第八章細(xì)胞重組與克隆技術(shù)

細(xì)胞重組(又叫細(xì)胞拆合)

是指從活細(xì)胞中分離出細(xì)胞器及其組分，然后在體外一定條件下將不同細(xì)胞來源的細(xì)胞器及其組分進(jìn)行重組，使其重新裝配成為具有生物活性的細(xì)胞或細(xì)胞器的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。定義目前一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)從原生動(dòng)物等低等生物的去精細(xì)胞或互換細(xì)胞核的細(xì)胞，可以清楚看出真核細(xì)胞的細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)是相互配套、精確平衡的。例如，將變形蟲切成兩個(gè)半，一半有核、一半無核；無核的一半雖然仍能消化已經(jīng)吞噬的食物．但不能重新攝取食物、對(duì)外界刺激也不再發(fā)出反應(yīng)。同位素示蹤法證明，這無核的一半雖仍能吸收和結(jié)合無機(jī)磷，但其吸收和結(jié)合率均呈直線下降。在用電鏡觀察時(shí)．可發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞內(nèi)的膜結(jié)構(gòu)如高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系等會(huì)出現(xiàn)退化。而有核的那一半照樣能夠攝食，對(duì)刺激也有反應(yīng)，失去的收縮泡可被補(bǔ)償，還能生長并及時(shí)分裂。如果用一顯微勾針將變形蟲的細(xì)胞核鉤出，這種變形蟲的行為就會(huì)變得與無核變形蟲一樣，如在及時(shí)植入同種變形蟲的另一個(gè)核，上述各種生命活動(dòng)又會(huì)重新恢復(fù)。目前二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)在探討真核細(xì)胞的起源時(shí)。馬吉利斯(MaRdls)曾于1972年提出了內(nèi)共生學(xué)說：真核細(xì)胞起源于原核細(xì)胞，是幾個(gè)原核細(xì)胞共生結(jié)合的結(jié)果。如藍(lán)陰滴蟲，細(xì)胞內(nèi)含葉綠體，就是藍(lán)藻在陰滴蟲內(nèi)共生的結(jié)果；綠草履蟲體內(nèi)的綠色物體，就是與之共生的一種小球藻。

這種不同細(xì)胞的結(jié)合過程類似于細(xì)胞的自然裝配。特點(diǎn)目前三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

細(xì)胞的生長過程包含著細(xì)胞器的自我裝配，但這是一種活體的自我裝配，而細(xì)胞重組則是離體的裝配過程特點(diǎn)目前四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

1、將細(xì)胞融合技術(shù)與細(xì)胞核質(zhì)分離等技術(shù)相結(jié)合，為重新構(gòu)成不同類型的雜種細(xì)胞提供了可能。2、結(jié)合基因轉(zhuǎn)移技術(shù)可以人為地使細(xì)胞表達(dá)新的性狀和產(chǎn)生新的產(chǎn)物。因此細(xì)胞重組技術(shù)現(xiàn)巳成為現(xiàn)代生物工程中令人矚目的熱點(diǎn)課題之一。3、只有了解了生物合成和細(xì)胞裝配的全過程，才能實(shí)現(xiàn)掌握細(xì)胞、利用細(xì)胞、改造并進(jìn)而創(chuàng)造出具有特定性狀相功能的工程細(xì)胞這一目標(biāo)。從這點(diǎn)上講，細(xì)胞器重組技術(shù)對(duì)于揭示細(xì)胞活動(dòng)規(guī)律具有重要意義。意義目前五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

一般而言，細(xì)胞重組的方式基本分為以下三種（1）胞質(zhì)體與完整細(xì)胞重組形成胞質(zhì)雜種（2）微細(xì)胞與完整細(xì)胞重組形成微細(xì)胞異核體（3）胞質(zhì)體與核體重組形成重組細(xì)胞8．1．2細(xì)胞重組技術(shù)目前六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

胞質(zhì)體是去除細(xì)胞核后由膜包裹的無核細(xì)胞。微細(xì)胞又可稱為微核體，含有一條或幾條染色體，外有一薄層細(xì)胞質(zhì)和一個(gè)完整的質(zhì)膜的核質(zhì)體。胞質(zhì)體和微細(xì)胞與完整細(xì)胞融合后就能產(chǎn)生相應(yīng)的雜合體。胞質(zhì)雜種細(xì)胞是不同種系之間形成的一種真正的新型細(xì)胞，在適宜條件下能成功的生存下去。目前七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

顯微操縱術(shù)細(xì)胞分離技術(shù)細(xì)胞破碎方法細(xì)胞器的分離胞質(zhì)體、核質(zhì)體和微細(xì)胞的制備目前八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

一般是在顯微解剖鏡下，把細(xì)胞放入消毒的培養(yǎng)液中，同時(shí)放入冷卻系統(tǒng)中以減慢細(xì)胞發(fā)育，然后借助一臺(tái)專門的裝置——顯微操作儀，用細(xì)微玻璃針或用微細(xì)管、微電極、微熱電偶等斜插入細(xì)胞中去，可以挑取細(xì)胞核，人工造就去核細(xì)胞；也可以進(jìn)一步作移核實(shí)驗(yàn)與電生理實(shí)驗(yàn)。8.1.2.1顯微操縱術(shù)目前九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)8.1.2.1顯微操縱術(shù)目前十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

用這種儀器能夠進(jìn)行細(xì)胞各部分的解剖、細(xì)胞各部分物質(zhì)的抽取和移植、各物質(zhì)的注入、測量微電位的變化等等。意義

1、實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的拆合

2、為研究細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)與調(diào)控和改良動(dòng)物品種提供了一種重要手段。目前十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

分離細(xì)胞主要是根據(jù)細(xì)胞本身的某些特殊性質(zhì)來選擇合適的分離技術(shù)來分離具有同一性狀的細(xì)胞群、這些性質(zhì)包括：

細(xì)胞大小、密度、表面電荷、表面標(biāo)志、細(xì)胞中一個(gè)或多個(gè)成分的熒光強(qiáng)弱、細(xì)胞對(duì)其他介質(zhì)的吸附作用8.1.2.2細(xì)胞分離技術(shù)目前十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

經(jīng)常采用的細(xì)胞分離方法如下：（一）差速離心（differentialcentrifugation）

在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級(jí)離心，用于分離不同大小的細(xì)胞和細(xì)胞器在差速離心中細(xì)胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體、最后為核蛋白體。由于各種細(xì)胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉淀塊中，一般重復(fù)2～3次效果會(huì)好一些。差速離心只用于分離密度和大小懸殊的細(xì)胞，更多用于分離細(xì)胞器。對(duì)于精細(xì)的分離，則是密度梯度離心效果更好。目前十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)速度逐漸提高，樣品按大小先后沉淀

目前十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

經(jīng)常采用的細(xì)胞分離方法如下：（二）梯度沉降分離法主要是根據(jù)細(xì)胞大小不同分離細(xì)胞、細(xì)胞在單位重力作用下，通過密度介質(zhì)、或在低離心力作用下通過梯度密度溶液沉降，由于細(xì)胞大小不同，沉降速度不同。細(xì)胞大，沉降快。常采用適當(dāng)?shù)姆蛛x介質(zhì)形成一定的梯度密度溶液．這此介質(zhì)主要有：血清、蔗糖等：目前十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

（三）等密度沉降分離法主要是根據(jù)細(xì)胞密度差異來分離細(xì)胞。細(xì)胞在連續(xù)密度梯度分離介質(zhì)中、受強(qiáng)離心力的作用，最后到達(dá)與其密度相同的分離介質(zhì)層面，并保持平衡。如果是非連續(xù)密度梯度介質(zhì)中，細(xì)胞主要集中在介于其自身密度的兩種密度介質(zhì)交界面上，從而達(dá)到分離的目的。目前常采用的分離介質(zhì)有蛋白等。密度分離劑應(yīng)該具有無刺激，對(duì)細(xì)胞無吸附作用，產(chǎn)生的滲透壓小等特點(diǎn)目前十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(四)流式細(xì)胞儀分離法這種方法是以免疫熒光法使熒光抗體與細(xì)胞膜表面抗原結(jié)合，然后用超聲波處理使其分散成單個(gè)細(xì)胞，再將細(xì)胞懸浮液通過一個(gè)直徑為50um的噴嘴變成極細(xì)小的微滴，每個(gè)微滴一般含有一個(gè)細(xì)胞，以l0m/s的速度噴出。經(jīng)激光照射是細(xì)胞上所帶熒光被激發(fā)而轉(zhuǎn)換成脈沖．通過測定脈沖數(shù)就可以換算出各種不同細(xì)胞表面抗原的情況。同時(shí)由于懸浮微滴中的細(xì)胞帶有不同程度的負(fù)電荷，這樣在施加電場后。移行偏斜的程度不同，而不帶電荷的細(xì)胞仍以直線流過、借此可以收集得到不帶電荷或帶電荷多少不同的各種細(xì)胞。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是分離速度快，分離得到的細(xì)胞仍能保持其功能；缺點(diǎn)是需要專門的設(shè)備。目前十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

