姬松茸多糖的提取工藝優(yōu)化_第1頁(yè)
姬松茸多糖的提取工藝優(yōu)化_第2頁(yè)
姬松茸多糖的提取工藝優(yōu)化_第3頁(yè)
姬松茸多糖的提取工藝優(yōu)化_第4頁(yè)
姬松茸多糖的提取工藝優(yōu)化_第5頁(yè)
已閱讀5頁(yè),還剩7頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

歡迎閱讀本文檔,希望本文檔能對(duì)您有所幫助!歡迎閱讀本文檔,希望本文檔能對(duì)您有所幫助!歡迎閱讀本文檔,希望本文檔能對(duì)您有所幫助!歡迎閱讀本文檔,希望本文檔能對(duì)您有所幫助!歡迎閱讀本文檔,希望本文檔能對(duì)您有所幫助!歡迎閱讀本文檔,希望本文檔能對(duì)您有所幫助!姬松茸多糖的提取工藝優(yōu)化摘要:以水為浸提液,在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上采用三因素三水平正交試驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明,多糖提取率的主要影響因素及其順序?yàn)榻釡囟取⒔釙r(shí)間、料液比。最佳提取工藝參數(shù)為浸提溫度95℃、浸提時(shí)間3h、料液比1∶30,多糖提取率為23.01關(guān)鍵詞:姬松茸;多糖;提?。粌?yōu)化OptimizationofextractionofpolysaccharidesfromAgaricusAbstract:Thisexperimentisonthebasisofsinglefactorwiththreefactorsandthreelevelorthogonaltesttooptimizetheextractionprocesstowaterextraction.Theresultsshowedthatthemainfactorsandtheirorderthataffecetdtheextractionrateofpolysaccharideswereextractiontemperature,extractiontime,solidtoliquidratio.Theprimetechnicswasasfollows:temprature95℃,time3handtheratioofmaterialwithliquid1∶30.ThepolysaccharideextractionrateisKeywords:agaricus;polysaccharide;extract;optimizationTOC\o"1-4"\h\z\u1前言 12材料與方法 12.1材料 12.1.1原料 12.1.2試劑 12.1.3儀器設(shè)備 12.2方法 22.2.1提取工藝流程 22.2.2多糖含量的測(cè)定 22.2.2.1原理 22.2.2.2標(biāo)準(zhǔn)藍(lán)色葡聚糖溶液曲線制備 22.2.2.3多糖提取率的測(cè)定 22.2.3單因素實(shí)驗(yàn) 22.2.3.1溫度對(duì)多糖提取率的影響 22.2.3.2浸提時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響 22.2.3.3料液比對(duì)多糖提取率的影響 22.2.4多糖提取條件優(yōu)化 23結(jié)果與分析 33.1多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 33.1.1多糖含量的測(cè)定 33.2不同條件對(duì)姬松茸多糖提取率的影響 33.2.1浸提溫度對(duì)多糖提取率的影響 33.2.2浸提時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響 43.2.3浸提時(shí)料液比對(duì)多糖提取率的影響 53.2.4最佳條件的優(yōu)化 54結(jié)論 61前言姬松茸(Agaricus

blazei

Murill.)又名小松菇、柏氏蘑菇、巴西蘑菇,屬擔(dān)子菌亞門,層菌綱,傘菌目,蘑菇科,蘑菇屬。是一種大型真菌,具有濃郁杏仁香味[1]。姬松茸是夏秋發(fā)生的草地腐生菌。姬松茸的子實(shí)體粗壯,菌蓋扁圓形、饅頭形,直徑5~10cm,表面覆有淡褐色或褐色的纖維狀鱗片,中央較厚,可達(dá)10cm以上,邊緣薄,有菌幕的碎片,顏色為白色;菌褶離生,較密集;菌柄圓柱狀,柄基部稍膨大,長(zhǎng)4~14cm,粗2~3cm;菌環(huán)著生菌柄的上部,膜質(zhì),白色;孢子印黑褐色,孢子暗褐色,光滑,寬橢圓形至球形,6.3~7.0×4.5~6.3μm。

