病毒感染診斷治療和預(yù)防

第二十六章病毒感染的診斷檢測病毒顆粒檢測病毒成分（抗原、核酸）檢測病毒抗體1第一節(jié)病毒的分離培養(yǎng)2

1、采集時間：用于分離病毒或檢測病毒及其核酸的標(biāo)本，應(yīng)采集病人急性期標(biāo)本。血清學(xué)檢查的標(biāo)本最好取雙份。2、標(biāo)本種類：根據(jù)不同病毒感染采集不同部位標(biāo)本(如鼻咽拭子、腦脊液、血液、糞便或皰疹液)。

一、標(biāo)本的采集31、標(biāo)本運送：應(yīng)立即送檢，運送標(biāo)本中注意冷藏。保存于含抗生素的運送液中。不能立即送檢時應(yīng)存放于-70℃低溫冰箱或液氮內(nèi)保存。2、標(biāo)本處理：有雜菌標(biāo)本應(yīng)用高濃度抗生素處理（4℃）并離心。二、標(biāo)本的處理和運送4細(xì)胞培養(yǎng)動物接種雞胚接種三、分離培養(yǎng)5（一）細(xì)胞培養(yǎng)

是從機(jī)體中取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)的生理條件在體外進(jìn)行培養(yǎng)，使之生存和生長。6倒置顯微鏡觀察細(xì)胞7細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：來源方便，容易選擇易感細(xì)胞。無免疫力，利于病毒生長。培養(yǎng)條件易于控制：可以用人工控制溫度、氣體、pH、培養(yǎng)基成分。接種量大：細(xì)胞可以大量生產(chǎn)，而且還可較久地持續(xù)培養(yǎng)。動物和雞胚的接種均受數(shù)量、年齡、途徑的限制。加速病毒分離過程：病毒分離采用細(xì)胞培養(yǎng)不僅陽性率高，而且分離過程可顯著加速，早出結(jié)果。81、細(xì)胞類型原代細(xì)胞動物或人組織直接用蛋白酶消化所得的細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后可貼壁或懸浮生長。（人胚肺細(xì)胞，雞胚細(xì)胞、猴腎細(xì)胞、兔腎細(xì)胞等）9二倍體細(xì)胞在體外連續(xù)培養(yǎng)50～60代仍保持其二倍染色體數(shù)目的細(xì)胞。為生產(chǎn)人用疫苗的首選細(xì)胞株。傳代細(xì)胞能在體外連續(xù)傳代，來自腫瘤細(xì)胞或發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化、突變的原代細(xì)胞或二倍體細(xì)胞株。10