細(xì)胞器的分離需要將組織細(xì)胞破碎，常用的方法包括(一)超聲波破碎法原理是：超聲波發(fā)生器產(chǎn)生高強(qiáng)度超聲信號(hào)，經(jīng)換能器傳送至與其接觸的細(xì)胞溶液中，由聲波沖擊和振動(dòng)產(chǎn)生的剪切力使細(xì)胞破碎。缺點(diǎn)是破碎過程中會(huì)產(chǎn)熱，應(yīng)該注意冷卻。有些生物大分子不宜采用。8.1.2.3細(xì)胞破碎方法目前十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)目前十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)目前二十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

（二）反復(fù)凍融法使細(xì)胞溶液或組織細(xì)胞漿在超低溫冰箱或液氮罐內(nèi)凍結(jié)后，在37℃復(fù)溫融化，重復(fù)3-4次操作使細(xì)胞壁破碎。

(三)化學(xué)裂解法在細(xì)胞懸浮液中加入某些化學(xué)物質(zhì)如十二烷基硫酸鈉等使細(xì)胞膜裂解。在使用該方法的同時(shí)常要輔助以一些機(jī)械的方法才能使細(xì)胞在短時(shí)間內(nèi)完全破碎；由于化學(xué)裂解劑會(huì)干擾分析，在細(xì)胞裂解后應(yīng)注意清除化學(xué)裂解劑。目前二十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(四)高速組織搗碎法主要借助高速組織搗碎機(jī)使細(xì)胞被高速旋轉(zhuǎn)的葉片破碎。由于也會(huì)發(fā)熱，可能導(dǎo)致分離物的降解，因此不能時(shí)間過長．必要時(shí)可使用循環(huán)水冷卻目前二十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

為了研究細(xì)胞內(nèi)某種細(xì)胞器的生化組成、生理功能，或用于細(xì)胞重組，常需大量采集細(xì)胞的某些組分。常用的方法有：研磨、超聲振蕩和低滲等將組織制成勻漿，細(xì)胞中的一些亞組分就從細(xì)胞中釋放出來。然后采用以上介紹的沉降分離法實(shí)現(xiàn)分級(jí)分離。8.1.2.4細(xì)胞器的分離目前二十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞器分離、制備與觀察【目的】1．掌握分離制備動(dòng)物細(xì)胞線粒體的方法。2．對(duì)分離得到的線粒體進(jìn)行活性鑒定。【原理】線粒體（mitochondria）是真核細(xì)胞特有的，司能量轉(zhuǎn)換的重要細(xì)胞器。細(xì)胞中的能源物質(zhì)——脂肪、糖、部分氨基酸在此進(jìn)行最終的氧化，并通過耦聯(lián)磷酸化生成ATP，供給細(xì)胞生理活動(dòng)之需。目前二十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)將動(dòng)植物組織制成勻漿，在適當(dāng)?shù)膽腋〗橘|(zhì)中用差速離心法可以分離細(xì)胞線粒體。在一定的離心場中(選用離心機(jī)的一定轉(zhuǎn)速)，球心顆粒的沉降速度取決于它的密度、半徑和懸浮介質(zhì)的黏度。在一均勻懸浮介質(zhì)中離心一定時(shí)間，組織勻漿中的各種細(xì)胞器及其他內(nèi)含物由于沉降速度不同將停留在高低不同的位置。依次增加離心力和離心時(shí)間，就能夠使這些顆粒按其大小、輕重分批沉降在離心管底部，從而分批收集。細(xì)胞器沉降先后順序是細(xì)胞核、線粒體、溶酶體和其他微體、核糖體和大分子。目前二十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)懸浮介質(zhì)通常采用緩沖的蔗糖溶液，它較接近細(xì)胞質(zhì)的分散相，在一定程度上能保持細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和酶的活性；

pH7.2的條件下；亞細(xì)胞組分不容易重新聚集成團(tuán)，有利于分離。整個(gè)操作過程樣品要保持在0℃~4℃，避免酶失活。目前二十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)細(xì)胞器標(biāo)記酶的測定是評(píng)價(jià)細(xì)胞器內(nèi)膜組分和分離純度的主要依據(jù)，如線粒體內(nèi)膜上分布有細(xì)胞色素氧化酶，該酶使詹納斯綠B染料保持在氧化狀態(tài)呈現(xiàn)藍(lán)綠色從而使線粒體顯色，而胞質(zhì)中的染料被還原成無色。目前二十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)鼠肝線粒體的分離【材料】鼠肝臟或豬肝臟。【實(shí)驗(yàn)用品】1．試劑：(1)0.25mol／L蔗糖+0.01mol／L三羥甲基氨基甲烷(Tris)一鹽酸緩沖液(pH7.4)：

0.1mol／L三羥甲基氨基甲烷溶液10mL0.1mol／L鹽酸8.4mL

加雙蒸水到100mL，再加蔗糖使?jié)舛葹?.25mol／L。(2)0.34mol／L蔗糖+0.01mol／LTris一鹽酸緩沖液(pH7.4)，配法同上。目前二十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)1％詹納斯綠B(JanusgreenB)染液姬姆薩染液(Giemsa)：2．器具：解剖刀，剪刀，漏斗，玻璃勻漿器，尼龍織物，刻度離心管，顯微鏡，冷凍高速離心機(jī)。目前二十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)【實(shí)驗(yàn)步驟】1．制備肝細(xì)胞勻漿：實(shí)驗(yàn)前將鼠空腹12小時(shí)，擊頭處死，剖腹取肝，迅速用生理鹽水洗凈血水，用濾紙吸干水，稱取肝組織2g，剪碎；用預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖溶液洗滌數(shù)次。然后按每克肝加4.5mL預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖溶液的量，分?jǐn)?shù)次添加蔗糖溶液，在0~4℃冰浴中用玻璃勻漿器將肝制成勻漿，用雙層紗布過濾。目前三十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)2．差速離心：將0.34mol／L蔗糖溶液4.5mL放入離心管，然后沿管壁小心地加入4.5mL鼠肝勻漿覆蓋于上層。用冷凍控溫的高速離心按下圖順序進(jìn)行差速離心。目前三十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)分離細(xì)胞核：

沉淀(細(xì)胞核及質(zhì)膜碎片)鼠肝勻漿1500r/min,離心10min上清液(1)洗滌(0.25mol／L預(yù)冷蔗糖溶液5mL洗滌2次，每次1500r/min離心15min。沉淀(細(xì)胞核及質(zhì)膜碎片)上清液(2)→與上清(1)合并目前三十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)分離細(xì)胞核：

沉淀(線粒體))混合上清液10000r/min離心10min上清液(棄去)洗滌,加預(yù)冷的0.25mol／L蔗糖溶液10mL，10000r/min離心10min沉淀(純化的線粒體))上清液(棄去)目前三十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)活性鑒定：

(1)細(xì)胞核：取核沉淀1滴涂于載玻片，加入Carnoy固定液（甲醇：冰乙酸3:1）15min，晾干。Giemsa染液染10min，蒸餾水漂洗數(shù)秒，用濾紙吸干水、用顯微鏡(40×)檢查，細(xì)胞核呈紫紅色，混雜的胞質(zhì)為淺藍(lán)色碎片。(2)線粒體：取線粒體沉淀滴在載玻片上，勿太密。滴加1％詹鈉斯綠溶液染液，10min后用光學(xué)顯微鏡觀察，線粒體藍(lán)綠色，呈小棒狀或啞鈴狀。目前三十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)這三種是細(xì)胞重組常用的幾個(gè)原料，因此在此重點(diǎn)介紹(一)胞質(zhì)體方法

