抗生素檢驗(yàn)知識(shí)培訓(xùn)資料供參考

提綱一、抗生素定義及分類二、微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)三、抗生素微生物檢定法目前一頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第一部分：抗生素定義與分類抗生素：抗生素（antibiotics）是某些細(xì)菌、放線菌和真菌等微生物的次級(jí)代謝產(chǎn)物，在低微濃度下對(duì)各種病原性微生物具有殺滅或抑制作用的物質(zhì)。主要是指通過(guò)傳統(tǒng)發(fā)酵工藝直接獲得的抗生素和部分或完全由人工合成的與天然抗生素具有同種作用的物質(zhì)。初級(jí)代謝：微生物從外界吸收各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，通過(guò)分解代謝和合成代謝，生成維持生命活動(dòng)所必需的物質(zhì)和能量的過(guò)程，稱為初級(jí)代謝。次級(jí)代謝：某些生物為了避免在初級(jí)代謝過(guò)程某種中間產(chǎn)物積累所造成的不利作用而產(chǎn)生的一類有利于生存的代謝類型。目前二頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第一部分：抗生素定義與分類

隨著抗生素研究工作的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)抗生素的來(lái)源更加廣泛，其作用也更加廣泛，其來(lái)源包括微生物產(chǎn)生的物質(zhì)、高等動(dòng)植物產(chǎn)生的代謝物和用化學(xué)方法合成或半合成的化合物；其性能包括抗細(xì)菌的物質(zhì)、抗病毒的物質(zhì)、抗寄生蟲(chóng)的物質(zhì)和抗原蟲(chóng)的物質(zhì)等，甚至抗腫瘤的藥物都屬于抗生素的范疇。

目前三頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第一部分：抗生素定義與分類抗微生物藥：一、β-內(nèi)酰胺類：

（一）青霉素類

包括青霉素鈉、青霉素鉀、氨芐西林、氨芐西林鈉、海他西林、阿莫西林、阿莫西林鈉、苯唑西林鈉、氯唑西林鈉、芐星氯唑西林、普魯卡因青霉素、芐星青霉素等。

（二）頭孢菌素類

包括頭孢噻呋、鹽酸頭孢噻呋、頭孢噻呋鈉、頭孢氨芐、頭孢維星鈉、硫酸頭孢喹肟等?？股胤诸惸壳八捻?yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第一部分：抗生素定義與分類二、氨基糖苷類：包括：硫酸鏈霉素、硫酸雙氫鏈霉素、硫酸卡那霉素、硫酸慶大霉素、硫酸新霉素、鹽酸大觀霉素、硫酸大觀霉素、硫酸慶大小諾霉素、硫酸安普霉素等。目前五頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)三、四環(huán)素類：包括土霉素、鹽酸土霉素、四環(huán)素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸金霉素、鹽酸多西環(huán)素等。第一部分：抗生素定義與分類目前六頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)四、大環(huán)內(nèi)酯類：包括紅霉素、乳糖酸紅霉素、硫氰酸紅霉素、吉他霉素、酒石酸吉他霉素、泰樂(lè)菌素、酒石酸泰樂(lè)菌素、磷酸泰樂(lè)菌素、酒石酸泰萬(wàn)菌素、替米考星、泰拉霉素等。第一部分：抗生素定義與分類目前七頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)五、酰胺醇類包括甲砜霉素、氟苯尼考等。第一部分：抗生素定義與分類目前八頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)六、林可胺類主要有鹽酸林可霉素、鹽酸吡利霉素等。第一部分：抗生素定義與分類目前九頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)七、多肽類包括硫酸黏菌素、桿菌肽鋅、亞甲基水楊酸桿菌肽、恩拉霉素、維吉尼霉素、那西肽等。第一部分：抗生素定義與分類目前十頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)八、多糖類包括阿維拉霉素、黃霉素等。第一部分：抗生素定義與分類目前十一頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)九、其他：

包括延胡索酸泰妙菌素、泰妙菌素、鹽酸沃尼妙林、賽地卡霉素等。第一部分：抗生素定義與分類目前十二頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)抗寄生蟲(chóng)藥：一、抗蠕蟲(chóng)藥（抗線蟲(chóng)藥）