優(yōu)點缺點用途原代細(xì)胞

多種V敏感來源困難分離二倍體細(xì)胞

多種V敏感診斷/疫苗制備來源易,50代傳代細(xì)胞

無限傳代，來源易致瘤性分離/鑒定/研究V112、病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指征（1）細(xì)胞的變化細(xì)胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)：病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖后，可引起細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，如細(xì)胞腫脹、變圓、皺縮、融合或細(xì)胞聚集成葡萄串狀，甚至細(xì)胞溶解或脫落等，這種可在普通光鏡下看到的由病毒增殖引起的細(xì)胞形態(tài)變化，稱為CPE。12細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）1314定義：有些病毒感染細(xì)胞，在普通顯微鏡下可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性或嗜堿性，圓形、橢圓形或不規(guī)則形的斑塊結(jié)構(gòu)，稱為包涵體。本質(zhì)：病毒顆粒聚集體、病毒增殖留下的痕跡、病毒感染引起的細(xì)胞反應(yīng)物。包涵體（inclusionbody）形成15意義：不障同的壇病毒南形成諷的包渴涵體期特征籍（大戲小、拒形態(tài)原、嗜分性等虛）各變異，墳故可浩作為山診斷納依據(jù)態(tài)。如狂信犬病饅病毒睡在腦箱組織垂細(xì)胞鄙內(nèi)形即成的公胞漿巖內(nèi)嗜姿酸性膀的內(nèi)輩基小卵體（Ne隨gr麻ibo歸dy），類可輔師助診盒斷狂丟犬病蜜。16包涵亂體17包涵找體形絨成18（2）紅吼細(xì)胞習(xí)吸附娃現(xiàn)象某些教病毒乎感染娛的宿疊主細(xì)杰胞能此吸附衣脊椎援動物病的紅烘細(xì)胞違。（3）干擾撓現(xiàn)象19最早皇的病賭毒培橋養(yǎng)方堤法；根據(jù)北病毒飽種類吸不同慶，選擇障敏感縫動物洞及適灑宜接紅種部席位。（二德）動近物接鞏種20（三抓）雞座胚培匹養(yǎng)21222324流感兩病毒隊分離量培養(yǎng)蕩的最好旱方法唯是雞軍胚接漲種：初次低分離——羊膜居腔，傳代噸培養(yǎng)——尿囊悉腔，然后券取羊叨水或脫尿囊匆液做血凝和血凝舟抑制試驗仇鑒定江。25初步垮鑒定—血凝姐試驗：羊水/尿囊仙液+雞RB諒C紅細(xì)聾胞凝騎集表明套可能楊有病益毒存寸在和么增殖救。確證—血凝遮抑制敢試驗：已知醬流感舊病毒厭抗體+羊水/尿囊宋液+雞RB接C無凝怎集凝扶集流感病毒增殖非流感病毒增殖26正常肉雞紅池細(xì)胞凝集窯紅細(xì)攪胞27沉積凝集28四、轉(zhuǎn)病毒闊的鑒盼定1、病懸毒種糾類與捉型別輕鑒定初步徐鑒定碌：動盡物感跨染范祥圍及挨潛伏捉期、飯對雞俯胚的昏敏感雪性、本細(xì)胞胳形態(tài)辦變化踏類型距、紅稿細(xì)胞仍吸附杠、病兵毒干萬擾現(xiàn)扛象、戶血凝像性質(zhì)芝、理腫化性套質(zhì)（兼核酸拘類型會測定及、大俱小形搶態(tài)、躁乙醚蹲敏感紗試驗?zāi)?、耐特酸試升驗）恰等。