細(xì)胞松弛素B處理體外培養(yǎng)細(xì)胞能誘發(fā)其排核，結(jié)合高速離心得到了胞質(zhì)體。影響制取胞質(zhì)體的因素：

容器，有玻璃片、塑料片、離心管、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等，需在滅菌恒溫培養(yǎng)室中進(jìn)行。

適宜的溫度、細(xì)胞松弛素B的劑量、培養(yǎng)液濃度及其血清含量、離心速度、細(xì)胞密度等。8.1.2.5胞質(zhì)體、核體和微細(xì)胞的制備目前三十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

特點(diǎn)：

植物細(xì)胞的胞質(zhì)體內(nèi)的細(xì)胞器與完整細(xì)胞相同，具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系、線粒體、溶酶體、高爾基體和中心粒及微粒、微管等骨架系統(tǒng)，各細(xì)胞器仍占有固有的位置。線粒體的運(yùn)動(dòng)十分活躍，線粒體膜上各酶系的分布及氧化磷酸化過程都照樣存在。胞質(zhì)體內(nèi)線粒體內(nèi)自主性的DNA復(fù)制尚能有限地進(jìn)行著。

蛋白質(zhì)的合成在去核后的一段時(shí)間內(nèi)持續(xù)進(jìn)行。因此，去核細(xì)胞質(zhì)體是深入研究細(xì)胞質(zhì)作用的重要樣品。目前三十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

（二）核體與胞質(zhì)分離得到的細(xì)胞核，帶有少量胞質(zhì)并圍有質(zhì)膜，稱為“核體”。核體能重新再生其胞質(zhì)部分，繼續(xù)生長、分裂。為了生產(chǎn)大量的核體，必須采用一系列的純化技術(shù)，以防夾雜完整細(xì)胞和胞質(zhì)體?？稍谌ズ颂幚砗?從離心管底部收集樣品,接種于培養(yǎng)皿內(nèi),溫育1-2h，由于核體的貼壁率大大低于殘留完整細(xì)胞的貼壁率，可從上清液中收集得到較純凈的核體。如此重復(fù)1-2次,可使核體的純度高達(dá)99％。目前三十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(三)微細(xì)胞秋水仙素及其衍生物和長春新堿等有絲分裂阻斷劑能干擾微管的合成與裝配，而使染色體停滯在有絲分裂中期。經(jīng)體外培養(yǎng)，在單個(gè)染色體或染色體周緣就會(huì)重現(xiàn)核膜而形成含有一個(gè)微核、一薄層細(xì)胞質(zhì)和一個(gè)完整質(zhì)膜的微細(xì)胞。這種微細(xì)胞僅含有一個(gè)或數(shù)個(gè)染色體的DNA，也是細(xì)胞拆合工程的一種有用材料。目前三十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

用上述方法從活細(xì)胞中拆散出來的胞質(zhì)體、核體、微細(xì)胞為材料，通過顯微操縱術(shù)，在光學(xué)顯微鏡下用顯微操縱器把材料重新組合，加入病毒或化學(xué)物質(zhì)如聚乙二醇等融合因子，經(jīng)過一段時(shí)間的作用，可以把它們更新裝配成新的活細(xì)胞。目前三十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)8．2．1克隆的定義“克隆”“來源于希臘語。原意是用于扦插的枝條，也就是指無性繁殖。本意是指遺傳上完全相同的分子、細(xì)胞或來自同一祖先的生物個(gè)體的無性繁殖群體克隆是指一種實(shí)現(xiàn)無性繁殖的操作，而不是一般意義上的無性繁殖。8．2克隆技術(shù)目前四十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

8.2.2克隆的相關(guān)理論基礎(chǔ)

克隆在植物界已有上千年的歷史。但理論的上的突破則是發(fā)生在20世紀(jì)。

1902年德國植物學(xué)家哈伯蘭德提出，植物的體細(xì)胞具有母體全部的遺體信息，具有發(fā)育成為完整個(gè)體的潛能。因而每個(gè)植物細(xì)胞都可像胚胎細(xì)胞那樣，經(jīng)離體培養(yǎng)再生成為完整植株。這就是所謂的細(xì)胞全能性。目前四十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

雖然，從理論上講，任何一個(gè)細(xì)胞都含有其生物體系基因組的全部基因，因此都可以被克隆。但實(shí)際上，動(dòng)植物細(xì)胞克隆結(jié)果差別很大?？寺‖F(xiàn)象在植物界普遍存在。既可以是自然的。也可以是人工的。目前四十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

與植物細(xì)胞不同，在動(dòng)物發(fā)育過程中分化了的細(xì)胞不再產(chǎn)生完整的充分分化的個(gè)體，然而，動(dòng)物胚胎的生長、分化和發(fā)育是否造成體細(xì)胞基因組的不可逆性修飾，即在發(fā)育過程中分化了的細(xì)胞是否具有與受精卵相同的核等價(jià)性或基因組連續(xù)性、一直是發(fā)育生物學(xué)要解決的問題目前四十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

早在20世紀(jì)30年代，著名的胚胎學(xué)家斯佩爾曼就已經(jīng)提出了分化了的細(xì)胞核移入卵子中能否指導(dǎo)胚胎發(fā)育這樣的設(shè)想。用兩棲類動(dòng)物進(jìn)行的一些克隆實(shí)驗(yàn)表明，早期胚胎細(xì)胞核經(jīng)移植可產(chǎn)生成熟的動(dòng)物個(gè)體。也就是說尚未分化的胚胎細(xì)胞具有全能性。基于這種認(rèn)知、人們采用胚胎分割及胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)成功克隆出了許多動(dòng)物。目前四十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

這種對(duì)動(dòng)物細(xì)胞全能性的認(rèn)識(shí)自1997年后得到改變，體細(xì)胞克隆動(dòng)物“多利”羊的成功證明成熟的體細(xì)胞也具有全能性；后來，體細(xì)胞克隆小鼠、牛及山羊的成功，更充分證明高度分化的細(xì)胞核仍具有全能性。因此，人們對(duì)細(xì)胞全能性有了全新的認(rèn)識(shí)。目前四十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)目前，克隆技術(shù)最成功的應(yīng)用體現(xiàn)在克隆動(dòng)物的培育上。下面將重點(diǎn)介紹的克隆主要是指以細(xì)胞核移植為核心技術(shù)的無性繁殖操作技術(shù)：8.2.3克隆的技術(shù)方法目前四十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(一)定義

細(xì)胞核移植技術(shù)是一種利用顯微操作技術(shù)將一種動(dòng)物的細(xì)胞核移入同種或異種動(dòng)物的去核成熟卵內(nèi)的精細(xì)技術(shù)。8.2.3.1細(xì)胞核移植目前四十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)由于主要的遺傳物質(zhì)存在于細(xì)胞核中，因此，核移植的受體將具有與核移植供體完全相同的遺傳基礎(chǔ)，因此，細(xì)胞核移植技術(shù)在動(dòng)物育種工作中具有十分重要的意義。因?yàn)樗裰参镏械慕M織培養(yǎng)那樣，可以利用一頭優(yōu)質(zhì)的動(dòng)物(例如高產(chǎn)的奶牛)復(fù)制出與它生得完全一樣的成千上萬的細(xì)胞核移植系動(dòng)物。細(xì)胞核移植技術(shù)是克隆技術(shù)的關(guān)鍵。目前四十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

細(xì)胞核移植所得到的雜種稱為核質(zhì)雜種。根據(jù)細(xì)胞核移植對(duì)象的不同可分為胚胎細(xì)胞核移植、體細(xì)胞核移植等。開始時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞核移植主要是為了研究胚胎發(fā)育進(jìn)程中細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)功能及兩者之間的關(guān)系，探索有關(guān)遺傳、發(fā)育和細(xì)胞分化等方面的理論問題。后來發(fā)現(xiàn)，這項(xiàng)技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)不同細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的組配，從而培育出新物種。目前四十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(二)發(fā)展歷史