包括伊維菌素、阿維菌素、乙酰氨基阿維菌素、多拉菌素、越霉素A、潮霉素B等。二、抗原蟲(chóng)藥（抗球蟲(chóng)藥）包括莫能菌素、莫能菌素鈉、鹽霉素鈉、拉沙洛西鈉、甲基鹽霉素、馬杜米星銨、海南霉素鈉、賽杜霉素鈉等。第一部分：抗生素定義與分類目前十三頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)一、名稱解釋1.消毒（disinfection）：殺死物體上或者環(huán)境中病原微生物并不一定殺死細(xì)菌芽胞或非病原微生物的方法。通常用化學(xué)的方法來(lái)達(dá)到消毒的作用。2.滅菌（sterilization）：是指把物體上所有的微生物（包括細(xì)菌芽孢在內(nèi)）全部殺死的方法。通常用物理方法來(lái)達(dá)到滅菌的目的。目前十四頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)3.抑菌（bacteriostasis）：抑制人體內(nèi)部或外部細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的。4.防腐（antisepsis）：是指防止或抑制微生物生長(zhǎng)繁殖的方法。5.無(wú)菌（asepsis）：不存在任何活菌。第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前十五頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)6.無(wú)菌操作：防止細(xì)菌進(jìn)入機(jī)體或其他物品的操作技術(shù)，稱為無(wú)菌操作。7.清潔：能減少微生物附著在無(wú)機(jī)物體表面的數(shù)量的方法。8.凈化：能顯著減少或破壞一定空間中微生物數(shù)量和生物活性的方法。第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前十六頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)二、消毒滅菌抑菌防腐方法：

1.物理法

2.化學(xué)法

3.生物學(xué)第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前十七頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)1.物理法

1）熱力滅菌法①干熱滅菌法②濕熱滅菌法焚燒巴氏消毒法燒灼煮沸法干烤高壓蒸氣滅菌法紅外線第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前十八頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)濕熱滅菌效果好于干熱滅菌，原因如下：①濕熱情況下菌體蛋白容易凝固;②濕熱穿透力比干熱大；③濕熱的蒸汽具有潛熱。第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前十九頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)2）紫外線原理：利用適當(dāng)波長(zhǎng)的紫外線能夠破壞微生物機(jī)體細(xì)胞中的DNA（脫氧核糖核酸）或RNA（核糖核酸）的分子結(jié)構(gòu)，造成生長(zhǎng)性細(xì)胞死亡和（或）再生性細(xì)胞死亡，達(dá)到殺菌消毒的效果。特點(diǎn)：①穿透力比較差。普通玻璃、紙張、塵埃等均可阻擋紫外線，因此它只適用于空氣消毒或物體表面的消毒。②紫外線可損傷皮膚、眼睛，使用時(shí)應(yīng)注意防護(hù)。第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前二十頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)3）濾過(guò)除菌法4）超聲波殺菌法5）干燥與低溫抑菌法第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前二十一頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)2.化學(xué)法

