血清蛋白質醋酸纖維素薄膜電泳

關于血清蛋白質醋酸纖維素薄膜電泳第1頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月一、實驗目的1.了解電泳的基本原理；2.掌握電泳分離蛋白質的原理；3.熟悉醋酸纖維素薄膜電泳的方法。第2頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月二、實驗原理1.電泳的基本原理

電泳——是帶電粒子在電場中向其電性相反的電極發(fā)生移動的現象。

利用電泳技術可進行物質分離、純化及鑒定。第3頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月影響帶電粒子電泳速率的因素：帶電量F=qE分子量形狀第4頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月2.電泳分離蛋白質的原理蛋白質的兩性解離：等電點——即

pI(isoelectricpoint）pIpH小于pIpH大于pI當pH距離pI越遠時，所帶電量越多。+OH-+OH-+H-+H-第5頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月

血清蛋白質的等電點為4.8~7.5，均低于8.6，因此電泳時常采用pH8.6的緩沖液。此時，蛋白質解離帶負電荷，在電場中向正極移動。第6頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月3.醋酸纖膜薄膜電泳分離血清蛋白質原理醋酸纖維素薄膜電泳是采用醋酸纖維素薄膜作支持物的一種電泳技術。醋酸纖維素薄膜做區(qū)帶電泳的支持物優(yōu)點:1.用樣量少，分離清晰，對染料無吸附作用;2.快速簡便，應用范圍廣;3.染色后的薄膜可用乙醇和冰醋酸溶液浸泡透明，透明后的薄膜便于保存和定量分析。

目前被廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。第7頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月三、主要試劑與器材試劑：血清

巴比妥緩沖液

染色液，漂洗液器材：電泳儀，電泳槽

醋酸纖維素薄膜（2×8cm）

血清加樣器第8頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月四、操作步驟1.浸膜：將裁好的醋酸纖維素薄膜浸泡于緩沖液中，充分浸透后用鑷子取出（約3-5min，直到膜上沒有斑點，中間沒有氣泡為止）。2.點樣：毛面向上，用點樣器，在距膜一端約1.5cm處，點加3-5μL待分離血清。注意取樣適量、均勻；血清線位置適當，粗細均勻，不能有明顯擴散現象。

1.5cm第9頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月3.搭橋：首先將雙層紗布鋪好，分別放置于電泳槽兩端，其下端要浸入緩沖液中。然后，將點好樣的薄膜光面向上平直地貼于電泳槽的支架上。注意橋的方向，點樣的一端位于負極，點樣線不能搭在濾紙上。醋酸纖維素薄膜電泳裝置示意圖第10頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月4.電泳：紅正黑負。

電壓120V。

電泳時間約40~

50min。5.染色：氨基黑10B,染色1-2min.6.脫色：2個表面皿，裝入漂洗液，依次漂去多余染料，直到背景漂白為止。第11頁，課件共13頁，創(chuàng)作于2023年2月五、結果與分析1.定性觀察：染色后的薄膜上可顯現清楚的五條區(qū)帶。