1、提出思想第一個(gè)提出對(duì)動(dòng)物進(jìn)行細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)的人是諾貝爾獎(jiǎng)獲得者德國胚胎學(xué)家漢斯?施佩曼博士，他構(gòu)想了一個(gè)“奇異的實(shí)驗(yàn)”：把一個(gè)卵細(xì)胞的細(xì)胞核取出，然后把取自另一個(gè)發(fā)育到后期的胚胎的細(xì)胞核放入這個(gè)卵細(xì)胞中。但由于技術(shù)等方面的原因使他沒能找到將細(xì)胞核導(dǎo)入卵細(xì)胞的方法。目前五十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

2、建立技術(shù)及低等動(dòng)物試驗(yàn)1952年，美國人羅伯特.布里格斯和T．J．金首先利用兩棲類卵細(xì)胞建立了細(xì)胞核移植技術(shù)。目前五十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)3、高等動(dòng)物試驗(yàn)經(jīng)過大量低等動(dòng)物實(shí)驗(yàn)成功之后，研究人員開始進(jìn)行哺乳動(dòng)物的移核試驗(yàn)。最早用來作移核試驗(yàn)的哺乳動(dòng)物是小鼠。1977年，美國的杰克遜實(shí)驗(yàn)室用“亞無性繁殖”的方式，培育出7只單親小鼠。因?yàn)榇朔N小鼠的體細(xì)胞中只有母體一方的染色體，故稱之為單親小鼠。目前五十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

隨著技術(shù)手段的發(fā)展和進(jìn)步，哺乳動(dòng)物的細(xì)胞核移核實(shí)驗(yàn)開始進(jìn)入一個(gè)令人囑目的新階段。1981年，瑞士日內(nèi)瓦大學(xué)的卡爾?伊爾門澤和美國杰克遜實(shí)驗(yàn)室的必得?霍普首次對(duì)小鼠卵進(jìn)行移核試驗(yàn)獲得成功。他們將囊胚內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞的核移入去核的受精卵中，經(jīng)培養(yǎng)移核卵發(fā)育到囊胚期、再將此胚胎植入同步孕小鼠的子宮內(nèi)，最后產(chǎn)下兩雌一雄仔鼠，并發(fā)育成了可育的個(gè)體。目前五十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

我國的細(xì)胞核移植技術(shù)工作開始于20世紀(jì)50年代，主要是在兩棲類和魚類上進(jìn)行的。1961年開始，童第周等以金魚和鳑被魚為材料，進(jìn)行魚類不同亞科間的細(xì)胞核移植獲得成功，用以研究雜交細(xì)胞核與純種細(xì)胞核在發(fā)育功能上的差異以及細(xì)胞質(zhì)對(duì)細(xì)胞核的影響。我國的細(xì)胞核移植研究目前五十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

1980年4月，中國科學(xué)院武漢水生生物研究所利用鯽魚做移核試驗(yàn)，成功地培育出兩尾無性繁殖的幼魚。之后的1989年，童第周、牛滿江又將鯽魚胚胎細(xì)胞核移入鯉魚去核的未受精卵中，實(shí)現(xiàn)了不同種間的核質(zhì)雜交，成功地?zé)o性繁殖了“鯉鯽核魚”新品種，這個(gè)新品種的“鯉鯽核魚”既具有鯽魚的鮮美味道，又具有鯉魚的生長快速。目前五十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

2008年，鯉鯽移核魚是采用無性雜交的細(xì)胞工程技術(shù)，將荷包紅鯉的囊胚細(xì)胞核移植到鯽魚的去核卵中而發(fā)育形成的后代。其魚體呈紅色，外形特征與鯉魚相似，但也同時(shí)具有一些鯽魚的特征，具有比較穩(wěn)定的遺傳性狀。F1～F4代（1～4子代），基本性狀趨于一致。其生長速度明顯快于鯽魚，并且比荷包紅鯉快35％左右。用鯉鯽移核魚F2雄性與鏡鯉雜交而獲得的雜交一代被稱為穎鯉。穎鯉具有明顯的生長優(yōu)勢，其生長速度比雙親快42％左右。目前五十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

鏡鯉(德國)目前五十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

細(xì)胞核移植技術(shù)的建立，為今天的哺乳動(dòng)物體細(xì)胞克隆打下良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。哺乳類細(xì)胞核移植技術(shù)的發(fā)展和成功，經(jīng)歷的是一個(gè)艱難曲折的過程。哺乳類卵細(xì)胞的體積很小，因此哺乳類的移核實(shí)驗(yàn)必須采用顯微操作技術(shù)，從而對(duì)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)微手術(shù)，如：細(xì)胞核移植、基因注入以及單個(gè)細(xì)胞的分離。8．2．3．2核移植技術(shù)目前五十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

這種裝置可以在機(jī)械或電子的控制下人工操縱也可以把程序輸入微機(jī)，自動(dòng)進(jìn)行抓、切、擠壓、注入、縮回等動(dòng)作。也可用激光做切割工具顯微操作技術(shù)的發(fā)展對(duì)研究細(xì)胞核質(zhì)關(guān)系、基因工程、克隆技術(shù)的作用越來越大。8．2．3．2核移植技術(shù)目前五十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)細(xì)胞核移植必須有一個(gè)前提，就是要盡量保證核供體和受體細(xì)胞處于同樣的細(xì)胞周期，高等細(xì)胞發(fā)展到一定階段時(shí)都要進(jìn)行有絲分裂，而各種細(xì)胞的有絲分裂周期是各不相同的。在哺乳動(dòng)物核移植實(shí)驗(yàn)中的核供體細(xì)胞和核受體細(xì)胞可能處在細(xì)胞周期的不同階段上?，F(xiàn)在可以通過采用“饑餓技術(shù)”來減慢細(xì)胞活動(dòng)、迫使供體細(xì)胞處于某種休眠狀態(tài)，以期獲得與受體細(xì)胞同步的狀態(tài)，便于兩者的結(jié)合。目前六十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

我國在細(xì)胞核移植技術(shù)選育魚類新品種方面處于世界領(lǐng)先地位，以魚類細(xì)胞核移植為例，詳細(xì)介紹一下細(xì)胞核移植技術(shù)要點(diǎn)：

(一)供體和受體的準(zhǔn)備

供體通常為魚類的囊胚細(xì)胞或成體細(xì)胞。

受體為成熟的卵細(xì)胞。該受體卵一般可通過人工催產(chǎn)的方法得到。卵子在接受供體核之前要先激活來獲得發(fā)育能力。

對(duì)于魚卵而言，當(dāng)它被擠入水中即可被激活。對(duì)于兩棲類動(dòng)物的卵可采用針刺方法。最關(guān)鍵的是供體和受體在發(fā)育時(shí)間上要配合好，保證在受體成熟卵剛產(chǎn)出時(shí),供體受精卵發(fā)育至囊胚期。目前六十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(二)去卵膜和卵核可用小鑷子在解剖顯微鏡下仔細(xì)剝?nèi)ヂ涯?，或用適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌溉芤很浕涯?，?jīng)過輕輕晃動(dòng)，使卵子從中脫出。

魚卵----極細(xì)的玻璃微針借助第二極體標(biāo)志(卵核位于極體下方)挑出細(xì)胞核。

兩棲類----紫外線照射受體卵達(dá)到去核目的。目前六十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(三)供體細(xì)胞制備將發(fā)育至囊胚期的胚胎或組織器官進(jìn)行機(jī)械切割，置于胰蛋白酶溶液中處理幾分鐘，直至分離出單個(gè)細(xì)胞。也可將囊胚細(xì)胞或得到的離體細(xì)胞短期培養(yǎng)后用作供體。目前六十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(四)移核由于細(xì)胞核極小，而且脆弱，因此需要極其小心，防止損傷細(xì)胞核或傷害到細(xì)胞質(zhì)。實(shí)際上核移植時(shí)，核周圍的少量細(xì)胞質(zhì)也一起注射進(jìn)了去核后的受體細(xì)胞中了。30-40min中內(nèi)完成，溫度：16-18℃目前六十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

克隆可以通過不同來源的細(xì)胞核移植來實(shí)現(xiàn)，如胚胎細(xì)胞、干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、體細(xì)胞等。其中以胚胎細(xì)胞克隆的應(yīng)用比較普遍，以體細(xì)胞克隆的意義最大。8.2.3.3克隆動(dòng)物一般制備技術(shù)目前六十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)移植細(xì)胞核的來源不同分為