姬松茸含有多糖、糖蛋白復(fù)合體、凝集素、甾醇類物質(zhì)及核酸等多種提高免疫力、抗腫瘤、抗病毒成分[2]。新鮮子實(shí)體含水分85%~87%。干菇中粗蛋白40%~50%,多糖類38%~45%,纖維素6%~8%,粗灰分5%~7%,粗脂肪3%~4%,干菇含VB10.3%、VB23.2%、煙酸49.2%[3]。礦質(zhì)元素的組成:總灰分(干菇)P7486mg/kg,Mg528mg/kg,Ca157mg/kg,Na118mg/kg,Cu14mg/kg,B9mg/kg,Zn9mg/kg,F(xiàn)e6mg/kg,Mn0.1mg/kg,與抗癌有關(guān)的極引人注目的鉻含量在干菇中為28mg/kg。多糖類化合物廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞膜和植物、微生物的細(xì)胞壁中,是由醛基和酮基通過苷鍵連接的高分子聚合物,也是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一。20世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)真菌多糖具有抗癌作用,后來又發(fā)現(xiàn)地衣、花粉及許多植物均含有多糖類化合物,并進(jìn)行分離提純,確定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)、物理化學(xué)性質(zhì)、藥理作用,尤其對(duì)多糖類化合物的抗腫瘤和免疫增強(qiáng)作用進(jìn)行深入研究。近年來國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)姬松茸多糖的生命活性進(jìn)行了大量研究,成果包括:(1)抗腫瘤機(jī)制研究證明其可通過提高機(jī)體免疫力間接發(fā)揮抗腫瘤效果;也有通過抑制腫瘤細(xì)胞增生,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用。國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究證明,應(yīng)用從姬松茸子實(shí)體和菌絲體中提取的多糖,具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抑制腫瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等明顯的抗腫瘤作用。(2)增強(qiáng)機(jī)體免疫力崔紅霞等[4]采用mT法檢測(cè)姬松茸多糖體外與肝癌細(xì)胞Bel一7402作用48h的細(xì)胞毒作用,以及與小鼠脾細(xì)胞共培養(yǎng)上清對(duì)Bel一7402細(xì)胞作用48h的抑制作用,結(jié)果表明姬松茸多糖體外無直接細(xì)胞毒作用,不同濃度的小鼠脾細(xì)胞共培養(yǎng)上清體外對(duì)Bel一7402細(xì)胞生長(zhǎng)均有抑制作用,其中低劑量組作用最顯著,抑制率為39.65%說明姬松茸多糖可通過增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞功能,抑制Bel一7402細(xì)胞的生長(zhǎng)。(3)保肝作用國(guó)內(nèi)研究表明,姬松茸有效成分能促進(jìn)慢性乙型肝炎患者肝功恢復(fù)[5]。段縣平等[6,7]在姬松茸多糖對(duì)四氯化碳染毒兔肝臟的保護(hù)效應(yīng),以及其毒性反應(yīng)的研究表明,一定劑量范圍內(nèi)的姬松茸多糖不但對(duì)動(dòng)物無毒害作用,反而能提高對(duì)肝臟保護(hù)作用尤其是顯著降低肝臟的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)水平。研究顯示出姬松茸多糖通過刺激肝細(xì)胞DNA的合成使肝細(xì)胞增殖,同時(shí)提高抗氧化酶活性、保護(hù)肝細(xì)胞膜完整性、減少其破損,抑制血清和血漿中GPT和GOT(谷草轉(zhuǎn)氨酶)活性的升高。近年來,關(guān)于姬松茸粗多糖提取方法主要有酶提法,熱水浸提法[8]。前者采用加入纖維素酶、果膠酶、蛋白酶等酶法進(jìn)行提取,但加酶提取不僅生產(chǎn)成本高,同時(shí)也給產(chǎn)物的分離帶來困難。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)記載,多糖提取的影響因素主要有料液比、提取溫度和提取時(shí)間[9]。本文針對(duì)熱水浸提法提取姬松茸中粗多糖成分的工藝,研究了這3個(gè)因素對(duì)多糖提取率的影響,結(jié)合正交試驗(yàn)優(yōu)化的操作方法,具有實(shí)際生產(chǎn)意義。2材料與方法2.1材料2.1.1原料姬松茸:購(gòu)于山西農(nóng)業(yè)大學(xué)食用菌中心。2.1.2試劑苯酚溶液、無水乙醇、藍(lán)色葡聚糖、丙酮、乙醚,濃硫酸等均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。