大趟為提濫高。但抗軟原過(guò)陳量，Ag分別命與固爭(zhēng)相抗鐘體和肝酶標(biāo)霧抗體蝦結(jié)合款，抑昂制夾比心復(fù)倦合物色形成材，出章現(xiàn)所控謂鉤蜜狀效討應(yīng)，惰甚至制假陰設(shè)性結(jié)性果。過(guò)程手：Ab柿1包被苗加待鍵測(cè)樣偶品和尊酶標(biāo)Ab器2洗滌披底愚物也可籍用雙寨抗原絡(luò)夾心蔽測(cè)抗邁體4、競(jìng)彎爭(zhēng)法貢測(cè)抗挎體過(guò)程忍：將集待測(cè)支抗體厭（原居）同投時(shí)加謝入包燃被孔爺，洗稻滌除校去酶漁標(biāo)記直物，賤加底瞧物測(cè)鄭定。用于絲式測(cè)定且只有怪一個(gè)惜決定意簇的秘小分墾子抗得原或池半抗扇原，作當(dāng)抗祥原材岸料中麥的干藏?cái)_物雀質(zhì)不妄易除沈去，防或不乎易得知到足售夠的模純化韻抗原穗時(shí)，史可用錘此法柜檢測(cè)杠特異墻性抗慨體。競(jìng)爭(zhēng)犧法測(cè)料抗原小分茅子抗頁(yè)原或路半抗販原缺皂乏可跌作夾緒心法銹的兩起個(gè)以崗上的位點(diǎn)，因趟此不箏能用賓雙抗傅體夾慣心法戒進(jìn)行崖測(cè)定剛，可轉(zhuǎn)以采疏用競(jìng)捕爭(zhēng)法閑模式鉤。其炮原理患是標(biāo)滲本中地的抗金原和配一定址量的摸酶標(biāo)逃抗原淡競(jìng)爭(zhēng)嗚與固謎相抗胳體結(jié)立合。棚標(biāo)本拆中抗撐原量朽含量辯愈多我，結(jié)中合在妙固相召上的婚酶標(biāo)兩抗原省愈少吵，最瘡后的傍顯色吧也愈溪淺。位小分曲子激赤素、待藥物斧等EL椒IS妨A測(cè)定孟多用帶此法距。競(jìng)爭(zhēng)EL坦IS倡A檢測(cè)焦抗蜻原5、