胚胎細(xì)胞核移植法胚胎干細(xì)胞核移植胎兒成纖維細(xì)胞核移植體細(xì)胞克隆技術(shù)目前六十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

（一）胚胎細(xì)胞核移植法將未著床的早期胚胎分散成單個(gè)的細(xì)胞，在電流的作用下，使單個(gè)細(xì)胞與去除染色體的未受精的卵母細(xì)胞融合。發(fā)育成胚胎后，移入受體妊娠產(chǎn)仔。目前六十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

原則上，一枚早期胚胎有多少個(gè)細(xì)胞，通過這種方法就可以克隆出多少個(gè)個(gè)體。還可將細(xì)胞反復(fù)克隆出更多的胚胎，產(chǎn)生更多克隆動(dòng)物。圖8-2顯示的是對(duì)胚胎細(xì)胞進(jìn)行核移植克隆出動(dòng)物的具體過程，由圖8-2可以總結(jié)出圖8-3所示的克隆動(dòng)物培育的一般過程。目前六十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

目前六十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

1984年，英國科學(xué)家施特恩?維拉德申在仙臺(tái)病毒或電激誘導(dǎo)下，成功地克隆了一只小綿羊，從此為家畜哺乳動(dòng)物的克隆工作開啟了先河。

目前經(jīng)此法克隆出的動(dòng)物有小鼠、兔、山羊、綿羊、豬、牛、猴等。目前七十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

日本通過移植牛受精卵細(xì)胞核的方法于1945年克隆了兩頭雄性“孿生?！?。1990年以來，日本國內(nèi)已經(jīng)成功克隆了150多頭牛。

1998年9月新聞報(bào)道，日本已有大量克隆肉食牛上市。目前七十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

中國科學(xué)院發(fā)育生物所于1990年最早進(jìn)行兔細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)。我國的哺乳動(dòng)物細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)，首先在山羊的克隆上獲得成功。

1990年，西北農(nóng)業(yè)大學(xué)利用細(xì)胞核移植的方法得到了克隆山羊。

1992年，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院核移植兔成功。

1995年，中國科學(xué)院發(fā)育所與楊州大學(xué)合作，利用細(xì)胞連續(xù)核移植的方法克隆山羊成功。1995年，廣州華南師范大學(xué)激光生命科學(xué)所和廣西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物繁殖研究室合作，成功地克隆了一頭黑白花牛和黃牛的雜種牛。目前七十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

1995年10月，西北農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧所采用胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)，克隆了6只小豬。

1996年12月，克隆小鼠在湖南醫(yī)科大學(xué)誕生。

哺乳動(dòng)物的胚胎細(xì)胞在分裂成8細(xì)胞以前，所有的單卵裂球均為全能細(xì)胞，即每個(gè)卵裂球均能表達(dá)此個(gè)體的全部基因。理論上這時(shí)的每個(gè)卵裂球經(jīng)過核移植，都能發(fā)育成遺傳性狀完全相同的個(gè)體。

這些工作為進(jìn)一步研究細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的相互關(guān)系建立了很好的模型。目前七十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)（二）胚胎干細(xì)胞核移植將胚胎或胎兒的原始生殖細(xì)胞經(jīng)過抑制分代培養(yǎng)后，細(xì)胞數(shù)量增多，單細(xì)胞卻不分化。因此，每個(gè)細(xì)胞仍然具有細(xì)胞全能性而發(fā)育成個(gè)體的能力，這樣的細(xì)胞被稱為胚胎干細(xì)胞系。

再利用細(xì)胞核移植技術(shù)，可以比胚胎核移植生產(chǎn)出更多的動(dòng)物個(gè)體。

但目前僅有小鼠分離克隆出其胚胎干細(xì)胞系并成功克隆出成體鼠。目前七十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

新華社倫敦2009年７月８日電（記者黃堃）英國科研人員８日報(bào)告說，他們利用胚胎干細(xì)胞首次成功制造出人類精子，但科研人員表示不會(huì)將這種試管精子用于人工授精。英國紐卡斯?fàn)柎髮W(xué)８日發(fā)表新聞公報(bào)說，該校和東北英格蘭干細(xì)胞研究所等機(jī)構(gòu)的科研人員利用一種含有視黃酸等物質(zhì)的培養(yǎng)介質(zhì)，對(duì)含有Ｘ和Ｙ兩種染色體的男性胚胎干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并促使其實(shí)現(xiàn)完全的減數(shù)分裂，最終培養(yǎng)出含有23條染色體的試管精子。研究人員卡里姆·納耶尼亞說，這項(xiàng)研究有助于深入分析男性不育的原因，并用相關(guān)知識(shí)幫助那些希望有孩子的不育夫婦。例如，由于采用化療方法，被治愈的白血病男性患兒成年后可能不育，這項(xiàng)研究便可幫助分析其中的原因。研究人員同時(shí)表示，他們不會(huì)利用試管精子進(jìn)行人工授精，這不僅是因?yàn)橛刹辉试S，且從科學(xué)角度講，這樣做對(duì)研究小組也沒有意義。目前七十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)生物學(xué)家卡里姆調(diào)制出一種化學(xué)物質(zhì)和維生素構(gòu)成的“雞尾酒”，在這種“雞尾酒”培養(yǎng)環(huán)境下，人體干細(xì)胞轉(zhuǎn)變成精子。目前七十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)（三）胎兒成纖維細(xì)胞核移植從妊娠早期胎兒分離出胎兒成纖維細(xì)胞，采用細(xì)胞核移植方法克隆出胚胎，經(jīng)移植受體后，妊娠產(chǎn)仔，克隆出動(dòng)物個(gè)體。

1996年，英國報(bào)道利用此法克隆出3只山羊。目前七十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

是將動(dòng)物體細(xì)胞經(jīng)過抑制培養(yǎng)，使其處于休眠狀態(tài)，利用細(xì)胞核移植技術(shù)將其導(dǎo)入去核卵母細(xì)胞，發(fā)育成胚胎后移植至受體，妊娠產(chǎn)仔，克隆出成體動(dòng)物。8.2.3.4體細(xì)胞克隆技術(shù)目前七十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

早在20世紀(jì)50年代就有利用體細(xì)胞克隆成體蛙的先例，其后的科學(xué)家們幾十年來一直在利用體細(xì)胞期望克隆出哺乳動(dòng)物個(gè)體、但均未成功。1997年2月23日．英格蘭愛丁堡羅斯林研究所和PPL制藥公司的胚胎學(xué)家伊恩?維爾穆特博士的研究小組經(jīng)過多年的無性繁殖實(shí)驗(yàn)無性繁殖了一只雌性小綿羊——“多莉”(見圖8—4)。維爾穆特解釋他的多莉是“有史以來第一次通過成熟細(xì)胞的核移植生產(chǎn)出來的動(dòng)物后代”多莉與以往的克隆動(dòng)物的最大區(qū)別是它的核供體是高度分化了的體細(xì)胞——乳腺上皮細(xì)胞，而不是尚保留細(xì)胞全能性的早期胚胎細(xì)胞。這是克隆技術(shù)領(lǐng)域的一項(xiàng)重大突破，利用這一技術(shù)可以大批復(fù)制某一動(dòng)物。目前七十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)目前八十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)多莉培育者之一

——伊斯維姆.穆特目前八十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

以克隆羊多莉的制備過程為例詳細(xì)介紹一下體細(xì)胞克隆動(dòng)物的技術(shù)。(1)供體的選擇

芬蘭多塞特白品種綿羊的乳腺細(xì)胞

取處于后三分之一妊娠期的6歲母綿羊(芬蘭多塞特白品種綿羊)的乳腺細(xì)胞作核供體細(xì)胞，用“饑餓法”使具進(jìn)入休眠狀態(tài)而使全部基因具有活性。目前八十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)(2)受體的選擇

蘇格蘭黑面母綿羊卵細(xì)胞

注射促性腺激素GN促使母羊排卵，28-33h取其未受精卵快速去核，放入10%FCS(小牛血清)、1％FCS和0.5％FCS連續(xù)5天，饑餓使其進(jìn)入G0期作為受體細(xì)胞。目前八十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)(3)乳腺細(xì)胞注射GN