2.1.3儀器設(shè)備科偉電熱恒溫水浴鍋(北京化玻聯(lián)醫(yī)療器械有限公司)756型紫外可見分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)BS210S型電子天平(北京賽爾利斯天平有限公司)ThermoScientificFinnpipetteFocus移液器(芬蘭雷勃Thermo)新飛BCD-248GBS/M型冰箱2.2方法2.2.1提取工藝流程60℃對(duì)姬松茸子實(shí)體干燥處理→粉碎→過40目篩→浸提→過濾→濾渣復(fù)提→合并濾液濃縮→醇沉→離心→乙醚洗滌→丙酮洗滌→2.2.2多糖含量的測(cè)定2.2.2.1原理以苯酚-硫酸為顯色劑,用比色法測(cè)定姬松茸子實(shí)體中多糖含量,其中多糖類成分在濃硫酸作用下,先水解成單糖,單糖迅速脫水生產(chǎn)糠醛衍生物,糠醛與苯酚直接結(jié)合成橙色衍生物,該衍生物在490nm處出現(xiàn)最大吸收,其吸收值與糖質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系,樣品測(cè)定以標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算多糖含量[10]。2.2.2.2標(biāo)準(zhǔn)藍(lán)色葡聚糖溶液曲線制備稱取干燥后的藍(lán)色葡聚糖(200,0000D)0.100g,加適量蒸餾水溶解,轉(zhuǎn)移至1000mL容量瓶中,加蒸餾水至刻度,搖勻。分別精確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1、0.2、O.3、0.4、0.5、0.6mL置于25mL比色管中,加水至1.0mL,再分別加入5%苯酚溶液1.0mL和濃硫酸10.0mL,放置10min,搖勻,置于20~30℃水浴中保溫15min。然后在490nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值,以葡聚糖含量(mg/mL)為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),2.2.2.3多糖提取率的測(cè)定用葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品通過苯酚硫酸法[11]制備工作曲線,得到線性回歸方程,同法測(cè)定樣品提取液中多糖吸光度,通過回歸方程計(jì)算姬松茸多糖含量粗多糖提取率(%)=2.2.3單因素實(shí)驗(yàn)2.2.3.1溫度對(duì)多糖提取率的影響分別準(zhǔn)確稱取姬松茸樣品100g,在六份樣品中分別加入蒸餾水,料液比1∶30,置于水溫為75、80、85、90、95、100℃的恒溫水浴鍋內(nèi)提取3h。6份樣品分別提取1次,紗布過濾后取濾液。在濾液中加入1倍體積的95%的乙醇,經(jīng)離心處理后分別加入乙醚和丙酮進(jìn)行洗滌,干燥后稱量粗多糖質(zhì)量。2.2.3.2浸提時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響分別準(zhǔn)確稱取姬松茸樣品100g,在七份樣品中分別加入蒸餾水,料液比1∶30,置于水溫為90℃的恒溫水浴鍋內(nèi)分別提取0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5h。72.2.3.3料液比對(duì)多糖提取率的影響分別準(zhǔn)確稱取姬松茸樣品100g,在六份樣品中分別加入蒸餾水,料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60。置于水溫為90℃2.2.4多糖提取條件優(yōu)化在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以浸提溫度、時(shí)間、料液比為因素采用三因素三水平正交試驗(yàn)(L933)對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化,因素水平表見表一[12]。表1因素水平表Table1Thetableofactorsandlevels水平因素A溫度(℃)B時(shí)間(h)C料液比19021∶202952.51∶30310031∶403結(jié)果與分析3.1多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制3.1.1多糖含量的測(cè)定運(yùn)用苯酚硫酸法,稱取少量姬松茸粉溶解到水中,加入苯酚和硫酸,用分光光度計(jì)測(cè)量吸光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出多糖含量為39%。