MALDITOFMS在細(xì)菌檢測(cè)中的應(yīng)用

MALDI-TOF-MS

在細(xì)菌檢測(cè)中的應(yīng)用目前一頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)2一現(xiàn)有的細(xì)菌檢測(cè)方法及其缺陷二基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜三MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用目前二頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)一、現(xiàn)有的細(xì)菌檢測(cè)方法及其缺陷3目前三頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)現(xiàn)有的細(xì)菌檢測(cè)方法及其缺陷經(jīng)典方法初步分類：菌落形態(tài)、顯微鏡檢查、以及趨向性試驗(yàn)，如革蘭染色、氧化酶和觸酶。鑒定屬或種：以細(xì)菌生長(zhǎng)代謝過程為基礎(chǔ)的特征性的生理生化反應(yīng)、選擇培養(yǎng)基生長(zhǎng)情況。缺陷雖然某些生化試驗(yàn)只需要數(shù)分鐘即可完成，但對(duì)于絕大多數(shù)經(jīng)過轉(zhuǎn)種、培養(yǎng)的微生物標(biāo)本，通常要得到一個(gè)完整的鑒定報(bào)告大約要24-48h，某些苛氧菌或生長(zhǎng)慢的細(xì)菌則耗時(shí)更多。操作繁瑣、主觀性強(qiáng)。4目前四頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)現(xiàn)有的細(xì)菌檢測(cè)方法及其缺陷分子生物學(xué)方法1.細(xì)菌核糖體（16SrRNA）基因序列分析：rRNA寡核苷酸序列是細(xì)胞中最穩(wěn)定的序列，比DNA穩(wěn)定的多。細(xì)菌中有三種rRNA，23S、16S和5S，其中16SrRNA因其核苷酸數(shù)目適中、信息量大、具有高度穩(wěn)定性、易于提取和分析而成為理想的細(xì)菌鑒定的研究對(duì)象。通過分析比較細(xì)菌rRNA序列的相關(guān)性確定細(xì)菌種系的發(fā)生關(guān)系。5目前五頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)現(xiàn)有的細(xì)菌檢測(cè)方法及其缺陷分子生物學(xué)方法

2.其他：鳥嘌呤加胞嘧啶堿基比例的測(cè)定(G+Cmol%)，核酸的分子雜交實(shí)時(shí)熒光定量PCR缺陷：技術(shù)復(fù)雜、耗費(fèi)高、假陽性率高、不能自動(dòng)化、高通量。不適合臨床常規(guī)檢測(cè)！6目前六頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)迫切需要找到一種新的病原微生物快速診斷的方法，以滿足臨床需要7現(xiàn)有的細(xì)菌檢測(cè)方法及其缺陷目前七頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)二、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜

8目前八頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)（一）質(zhì)譜的基本概念9目前九頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)質(zhì)譜的基本概念質(zhì)譜法(MassSpectrometry,MS)：定義：用電場(chǎng)和磁場(chǎng)將運(yùn)動(dòng)的離子（帶電荷的原子、分子或分子碎片，）按它們的質(zhì)荷比分離后進(jìn)行檢測(cè)的方法。沒有兩個(gè)核素的質(zhì)量是一樣的，也沒有一種核素的質(zhì)量恰好是另一種核素質(zhì)量的整數(shù)倍。分析這些離子可獲得化合物的分子量、化學(xué)結(jié)構(gòu)、裂解規(guī)律等信息。10目前十頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)原理：使樣品中各組分電離生成不同質(zhì)荷比的離子，經(jīng)加速電場(chǎng)的作用，形成離子束，進(jìn)入質(zhì)量分析器。利用電場(chǎng)和磁場(chǎng)使其發(fā)生相反的速度色散，離子束中：速度慢的離子通過電場(chǎng)后偏轉(zhuǎn)大，速度快的偏轉(zhuǎn)小速度慢的離子在磁場(chǎng)中偏轉(zhuǎn)較大，速度快的偏轉(zhuǎn)小在磁場(chǎng)中還能發(fā)生質(zhì)量的分離，使不同質(zhì)荷比的離子聚焦在不同的點(diǎn)上，將它們分別聚焦而得到質(zhì)譜圖，從而確定其質(zhì)量。11質(zhì)譜的基本概念目前十一頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)儀器：利用運(yùn)動(dòng)離子在電場(chǎng)和磁場(chǎng)中偏轉(zhuǎn)原理設(shè)計(jì)的儀器稱為質(zhì)譜計(jì)或質(zhì)譜儀。質(zhì)譜計(jì)指用電子學(xué)方法檢測(cè)離子，而質(zhì)譜儀指離子被聚焦在照相底板上進(jìn)行檢測(cè)。質(zhì)譜法的儀器種類較多。有單聚焦質(zhì)譜計(jì)、雙聚焦質(zhì)譜計(jì)和四極矩質(zhì)譜計(jì)等。后兩種用得較多，而且多與氣相色譜儀和電子計(jì)算機(jī)聯(lián)用。12質(zhì)譜的基本概念目前十二頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)高真空系統(tǒng)：質(zhì)譜計(jì)必須在高真空下才能工作。高真空的閥泵系統(tǒng)一般由前級(jí)泵（常用機(jī)械泵）和油擴(kuò)散泵或分子渦輪泵等組成。擴(kuò)散泵能使離子源保持在10-6～