34-36h后與無核卵放入同一培養(yǎng)皿中。在微電流作用下乳腺細(xì)胞融入卵中，形成一個(gè)含有新遺傳物質(zhì)的卵細(xì)胞。目前八十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

(4)將新的卵細(xì)胞植入羊的結(jié)扎的輸卵管內(nèi)、6天后發(fā)育成桑椹期胚胎或囊胚(8-16個(gè)細(xì)胞)，再移入假孕母羊子宮內(nèi)。(5)產(chǎn)下多莉即為6歲母羊的復(fù)制品，也為白色。目前八十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)目前八十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

能使異種動(dòng)物借腹妊娠、產(chǎn)仔，加快珍稀動(dòng)物繁殖，搶救瀕危動(dòng)物(如大熊貓)；

建立重要疾病的基因模型，生產(chǎn)生物活性藥物。

為了解細(xì)胞發(fā)育的潛能性、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)之間相互關(guān)系、胚胎發(fā)生死亡及其調(diào)控研究提供了新視角，因此對(duì)揭示生命科學(xué)重大基礎(chǔ)理論問題具有重要的科學(xué)價(jià)值。8．2．4克隆技術(shù)的應(yīng)用與意義目前八十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

動(dòng)物克隆近幾年取得的一些突破性進(jìn)展，為動(dòng)物發(fā)育過程中基因表達(dá)的調(diào)控及發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展必將產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。盡管目前這種方法尚不成熟，但它已顯示出誘人的應(yīng)用的前景。8．2．4克隆技術(shù)的應(yīng)用與意義目前八十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

在多莉羊誕生之前，普遍認(rèn)為低等生物和高等植物的細(xì)胞具有全能性，而高等動(dòng)物的體細(xì)胞沒有全能性。

目前克隆技術(shù)取得的結(jié)果，為再生、修復(fù)、治療組織器官缺損等奠定了理論基礎(chǔ)，也增加了采用高度分化的體細(xì)胞克隆各種動(dòng)物的信心。8.2.4.1檢驗(yàn)動(dòng)物細(xì)胞全能性目前八十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

8．2．4．2加速動(dòng)物繁殖、優(yōu)良育種、保護(hù)珍貴動(dòng)物

由于體細(xì)胞數(shù)量巨大和易于獲得，因此動(dòng)物克隆技術(shù)有助于加速動(dòng)物育種的進(jìn)程。

利用優(yōu)良動(dòng)物品種的體細(xì)胞作核供體克隆動(dòng)物，可以避免自然條件下選種所受到的動(dòng)物生育周期和生育效率的限制，從而大大縮短育種年限，提高育種效率。（大熊貓交配的季節(jié)在春季三至五月份，通常不超過2－4天。）目前九十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

也可以結(jié)合基因工程技術(shù)將具有特殊功能的基因(如具有一些經(jīng)濟(jì)性狀、抗蟲、抗病等)導(dǎo)入體細(xì)胞，然后用克隆技術(shù)培育出人們希望的動(dòng)物新品種。

200l年4月，一種具有極高科學(xué)價(jià)值的商品—利用克隆技術(shù)培育的金魚由美國一家基因復(fù)制公司投放市場，這標(biāo)志著克隆動(dòng)物已經(jīng)開始了商業(yè)化歷程。目前九十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)克隆瀕危物種

2002年4月27日,中國農(nóng)業(yè)大學(xué)成功克隆了第一頭優(yōu)質(zhì)中國黃牛,這標(biāo)志著中國在動(dòng)物體細(xì)胞克隆領(lǐng)域取得了重要進(jìn)展。這頭名為“波娃”的體細(xì)胞克隆中國黃牛所使用的核供體細(xì)胞來源于一頭不足六個(gè)月的冀南牛純種小母牛的耳朵皮膚組織,而使用的卵母細(xì)胞取自于屠宰場宰殺后的母牛卵巢?！安ㄍ蕖迸c其供體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)完全相同,而與其代孕母親———荷斯坦奶牛在遺傳上分屬不同來源。該次克隆成功屬國際首次,此次克隆中國優(yōu)質(zhì)黃牛的成功使目前挽救瀕臨滅絕的優(yōu)良黃牛品種成為可能。目前九十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)西門塔爾牛外貌特征:黃白花或淡紅白花頭

生產(chǎn)性能:西門塔爾牛肉、乳用夏洛萊牛外貌特征:被毛為白色或乳白色生產(chǎn)性能:長勢快，瘦肉產(chǎn)量高利木贊牛外貌特征:毛色為紅色或黃色

生產(chǎn)性能:產(chǎn)肉高，肉質(zhì)量好

魯西黃牛外貌特征:個(gè)體大，產(chǎn)肉率高

生產(chǎn)性能:繁殖率高，肉質(zhì)好目前九十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

動(dòng)物克隆技術(shù)用于拯救瀕危動(dòng)物也受到廣泛的關(guān)注。中國科學(xué)院動(dòng)物研究所陳大元研究員提出用動(dòng)物克隆技術(shù)拯救大熊貓的計(jì)劃，在國內(nèi)外均引起一定的反響。目前九十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)克隆寵物

2004年8月6日美聯(lián)社報(bào)道:美國加州“遺傳儲(chǔ)存與克隆”公司近日正式宣布,他們成功地培育出了世界上首對(duì)克隆寵物貓,今后,他們將在世界范圍內(nèi)推廣寵物克隆業(yè)務(wù),需要交納5萬美元的“克隆費(fèi)”,你家的寵物就可以有個(gè)一模一樣的伙伴了。目前九十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

由于克隆動(dòng)物的遺傳背景相同，因此它們是模擬疾病、基因治療、器官移植等研究的良好實(shí)驗(yàn)材料，具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。利用克隆技術(shù)，可以用患者本人細(xì)胞培育出新組織，用來治療糖尿病、帕金森氏癥、神經(jīng)損傷等多種疾病。

用這種方法培育出的組織不會(huì)產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)8．2．4．3醫(yī)藥領(lǐng)域具有與患者正常組織完全相同的基因構(gòu)成目前九十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

隨著人類胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的完善，科學(xué)家已開始研究利用克隆技術(shù)培育人胚胎，希望大批量生產(chǎn)治療疾病的干細(xì)胞。

移植器官來源不足是各國存在的普遍問題，所以人們開始致力于異種器官移植和克隆器官移植的研究。

人們可以用克隆動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞作異源移植，以解決人類移植器官供求矛盾。8．2．4．3醫(yī)藥領(lǐng)域目前九十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

目前我國的年器官移植數(shù)量已經(jīng)位居世界第二，其種類和成功率也都達(dá)到或接近國際先進(jìn)水平。

但還存在著基礎(chǔ)研究薄弱、研究體系分散和社會(huì)捐獻(xiàn)活體器官意識(shí)不強(qiáng)、數(shù)量較低以及相應(yīng)立法不完備等問題。目前九十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

未來人類器官移植治療將集中在人對(duì)人的同體器官移植、動(dòng)物對(duì)人的異體器官移植和克隆人體器官移植等方面。

其中克隆人體器官更具有光明的前景，將解決一系列移植方面的關(guān)鍵問題，不過目前其實(shí)際運(yùn)用還為時(shí)過早，因?yàn)殡m然現(xiàn)在可以復(fù)制具有機(jī)械功能的臟器，但如何還原其生化作用還有待于探索。目前九十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

目前，我國科學(xué)家已成功復(fù)制了羊顱骨、雞肌腱和豬關(guān)節(jié)軟骨等組織，這意味著我國復(fù)制人體組織器官研究已進(jìn)入了一個(gè)新階段。目前一百頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

8．2．5．1技術(shù)尚不成熟現(xiàn)階段克隆動(dòng)物等技術(shù)尚不成熟，還處于探索階段。目前所得到的克隆動(dòng)物具有極大的偶然性和隨機(jī)性。迄今為止，克隆試驗(yàn)的成功率始終很低。

例如，在培育多莉的過程中，科學(xué)家共克隆出277個(gè)綿羊胚胎，最終成功使母羊受孕并生產(chǎn)的只有多莉一個(gè)。

此外，克隆動(dòng)物夭折率高，不少克隆動(dòng)物天生患有疾病或體形過大。8.2.5正確看待克隆技術(shù)目前一百零一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