最后拜鑒定段：主攀要是墓血清敢學(xué)方娃法（北中和步試驗赤、補(bǔ)尋體結(jié)做合試葡驗、匯血凝任抑制雁試驗畝、IF選A和EL鳴IS妙A(yù)等）峰和分耳子生辣物學(xué)詠方法蠅。292、病準(zhǔn)毒感簽染性執(zhí)測定50糧%組織撲培養(yǎng)片感染類量（50刷%螺ti潑ss巷ue誤c泛ul辯tu棚re貿(mào)i柳nf月ec脾ti奴ve枕d散os澆e，TC除ID50）：引起坦半數(shù)仇培養(yǎng)無細(xì)胞歉發(fā)生紀(jì)病變眾（CP董E）的病校毒量支。蝕斑播形成抓單位（pl姨aq徑ue蜓f巨or裕mi萌ng薯u叫ni丹t，PF嗓U）：在細(xì)源胞培猛養(yǎng)表判面覆昆蓋一霸層半毀固體霉物質(zhì)劇使細(xì)萄胞病紀(jì)變形畢成蝕釣斑。30病毒猜標(biāo)本悔（充犬分稀熱釋）↓單層黎細(xì)胞↓37疼℃，60圾mi因n，吸附懇，洗逝滌覆蓋礦瓊脂↓37察℃，3～5d觀察律蝕斑僑（中圍性紅/結(jié)晶慰紫染消色）PF劍U/視ml：定量犧測定技病毒信感染跪性311、光還學(xué)顯薯微鏡悠檢查饑：兩檢查罰包涵菌體2、電獄子顯眼微鏡平檢查冬：如輪稈狀病沾毒、照冠狀棕病毒辜等五、形態(tài)校學(xué)檢企查32輪鎖狀殊病睛毒33第二軋節(jié)跡檢測湯病毒揉抗原免疫飲熒光織檢測溪（IF污A）放射利免疫裂測定砍（RI鹽A）酶免史疫技蟲術(shù)（EI捧A）等34第三乏節(jié)色檢測曠病毒茄抗體1、中和艇試驗鑒：中和伏試驗孝是指劣病毒漿在活富體內(nèi)辨或細(xì)胞培養(yǎng)逮中被羽特異旅性抗煮體中慣和而演失去盈感染籃性的萍一種皺試驗委?？捎寐齺頇z翼查患節(jié)病后蒼或人租工免狗疫后憤機(jī)體昆血清出中抗洗體的氏增長喊情況孝，也引可用護(hù)來鑒淚定病踢毒或揚研究杠其抗吸原結(jié)克構(gòu)。外中和議抗體面特異破性高柜，維幻玉持時顫間較逼長，夫因此炎流行填病學(xué)冠常用世此法虛。352．血凝田抑制喪試驗：許多鈴病毒應(yīng)能凝銜集雞栽、豚假鼠、裹人等環(huán)的紅貸細(xì)胞敘，稱膏為血寬凝現(xiàn)私象。妻這種肺現(xiàn)象荒能被她相應(yīng)杏抗體劃所抑扣制，略稱血客凝抑糧制試乓驗。虛常用喜于含壩血凝墊素的家病毒寺（如邪流感止病毒蠟、乙耍腦病平毒）虎的輔招助診充斷和妙流行廁病學(xué)冰調(diào)查賺。3．補(bǔ)體輕結(jié)合譯試驗：可作向為近抵期感絡(luò)染的巡壽指標(biāo)染。4．EL陸IS識A：可檢企測多掌種病序毒抗刊體，陪應(yīng)用害廣泛奸。36第四謹(jǐn)節(jié)重檢測伴病毒戚核酸核酸失分子皮雜交問技術(shù)PC侄R如HB糟V、HC倒V、HS想V、CM挖V等的渴檢測捆。37標(biāo)本她采集分離陵培養(yǎng)準(zhǔn)鑒定快速狹診斷雞胚丹培養(yǎng)血凝請試驗血凝節(jié)抑制鴿試驗細(xì)胞向培養(yǎng)CP勇E電鏡淚檢測中和限試驗免疫越熒光TC敘ID50測定Pf沾u測定動物蠶接種發(fā)病海情況中和禽試驗免疫配學(xué)檢維測ID50測定LD50測定形態(tài)只學(xué)電鏡孕觀察往病毒局顆粒光學(xué)績顯微炕鏡觀素察包卡涵體病毒腰成分殃檢測抗原賊檢測EL員IS采AIF鼠ARI第AWB核酸編檢測核酸違電泳核酸映雜交PC市R基因搞芯片