3.2不同條件對(duì)姬松茸多糖提取率的影響3.2.1浸提溫度對(duì)多糖提取率的影響浸提溫度對(duì)姬松茸中多糖的提取的影響見圖一:Figure1Effectoftemperatureonextractionyield由圖1可見,隨著溫度的升高,多糖提取率逐漸增大。在90℃之后多糖提取率有明顯提高,說明熱水浸提溫度對(duì)多糖提取工藝有很大影響,可能伴隨溫度的提高,原料溶脹度增加,導(dǎo)致多糖溶出率增加。從圖中可看出在90℃~95℃之間有一定增幅,但是95℃~100℃3.2.2浸提時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響浸提時(shí)間對(duì)姬松茸中多糖的提取的影響見圖二Figure2Effectoftimeonextractionyield由圖2可見,在3h范圍內(nèi),隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng),多糖提取率在逐漸增大,在3h多糖提取率達(dá)到最大,后隨時(shí)間的延長(zhǎng)而下降。這可能是因?yàn)榻釙r(shí)間過長(zhǎng),姬松茸中其他物質(zhì)被浸提出來,使浸提液變稠,不利于后續(xù)乙醇沉淀時(shí)多糖的析出,從而影響提取率。長(zhǎng)時(shí)間浸提對(duì)多糖的物理和化學(xué)性質(zhì)也會(huì)產(chǎn)生不良影響,可能引起糖結(jié)構(gòu)的變化和破壞,甚至使其中的五碳糖或六碳糖裂解,導(dǎo)致提取率的下降。因此浸提時(shí)間以3h為宜。3.2.3浸提時(shí)料液比對(duì)多糖提取率的影響浸提時(shí)料液比對(duì)姬松茸中多糖的提取的影響見圖三:Figure3Effectofsolid-liquidrationonextractionyield由圖3可見,多糖提取率隨料液比的增加而增加,加水量越多,提取的多糖越容易溶解,損失量越少。在料液比達(dá)到1:30以后的曲線基本趨于平坦,多糖提取率增幅不明顯,但是加水量的增加會(huì)增加后續(xù)的濃縮時(shí)間和負(fù)擔(dān),并導(dǎo)致更高的能耗,這樣的料液比不利于實(shí)際生產(chǎn)。所以綜合考慮,料液比以1:30為好。3.2.4最佳條件的優(yōu)化根據(jù)以上單因素試驗(yàn)結(jié)果,選擇浸提溫度,浸提時(shí)間,料液比為考察因素,以多糖提取率為考察指標(biāo),進(jìn)行正交試驗(yàn)(L933),確定最佳提取工藝參數(shù)。結(jié)果見表2。表2正交試驗(yàn)結(jié)果Table2Theresultsoforthogonaldesign水平因素浸提溫度(℃)浸提時(shí)間(h)料液比多糖提取率(%)111118.37212219.62313321.54421218.83522322.11623122.78731320.41832122.72933222.63K159.5357.6163.87K263.7264.4561.08K365.7666.9564.06k119.8419.2021.29k221.2421.4820.36k321.9222.3221.35R2.083.120.99從正交實(shí)驗(yàn)的R值可以看出:浸提溫度影響較大,其次是料液比,浸提時(shí)間選取影響最小。根據(jù)極差分析得到的的最佳條件為:A3B3C3。但與實(shí)際最佳提取條件不符,需要對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。取100g姬松茸樣品按最佳提取條件提取,得到粗多糖提取率為23.01%。經(jīng)驗(yàn)證得知,A2B3C2為最佳提取條件,即在料液比為1:30,溫度為95℃4結(jié)論本文確定了姬松茸粗多糖提取的影響因素,得出影響姬松茸提取的主要因素為浸提溫度,其次為料液比,再次為浸提時(shí)間。用正交試驗(yàn)確定了其優(yōu)化提取條件為:在料液比為1:30,溫度為95℃的條件下浸提3h,姬松茸粗多糖提取率為23.01%參考文獻(xiàn)[1]史榮剛.姬松茸研究的現(xiàn)狀與展望[J].江蘇食用菌,1995,16(3):22—23[2]張連富,吉宏武.藥食兼用資源與生物活性成分.北京:化學(xué)工業(yè)出版社.2005.78[3]陳智毅等.巴西蘑菇的食療價(jià)值[J]tp國(guó)食用鼠2000,20(4):47.[4]崔紅霞,蘇富琴,趙學(xué)梅.姬松茸多糖抗腫瘤作用研究.中藥藥理與臨床,2006,22(2):27[5]王立榮,馮慶榮,徐小元等.姬松茸對(duì)慢性肝炎患者肝功影響的臨床觀察.蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1994,20(1):24[6]段縣平,馬吉飛,鄭東虎等.姬松茸多糖對(duì)小鼠急性肝損傷的保

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論