8．2．5．2克隆動(dòng)物的體細(xì)胞突變、壽命及其他遺傳問題

基因突變與DNA復(fù)制次數(shù)緊密相關(guān)。分裂越多的體細(xì)胞發(fā)生突變的可能性就越大，這與通過克隆迅速獲得大量動(dòng)物個(gè)體的目的相矛盾，是克隆動(dòng)物材料來源不可避免的問題。

同時(shí)，由于克隆是無性繁殖，克隆動(dòng)物沒有遺傳物質(zhì)的交流和互補(bǔ)，將會(huì)加劇一些遺傳疾病的發(fā)生。目前一百零二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

此外，出于體細(xì)胞分裂代數(shù)是有限的，因此克隆動(dòng)物的壽命是否會(huì)受到體細(xì)胞分裂代數(shù)的影響，也尚不清楚。2002年1月，“多莉”被診斷患有嚴(yán)重的關(guān)節(jié)炎，這是科學(xué)家對(duì)克隆生命的前景表示出擔(dān)擾。綿羊的平均壽命為為13年，多莉5歲半就患關(guān)節(jié)炎顯然過早。在多莉誕生后的3年多時(shí)間內(nèi)，已獲得了許多成活的體細(xì)胞克隆動(dòng)物。但是，在大多數(shù)研究中，都出現(xiàn)了高頻率的出生體重增加，以及胎兒或新生兒的死亡。因此、就目前的研究來看，動(dòng)物克隆技術(shù)要實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化是非常困難的。目前一百零三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

8.2.5.3是否是完全的“復(fù)制”

就遺傳的角度而言?？寺?dòng)物的性狀可能與其來源的親本完全相同，但是至少以下一些因素會(huì)影響克隆動(dòng)物的遺傳性狀：

(1)細(xì)胞突變(2)受體卵細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)差異(3)受體遺傳上或生理上的差異(4)后期生長的環(huán)境與馴化目前一百零四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

大多數(shù)人認(rèn)為，克隆是復(fù)制的同義詞，復(fù)制品與原件是完全一樣的。DNA的復(fù)制結(jié)果就是如此，所以復(fù)制用于DNA的合成是一個(gè)非常確切的術(shù)語。

克隆則是一個(gè)過程，克隆產(chǎn)生的個(gè)體還需進(jìn)行胚胎發(fā)育和胎后發(fā)育，克隆個(gè)體與原件之間有一段年齡差異。由于發(fā)育過程既受基因主宰又受環(huán)境調(diào)控，而克隆與其原本盡管基因相同，所處環(huán)境卻絕不會(huì)相同，所以，克隆與其原本不可能像復(fù)制品與原件那樣完全一樣的。目前一百零五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

再者，雖然克隆個(gè)體是由核移植產(chǎn)生的，但由于重建細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)并非來自原本，而我們知道細(xì)胞質(zhì)中也有遺傳物質(zhì)，它們必然會(huì)對(duì)個(gè)體產(chǎn)生影響，所以不能把克隆個(gè)體看成是原本的復(fù)制品。盡管從遺傳結(jié)構(gòu)上看克隆個(gè)體和原本是姐妹(兄弟)關(guān)系，但從年齡上看它們卻是親子關(guān)系。無性繁殖的生物仍然有”代”的概念，克隆個(gè)體也應(yīng)有”代”的概念。

而且，克隆個(gè)體和原本是可以同時(shí)存在。因此，準(zhǔn)確地說，克隆個(gè)體可以看成是原本的再生，但不是原本的復(fù)活。目前一百零六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)有性生殖是生物在長期進(jìn)化過程中的自我選擇、適應(yīng)環(huán)境的結(jié)果，是一種有利于種族繁衍和生存的生殖方式。從這個(gè)角度來講，用克隆動(dòng)物繁殖生物可能給生物的生存和自然界帶來意想不到的后果，同時(shí)，最關(guān)鍵的是，這種繁殖方式會(huì)造成基因的丟失，不利于遺傳物質(zhì)和生物多樣性的保護(hù)。于是，有學(xué)者認(rèn)為，克隆動(dòng)物是違反生物進(jìn)化規(guī)律的，是一種倒退。8.2.5.4克隆動(dòng)物的可應(yīng)用型的思考目前一百零七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

總之，克隆技術(shù)的低效率以及克隆動(dòng)物后代出現(xiàn)的體重增加、體弱多病等事實(shí)，使得單獨(dú)的克隆技術(shù)在近期內(nèi)難以得到推廣應(yīng)用。

可見，在當(dāng)前世界上的克隆技術(shù)還不成熟的今天，人類要克隆出健康的動(dòng)物仍是相當(dāng)困難的，也就是說克隆技術(shù)在實(shí)踐中真正應(yīng)用還有相當(dāng)長的路要走。8.2.5.4克隆動(dòng)物的可應(yīng)用型的思考目前一百零八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)克隆人的研究進(jìn)程

１、克隆人制備過程

將普通的男性細(xì)胞或者是體細(xì)胞和一枚女性卵子結(jié)合起來，儲(chǔ)存于女性卵子中的遺傳信息將事先被消除。通過細(xì)胞分裂形成的胚胎應(yīng)只帶有這名男性的全部遺傳信息，最后將胚胎移植到女性子宮中，獲得男性克隆后代。

當(dāng)然，如果一對(duì)夫婦愿意的話，也可以克隆女性。8.2.5.5社會(huì)學(xué)和倫理學(xué)問題目前一百零九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

2002年12月27日,46歲的法國“女科學(xué)家”布里吉特?布瓦瑟利耶宣布,“世界上第一個(gè)克隆嬰兒已經(jīng)降生”。美國麻省理工學(xué)院的生物學(xué)家魯?shù)婪?居內(nèi)什對(duì)克隆嬰兒的真實(shí)性表示懷疑。他說:“克隆羊多莉是在277次實(shí)驗(yàn)后才成功的,而布瓦瑟利耶說她進(jìn)行了10次克隆人實(shí)驗(yàn)就有5次受孕成功,令人懷疑?！?003年1月5日,布里吉特?布瓦瑟利耶又透露第二名克隆嬰兒在荷蘭誕生。目前一百一十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

克隆是將一個(gè)體細(xì)胞的DNA移入一個(gè)已經(jīng)被去掉細(xì)胞核的卵細(xì)胞中，然后用電激或者化學(xué)方法刺激這個(gè)改造后的卵細(xì)胞，使它開始分裂并成為一個(gè)胚胎，這個(gè)胚胎的基因是與體細(xì)胞提供者的基因完全一樣的。因此克隆人類便會(huì)產(chǎn)生倫理道德方面的問題。目前一百一十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

一個(gè)例子——人+動(dòng)物

中山醫(yī)科大學(xué)陳系古教授等于2001年1月以來，先后使用“核移植”技術(shù)，將人類皮膚細(xì)胞核移植到家兔卵母細(xì)胞中，經(jīng)過２０００多次實(shí)驗(yàn)，成功克隆出１００多個(gè)人類胚胎，其中部分發(fā)育到“桑葚胚”階段。這是國際上首次用該技術(shù)克隆出人類胚胎。

但有些學(xué)者就對(duì)在家兔卵母細(xì)胞中克隆出人類胚胎的提出質(zhì)疑，認(rèn)為這是違背人類倫理的“科學(xué)”實(shí)驗(yàn)。目前一百一十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)第59屆聯(lián)合國大會(huì)3月8日以84票贊成、34票反對(duì)、37票棄權(quán)的表決結(jié)果，批準(zhǔn)了聯(lián)大法律委員會(huì)上月通過的《聯(lián)合國關(guān)于人的克隆宣言》，宣言要求各國考慮禁止各種形式的克隆人。中國、英國、比利時(shí)等國在表決中投了反對(duì)票。投反對(duì)票國家的代表在表決后紛紛發(fā)言，強(qiáng)調(diào)他們的國家將不受上述宣言約束，將繼續(xù)允許治療性克隆研究。目前一百一十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)國家科技部863生物工程中心主任王洪廣接受記者采訪時(shí)解釋說，中國反對(duì)《宣言》的原因并不是贊同“克隆人”，而是因?yàn)檫@項(xiàng)宣言措辭太模糊。