化學(xué)消毒劑：迅速殺滅病原微生物的化學(xué)藥物。如：二氧化氯、戊二醛等。防腐劑：抑制病原微生物生長(zhǎng)繁殖的化學(xué)藥物。如：苯甲酸鈉、山梨酸鉀、脫氫乙酸鈉等?；瘜W(xué)治療劑：用于治療傳染病的化學(xué)藥物，可選擇性地作用于細(xì)菌代謝不同環(huán)節(jié)，殺滅或抑制病原菌，對(duì)宿主無(wú)毒或很低，如異煙肼、無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷等。第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前二十二頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)3.生物學(xué)法1）抗生素臨床治療2）細(xì)菌素為微生物代謝產(chǎn)物，破壞同源性細(xì)菌。3）噬菌體感染細(xì)菌、真菌、放線菌、螺旋體等微生物的病毒。4）中草藥第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前二十三頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)三、影響消毒滅菌效果的因素1.消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間：各種消毒劑的理化性質(zhì)不同，對(duì)微生物的作用大小也差異。例如表面活性劑對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的滅菌效果比對(duì)革蘭氏陰性菌好，龍膽紫對(duì)葡萄球菌的效果特別強(qiáng)。同一種消毒劑的濃度不同，其消毒效果也不一樣。大多數(shù)消毒劑在高濃度時(shí)起殺菌作用，低濃度時(shí)則只有抑菌作用。在一定濃度下，消毒劑對(duì)某種細(xì)菌的作用時(shí)間越長(zhǎng)，其效果也越強(qiáng)。若溫度升高，則化學(xué)物質(zhì)的活化分子增多，分子運(yùn)動(dòng)速度增加使化學(xué)反應(yīng)加速，消毒所需要的時(shí)間可以縮短。2.微生物的污染程度：微生物污染程度越嚴(yán)重，消毒就越困難，因?yàn)槲⑸锉舜酥丿B，加強(qiáng)了機(jī)械保護(hù)作用。所以在處理污染嚴(yán)重的物品時(shí)，必須加大消毒劑濃度，或延長(zhǎng)消毒作用的時(shí)間。第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前二十四頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)3.微生物的種類和生活狀態(tài)：不同的細(xì)菌對(duì)消毒劑的抵抗力不同，細(xì)菌芽胞的抵抗力最強(qiáng)，幼齡菌比老齡菌敏感。4.環(huán)境因素：當(dāng)細(xì)菌和有機(jī)物特別是蛋白質(zhì)混在一起時(shí)，某些消毒劑的殺菌效果可受到明顯影響。5.溫度、濕度、酸堿度：消毒速度一般隨溫度的升高而加快，所以溫度越高消毒效果越好。濕度對(duì)許多氣體消毒劑有影響。酸堿度的變化可影響劑殺滅微生物的作用。例如，季胺鹽類化合物的戊二醛藥物在堿性環(huán)境中殺滅微生物效果較好；酚類和次氯酸鹽藥劑則在酸性條件下殺滅微生物的作用較強(qiáng)。6.化學(xué)拮抗物陰離子表面活性劑：可降低季胺鹽類和洗比泰的消毒作用，因此不能將新潔爾滅等消毒劑與肥皂、陰離子洗滌劑合用。第二部分：微生物試驗(yàn)相關(guān)知識(shí)目前二十五頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第三部分：抗生素微生物檢定法一、概述：抗生素微生物檢定法是利用抗生素在低微濃度下有選擇地抑制或殺死微生物的特點(diǎn)，以抗生素的抗菌活性為指標(biāo)，來(lái)衡量抗生素中的有效成分效力的方法。該方法是與臨床要求相符，更能確定抗生素的臨床醫(yī)療價(jià)值。目前二十六頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)

抗生素微生物檢定法分為稀釋法、濁度法和瓊脂擴(kuò)散法（管碟法），每種方法的試驗(yàn)操作差別較大，但相同之處都是將標(biāo)準(zhǔn)和供試品兩者的抗菌效力比較。稀釋法：通過(guò)觀察不同濃度的抗生素抑制試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)情況，從而測(cè)定抗生素最低抑菌濃度。常用于新藥研制及臨床藥敏試驗(yàn)。第三部分：抗生素微生物檢定法目前二十七頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)濁度法：采用分光光度法測(cè)定不同濃度的抗生素抑制試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)情況（混濁程度），從而測(cè)定抗生素抑菌效力的方法。該方法國(guó)外使用較為普遍，而且快速（3-4小時(shí)），《中國(guó)獸藥典》（2010年版）收載了該方法，且有18個(gè)品種在含量測(cè)定中收載了濁度法。如慶大霉素、鏈霉素、紅霉素、大觀霉素、安普霉素、泰樂(lè)菌素。第三部分：抗生素微生物檢定法目前二十八頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)