基因段測序抗體寫檢測中和蕩試驗EL貫IS滴AIF撲ARI瞇AWB病毒群感染購的檢匪查程障序38本章相學(xué)習(xí)興重點機(jī)內(nèi)容病毒千感染裁的檢查查標(biāo)莊本采走集和焰送檢陶原則病毒怒分離耐培養(yǎng)族的方胖法用于棋培養(yǎng)迫病毒徒的三匠類細(xì)駐胞的毅優(yōu)缺鳴點及慚主要克用途病毒告在細(xì)躬胞內(nèi)盤增殖咐的主讀要指閣標(biāo)病毒勁感染備的常隨用診侄斷方濤法39第27章之病誓毒感角染的差治療誓和預(yù)夢防40第一件節(jié)韻病室毒感巖染的憲治療一、司抗病律毒藥盲物1、核楚苷類盞藥物蟲：是常最早釣用于愈抗病錢毒治沸療的職藥物可。無環(huán)嶄鳥苷(a咐cy夢cl溫ov起ir，AC宗V)及丙醉氧鳥比苷(ga最nc滔ic癢lo膀vi怎r，DH曾PG成)，是賺新一汽代的次核苷揚類藥白物。碘尿襖苷(I悔DU，商怎品名隔皰疹平凈)；3－氮掌唑核泳苷（語病毒領(lǐng)唑）412、非叛核苷蹈類：如DN烘A多聚豎酶抑葡制物剩、逆荷轉(zhuǎn)錄廈酶抑席制物辮。3、病酒毒蛋紐奉白酶鼓的抑爹制物4、免簡疫制輸劑：現(xiàn)有暖病毒攝的特鄭異性攤免疫路球蛋脆白（憲抗-HB柴s）、評人免括疫球貧蛋白超、單薯克隆效抗體到等。干擾暫素或干翁擾素低誘生拼劑以衣及細(xì)扒胞因耀子IL獻(xiàn)-1那2，TN廚F等。425、其識他：服一批盲中草億藥等填天然球藥物傲如黃腫芪、奮板藍(lán)字根、存大青單葉等因具有瞎抑制疼病毒圈復(fù)制飼作用租。金剛紫烷胺淡可抑瓜制流允感病厭毒脫芒衣殼轎。43吸附受體掀抑制夾劑配體窯抑制肢劑中和逐抗體穿入金剛養(yǎng)烷胺脫殼生物初合成裝配張、釋漲放核苷桂類似元物干擾乒素酶抑吧制劑44Fi芹g躲A)胖H疊IV召a鋒tt域ac殼h宿to張a及C茂D4脹r唯ec穗ep雕to勺r.B)院A在s季ol嚷ub有l(wèi)e辰s宜yn膨th梅et查ic啞v喝er右si顛on寨o茫f良th創(chuàng)e窩re尿ce燙pt裝or糟c葡an包p烏re爹ve票nt幼a荷tt速ac恨hm勺en帶t販of幫t生he循v盆ir恩us食.45二、萄治療膛性疫葡苗三、季基因昂治療RN噸A干擾順（RN幸A意in躺te挽rf鉆er效en銷ce，RN瞧Ai）反義駛寡核倍苷酸46第二梨節(jié)哭免適疫預(yù)陜防人工盲免疫能對于出預(yù)防例病毒伶性感釀染有池重要斷意義怨。47一、合被動環(huán)免疫天然魔被動迅免疫溫：通濫過胎層盤及嘆哺乳漢。人工蕩被動汽免疫治：常用暢的制圣劑有丙種償球蛋朗白、搖免疫制血清等。命注射夏入丙爺種球欲蛋白便對肝倉炎、瓣麻疹呀、脊州髓灰蔑質(zhì)炎綱等可掏緊急離預(yù)防義。含揭有高陡滴度西抗-HB誘s的乙轎型肝糊炎特開異性從免疫廟球蛋剪白可姓預(yù)防燃乙型停肝炎廳。48傳統(tǒng)喪疫苗1）滅逆活疫凳苗2）減攤毒活闊疫苗Fi京g奴Ed下wa懸rdJe皮nn獅erva程cc長in轉(zhuǎn)at波in匙g睡(i黃no回cu擦la鬼ti固ng緣瑞)誘Ja泡me料s孫Ph乳ip尊ps遼w劈燕it委h軍co縮慧wp硬ox柄m親at北er位ia贊l.二、旱人工議主動捷免疫49目前貫常用后的滅活趟疫苗有流新行性那乙型樓腦炎蘆疫苗番、狂千犬病糖疫苗搞、流姐感滅丘活疫主苗等濤。目前套常用贈的減毒壁活疫響苗有脊夏髓灰嗚質(zhì)炎傍病毒刃疫苗必、麻放疹疫充苗、