中國認(rèn)為應(yīng)禁止生殖性克隆即克隆人試驗(yàn)，不禁止以治病救人為目的的治療性克隆研究。

“我們對(duì)'克隆人'一貫的態(tài)度是'四不原則'：不支持、不贊同、不承認(rèn)、不接受。”目前一百一十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)原因一：治療性克隆太重要反對(duì)一切克隆就像“把孩子和臟水一起潑掉”為什么我們要堅(jiān)持不能禁止治療性克隆，就是因?yàn)樗鼘?duì)人類的健康、生命太重要了。用比較通俗的說法，把克隆后的干細(xì)胞或是受精卵放入母親的子宮，孕育一個(gè)新生命，創(chuàng)造出一個(gè)“克隆人”，就是生殖性克?。欢每寺〖夹g(shù)對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行“復(fù)制、改造”，以用于重建人類的組織、器官進(jìn)行移植，從而達(dá)到治療疾病的目的，即是治療性克隆。是以14天為界限嚴(yán)格區(qū)分兩者的，“胚胎干細(xì)胞發(fā)育到14天以后，再取其中所需部分，培育出所需器官就是不人道的了。”所以，以發(fā)育不超過14天的受精卵胚胎進(jìn)行治療性克隆研究不違背倫理。著名學(xué)者、中科院院士何作庥昨天對(duì)本報(bào)記者說，治療性克隆對(duì)人類的意義非常重大，如果為了禁止“克隆人”就同時(shí)把治療性克隆打進(jìn)冷宮就好像“把孩子和臟水一起潑掉”。目前一百一十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)技術(shù)：克隆器官不怕“早老”克隆人面對(duì)的困難，比動(dòng)物克隆或治療性克隆大得多“目前，生殖性克隆僅僅在動(dòng)物試驗(yàn)中進(jìn)行過，而人類的克隆迄今全球仍然沒有任何具有確定性報(bào)告。”據(jù)張愚教授介紹，從技術(shù)上來說，克隆人所面對(duì)的困難肯定比動(dòng)物克隆或是治療性克隆要大得多。在動(dòng)物身上進(jìn)行的克隆試驗(yàn)已經(jīng)出現(xiàn)了一些難以預(yù)料的問題。如著名的克隆羊多利出生時(shí)正常，但它的死亡時(shí)間比研究人員預(yù)計(jì)的提前了很多。這就表示，克隆后的細(xì)胞的老化速度很可能要比正常的細(xì)胞快得多?！耙虼藦默F(xiàn)有研究水平來說，生殖性克隆應(yīng)該被嚴(yán)格禁止。”“相比之下，治療性克隆研究可能要更容易一些?！痹谏承钥寺⊙芯糠矫婵赡茉庥龅降摹霸缋稀钡葐栴}，對(duì)治療性克隆研究也許并不算什么?！霸O(shè)想一下，如果一個(gè)50歲的肝癌病人需要新的肝臟組織來替代以前的'問題'部分，這個(gè)新肝臟可能只需要維持30到50年就足夠了，所以'老化'就不成其問題了?！蹦壳耙话僖皇揬總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)迄今為止，公開宣稱要進(jìn)行克隆人的只有3家：一個(gè)是意大利婦科專家安蒂諾利。

一個(gè)就是在美國開公司的法國女科學(xué)家布利吉特·布瓦瑟利耶。一個(gè)是美國專家扎沃斯。

目前一百一十七頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)布里吉特-布瓦瑟利耶：法國的生物化學(xué)家，曾在紐約的漢密爾頓大學(xué)任教，現(xiàn)為Clonaid公司科學(xué)總裁，Clonaid公司是一家致力于研究克隆人的機(jī)構(gòu)，總部位于巴哈馬群島，由“雷爾運(yùn)動(dòng)”組織資助?！袄谞栠\(yùn)動(dòng)”組織認(rèn)為人類是由外星人利用科技手段創(chuàng)造的，也就是所謂的克隆技術(shù)。Clonaid公司還包括其它兩個(gè)部門：Clonapet和Insureaclone，前者專門負(fù)責(zé)克隆動(dòng)物寵物，后者專門負(fù)責(zé)收藏人類的DNA，以便在將來使用。冒死也要克隆人的科學(xué)家布瓦瑟利耶

目前一百一十八頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

2001年初，布里吉特曾對(duì)美國的一個(gè)國會(huì)委員會(huì)表示，Clonaid公司將推遲克隆人類的實(shí)驗(yàn)，直至這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)合法。2001年8月，美國眾議院宣布禁止進(jìn)行克隆人實(shí)驗(yàn)后，Clonaid公司宣布他們計(jì)劃于年底研制出第一個(gè)克隆人。為了研究克隆人，布里吉特曾表示他的女兒也將被用來孕育克隆嬰兒。目前一百一十九頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)意大利醫(yī)生

安蒂諾里——

克隆人的帶頭人目前一百二十頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

現(xiàn)年57歲的意大利醫(yī)生安蒂諾里是這次大辯論中最具爭議的焦點(diǎn)人物。英國人叫他“克隆先生”，西班牙人叫他“克隆大夫”，德國人稱他為“巫醫(yī)”，意大利有些媒體送給他一個(gè)“克隆瘋子”綽號(hào)。安蒂諾里則自稱是“不可能（生育出來）的孩子”之父。

2002年4月初，美國《新科學(xué)家》網(wǎng)站發(fā)布消息說，安蒂諾里在阿聯(lián)酋的一次國際會(huì)議上宣稱，一名參與克隆人計(jì)劃的婦女已經(jīng)懷孕8周，如果不出意外，再過8個(gè)月世界上第一個(gè)克隆人即將問世。就在這一驚人的消息把世界輿論攪得沸沸揚(yáng)揚(yáng)之際，安蒂諾里卻銷聲匿跡了。記者們四處追尋，到他家里、到他開設(shè)的婦產(chǎn)科診所、到“拉普魯伊”中心，皆無功而返?！袄蒸斠痢敝行牡娜Q是人類生殖及不孕癥醫(yī)療國際中心，由安蒂諾里于1985年創(chuàng)建，他的妻子卡泰利娜擔(dān)任中心主任。這個(gè)中心位于羅馬普洛佩喬大街，距梵蒂岡城墻不到300米。羅馬教廷一向反對(duì)包括使用避孕套在內(nèi)的一切“非自然生育”，安蒂諾里竟把釘子插在教皇的眼皮下。

目前一百二十一頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

目前一百二十二頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

8．2．6．1動(dòng)物克隆技術(shù)現(xiàn)狀與不足動(dòng)物克隆技術(shù)目前還很不完善。存活率低是當(dāng)今核移植技術(shù)的最大缺陷。它突出表現(xiàn)為：孕期流產(chǎn)率高，新生兒體重較重及產(chǎn)后對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性較差。以成體細(xì)胞核作核供體問題更為嚴(yán)重。8．2．6克隆動(dòng)物的現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢目前一百二十三頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

體細(xì)胞核移植可能影響克隆動(dòng)物免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育。

他們用胚胎細(xì)胞克隆牛的耳細(xì)胞通過核移植克隆出一頭牛。牛犢看起來很健康，但出生一個(gè)半月后，它體內(nèi)的淋巴細(xì)胞和紅血球急劇減少，不久就死于貧血；尸體解剖發(fā)現(xiàn)，該牛犢脾臟、胸腺和淋巴結(jié)等淋巴組織都沒有得到正常發(fā)育。目前一百二十四頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

導(dǎo)致動(dòng)物克隆存活率低和異常發(fā)育的原因很多：1、缺乏基礎(chǔ)理論支持

例如，基因組重新編程的機(jī)制尚不清楚。人們雖然觀測到核移植后細(xì)胞核的激活與早期胚胎原核發(fā)育類似，但較詳細(xì)的信息仍不甚明了。目前一百二十五頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)

2、來自于動(dòng)物克隆種屬及細(xì)胞差異

克隆不同種屬的動(dòng)物難易有別，其中的原因目前人們還不清楚。目前可以用作體細(xì)胞核移植核供體的細(xì)胞類型還較少。目前一百二十六頁\總數(shù)一百三十八頁\編于七點(diǎn)3、動(dòng)物克隆技術(shù)條件的優(yōu)化還沒有解決

如核供體和卵細(xì)胞