瓊脂擴(kuò)散法(管碟法）：是使用固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)基凝固前，將試驗(yàn)菌混進(jìn)去，采用一定的方法，將含有抗生素的物質(zhì)與含菌的培養(yǎng)基表面接觸。目前，國(guó)際上采用將抗生素加入到特定的小鋼管中，使小鋼管中的抗生素與培養(yǎng)基表面接觸，此方法稱為“管碟法”。經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，由于抗生素不斷向培養(yǎng)基中擴(kuò)散，凡抑菌濃度能到達(dá)之處，試驗(yàn)菌不能生長(zhǎng)，從而形成透明的抑菌范圍，此范圍一般都呈圓形，稱為“抑菌圈”。第三部分：抗生素微生物檢定法目前二十九頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)目前三十頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)二、管碟法材料、儀器及試劑的準(zhǔn)備及基本要求

1、操作間：要求凈化級(jí)別達(dá)到萬(wàn)級(jí)，安裝紫外線殺菌燈，安裝空調(diào)設(shè)備，能控制室溫在20-25度之間。第三部分：抗生素微生物檢定法目前三十一頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)2、雙碟為硬質(zhì)玻璃或塑料培養(yǎng)平皿，內(nèi)徑約90mm，高16-17mm，碟底厚度均勻一致。使用前應(yīng)清洗干凈后置150℃-160℃干熱滅菌2小時(shí)或者121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘。第三部分：抗生素微生物檢定法目前三十二頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)3、陶瓦蓋內(nèi)徑約103mm，外徑108mm，平坦，吸水性強(qiáng)，應(yīng)定期清洗、干燥。第三部分：抗生素微生物檢定法目前三十三頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)

4、鋼管（牛津杯）每次使用后應(yīng)置1：1000新潔爾滅溶液內(nèi)浸泡2個(gè)小時(shí)以上，進(jìn)行滅菌后再進(jìn)行洗滌，在150℃-160℃干熱滅菌2小時(shí)備用。使用同一批次的鋼管。鋼管內(nèi)外壁要求清潔光滑，兩端面應(yīng)平坦光潔，管壁應(yīng)厚薄一致，重量差異不超過(guò)0.05g第三部分：抗生素微生物檢定法目前三十四頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)目前三十五頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)5、鋼管放置器：有全自動(dòng)和半自動(dòng)之分，一般為四孔，要求鋼管下落時(shí)應(yīng)垂直平穩(wěn)、位置正確。應(yīng)定期用75%酒精擦拭。如果沒(méi)有鋼管放置器，也可用干熱滅菌過(guò)的鑷子放置鋼管。第三部分：抗生素微生物檢定法目前三十六頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)目前三十七頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)目前三十八頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)目前三十九頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)6、恒溫培養(yǎng)箱：有隔水式、電熱式。要求溫度控制在35℃-37℃，隔板要求水平，用于細(xì)菌培養(yǎng)。第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十一頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十二頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)7、抑菌圈測(cè)定儀：

用于測(cè)定細(xì)菌所致抑菌圈直徑，也可以用游標(biāo)卡尺進(jìn)行測(cè)量直徑。第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十三頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十四頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十五頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十六頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)8、超凈工作臺(tái)：用于菌種的接種、傳代和菌懸液的制備。超凈臺(tái)應(yīng)放在潔凈工作間或半無(wú)菌室內(nèi)。第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十七頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十八頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)

9、磷酸鹽緩沖液：根據(jù)獸藥典附錄或者品種項(xiàng)下要求的配方進(jìn)行配制、分裝、滅菌后備用。常用的緩沖液pH值有6.0、7.0、7.8等。緩沖液的pH值對(duì)樣品液的穩(wěn)定性、細(xì)菌生長(zhǎng)速度和抑菌圈邊緣清晰等有影響。第三部分：抗生素微生物檢定法目前四十九頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)10、培養(yǎng)基：盡量購(gòu)置質(zhì)量穩(wěn)定的干粉培養(yǎng)基（如中國(guó)獸藥藥品監(jiān)察所、中國(guó)藥品生物制品監(jiān)察所等生產(chǎn)的培養(yǎng)基）。常用的培養(yǎng)基有Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、VI號(hào)等培養(yǎng)基，用前應(yīng)按使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制，注意調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值。第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)11、菌種：菌種應(yīng)由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所和中國(guó)藥品生物制品檢定所等國(guó)家法定的菌種保藏中心提供。

常用的菌種包括：枯草芽孢桿菌〔CMCC（B）63501或CVCC717〕、短小芽孢桿菌〔CMCC（B）63202或CVCC709〕、黃色葡萄球菌〔CMCC（B）26003或CVCC1882〕、藤黃微球菌〔CMCC（B）28001或CVCC1600〕、大腸埃希菌〔CMCC（B）44103或CVCC2801〕、肺炎克雷伯菌〔CMCC（B）46117等。第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十一頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)12、標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品是指用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量或者效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，一般以效價(jià)單位標(biāo)示，標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)由國(guó)家法定的單位制備、標(biāo)定和供應(yīng)，一般常用的標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)源于中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所和中國(guó)藥品生物制品檢定所。第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十二頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)三、管碟法操作步驟

1、稱量：標(biāo)準(zhǔn)品從冰箱內(nèi)取出后，應(yīng)放置至室溫后稱取。標(biāo)準(zhǔn)品的稱取量往往少于100mg，需選用十萬(wàn)分之一的分析天平精密稱量，稱取量應(yīng)大于10mg，并且為了減少實(shí)驗(yàn)誤差，應(yīng)使用小燒杯或特制的稱量壺作為稱量容器。

第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十三頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)供試品稱取量若少于100mg，稱取方法同標(biāo)準(zhǔn)品；供試品取量若多于100mg，可直接使用稱量紙?jiān)谌f(wàn)分之一的分析天平上精密稱量。稱量過(guò)程中，不能裸手接觸稱量紙或稱量容器。液體制劑量取供試品體積的方法，粘稠的液體不便量取時(shí)，可采取稱重，然后測(cè)定相對(duì)密度，折算稱體積。第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十四頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)2.稀釋稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和供試品所用的緩沖液應(yīng)用同一瓶?jī)?nèi)或同一次制備和緩沖液幾瓶混勻后使用。為避免抗生素被玻璃吸附，在量取溶液時(shí)，要用被量取的溶液流洗3次。第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十五頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)3.制備底層用滅菌的吸管吸取已融化的培養(yǎng)20ml注入培養(yǎng)皿中，稍后蓋上陶瓦蓋吸收水蒸汽，以免培養(yǎng)基溫度過(guò)高，加蓋陶瓦蓋后冷凝水影響菌層的表面平整性（由于冷凝水的局部冷卻和稀釋作用，可使菌層培養(yǎng)基凝固后表面不平）。第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十六頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)4.制備菌層取出試驗(yàn)菌懸液，吸取已試驗(yàn)妥的菌量加入已融化并保溫在水浴中（一般細(xì)菌48℃，芽孢60℃），搖勻作為菌層培養(yǎng)基。然后吸取菌層培養(yǎng)基5ml，使其均勻攤在底層培養(yǎng)基上，置水平臺(tái)上，用陶瓦蓋覆蓋，放置20-30分鐘，備用。第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十七頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)5.滴加抗生素溶液至小鋼管采用膠頭滴管或者定量加液器向鋼管中加溶液。由于滴加先后順序及時(shí)間的不同，抗生素在培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)散有差異。在滴加抗生素溶液時(shí)采用S2→T2→S1→T1（標(biāo)準(zhǔn)品高濃度、樣品高濃度、標(biāo)準(zhǔn)品低濃度、樣品低濃度）的順序滴加，以減少試驗(yàn)誤差。第三部分：抗生素微生物檢定法目前五十八頁(yè)\總數(shù)六十六頁(yè)\編于點(diǎn)

6.培養(yǎng)加液完畢后，用陶瓦蓋覆蓋，平穩(wěn)地移入培養(yǎng)箱中，至35-37℃培養(yǎng)至所需的時(shí)間。雙碟在培養(yǎng)時(shí)，不易使雙碟靠近培養(yǎng)箱熱源較近處，以免造成培養(yǎng)溫度不均勻，使同一雙碟上細(xì)菌生長(zhǎng)速度不一致，造成抑菌圈變小或抑菌圈不圓。第三部分：抗生素微生