10-7毫米汞柱的真空度。在分析器中還有一只擴(kuò)散泵，能維持10-7～10-8毫米汞柱的真空度。13質(zhì)譜的基本概念目前十三頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)樣品注入系統(tǒng)：可分直接注入、氣相色譜、液相色譜、氣體擴(kuò)散四種方法。固體樣品通過直接進(jìn)樣桿將樣品注入，加熱使固體樣品轉(zhuǎn)為氣體分子。對(duì)不純的樣品可經(jīng)氣相或液相色譜預(yù)先分離后，通過接口引入。液相色譜/質(zhì)譜接口有傳動(dòng)帶接口、直接液體接口和熱噴霧接口。14質(zhì)譜的基本概念目前十四頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)離子源：使樣品電離產(chǎn)生帶電粒子（離子）束的裝置。應(yīng)用最廣的電離方法是電子轟擊法（EI）。還有化學(xué)電離（CI）、光致電離、場(chǎng)致電離、激光電離、火花電離、表面電離、X射線電離、場(chǎng)解吸電離（desorptionionization）和快原子轟擊電離等。其中場(chǎng)解吸和快原子轟擊特別適合測(cè)定揮發(fā)性小和對(duì)熱不穩(wěn)定的化合物。15質(zhì)譜的基本概念目前十五頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)質(zhì)量分析器：將離子源中形成的離子束按質(zhì)荷比的大小進(jìn)行分離的裝置。它的結(jié)構(gòu)有單聚焦、雙聚焦、四極矩、飛行時(shí)間（TimeofFlight,TOF）和擺線等。16質(zhì)譜的基本概念目前十六頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)收集器：經(jīng)過分析器分離的同質(zhì)量離子可用照相底板、法拉第筒或電子倍增器收集檢測(cè)。質(zhì)譜儀的分辨率和靈敏度等性能非常高，只需要ug甚至ng級(jí)的樣品，就能得到一張滿意的質(zhì)譜圖。對(duì)于微量不純的化合物，可以利用氣相色譜或液相色譜（對(duì)極性大的化合物）將化合物分離成單一組分，導(dǎo)入質(zhì)譜計(jì)，錄下質(zhì)譜圖。17質(zhì)譜的基本概念目前十七頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)應(yīng)用：由于色譜儀－質(zhì)譜計(jì)聯(lián)用后給出的信息量大，該法與計(jì)算機(jī)聯(lián)用，使質(zhì)譜圖的規(guī)格化、背景或柱流失峰的舍棄、元素組成的給出、數(shù)據(jù)的儲(chǔ)存和計(jì)算、多次掃描數(shù)據(jù)的累加、未知化合物質(zhì)譜圖的庫(kù)檢索，以及打印數(shù)據(jù)和出圖等工作均可由計(jì)算機(jī)執(zhí)行，大大簡(jiǎn)化了操作手續(xù)。質(zhì)譜法特別是它與色譜儀及計(jì)算機(jī)聯(lián)用的方法，已廣泛應(yīng)用在有機(jī)化學(xué)、生化、藥物代謝、臨床、毒物學(xué)、農(nóng)藥測(cè)定、環(huán)境保護(hù)、石油化學(xué)、地球化學(xué)、食品化學(xué)、植物化學(xué)、宇宙化學(xué)和國(guó)防化學(xué)等領(lǐng)域。18質(zhì)譜的基本概念色譜質(zhì)譜計(jì)算機(jī)純化離子分離分析目前十八頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)質(zhì)譜儀：質(zhì)譜儀種類繁多，不同儀器應(yīng)用特點(diǎn)也不同。在300℃左右能汽化的樣品，可以優(yōu)先考慮用GC-MS進(jìn)行分析，因?yàn)镚C-MS使用電子轟擊法電離源（EI源），得到的質(zhì)譜信息多，可以進(jìn)行庫(kù)檢索。在300℃左右不能汽化，需要用LC-MS分析，此時(shí)主要得到分子量信息，如果是串聯(lián)質(zhì)譜，還可以得一些結(jié)構(gòu)信息。如果是生物大分子，主要利用LC-MS和MALDI-TOF分析，主要獲得分子量信息。對(duì)于蛋白質(zhì)樣品，還可以測(cè)定氨基酸序列。19質(zhì)譜的基本概念目前十九頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)質(zhì)譜儀：質(zhì)譜儀的分辨率是一項(xiàng)重要技術(shù)指標(biāo)，高分辨質(zhì)譜儀可以提供化合物組成式，這對(duì)于結(jié)構(gòu)測(cè)定是非常重要的。雙聚焦質(zhì)譜儀，傅立葉變換質(zhì)譜儀，帶反射器的飛行時(shí)間質(zhì)譜儀等都具有高分辨功能。20質(zhì)譜的基本概念目前二十頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)21質(zhì)譜的基本概念—質(zhì)譜儀目前二十一頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)（二）基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜

22目前二十二頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)1.什么是MALDI-TOF-MS基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（Matrix-AssistedLaserDesorptionIonizationTime-Of-FlightMassSpectrometry）最近發(fā)展起來的一種質(zhì)譜技術(shù)，能夠提供各具特征的微生物蛋白質(zhì)質(zhì)量指紋圖譜，通過檢索特征性質(zhì)質(zhì)譜峰數(shù)據(jù)庫(kù)或與已知微生物的質(zhì)譜峰比較，來實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物的快速鑒定具有快速、高靈敏度、高分辨率等優(yōu)點(diǎn)，能夠?qū)怂?、蛋白質(zhì)和多肽等生物大分子進(jìn)行微量分析.23基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜目前二十三頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)2.主要概念MALDI（Matrix-AssistedLaserDesorptionIonization）是一種直接氣化并離子化非揮發(fā)性生物樣品的質(zhì)譜離子化方式。將被分析物的溶液和某種基質(zhì)溶液混合，蒸發(fā)溶劑，使被分析物與基質(zhì)成為晶體或半晶體，再用一定波長(zhǎng)的脈沖式激光進(jìn)行照射，基質(zhì)吸收激光能量后，均勻地傳遞給待分析物，使待分析物瞬間氣化并離子化。使用基質(zhì)的主要目的是保護(hù)待分析物不會(huì)因?yàn)檫^強(qiáng)的激光能量導(dǎo)致化合物被破壞。24基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜目前二十四頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)2.主要概念TOF（TimeOfFlight），飛行時(shí)間分析器：具有相同動(dòng)能，不同質(zhì)量的離子，因其飛行速度不同而分離。如果固定離子飛行距離，則不同質(zhì)量離子的飛行時(shí)間不同，質(zhì)量小的離子飛行時(shí)間短而首先到達(dá)檢測(cè)器。25基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜目前二十五頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)3.基本原理：將微生物與等量的基質(zhì)分別點(diǎn)在加樣板上，溶劑揮發(fā)后形成樣品和基質(zhì)的共晶體基質(zhì)從激光中吸收能量使樣品解吸，基質(zhì)與樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使得樣品分子電離經(jīng)過飛行時(shí)間檢測(cè)器，根據(jù)到達(dá)檢測(cè)器的飛行時(shí)間不同而被檢測(cè)。

即通過測(cè)定離子的質(zhì)荷比（M/Z）與離子的飛行時(shí)間成正比來檢測(cè)離子的分子量通過專用軟件分析比較，確定出特異性的指紋圖譜26基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜目前二十六頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)27MALDI-TOF-MS原理圖基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜目前二十七頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)三、MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用

28目前二十八頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)基于細(xì)菌表面蛋白分子量檢測(cè)的MALDI-TOF-MS技術(shù)是一種全新的微生物快速檢測(cè)和鑒定技術(shù)。通過測(cè)定細(xì)菌自身獨(dú)特的蛋白質(zhì)組成，應(yīng)用質(zhì)譜技術(shù)將測(cè)得的蛋白質(zhì)和多肽按分子量大小排列，形成獨(dú)特的蛋白質(zhì)組指紋圖，通過特征性的模式峰進(jìn)行菌株的鑒定。29MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用目前二十九頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)（一）簡(jiǎn)要操作流程1.制備基質(zhì)溶液2.樣品的制備3.質(zhì)譜分析4.數(shù)據(jù)分析30MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用目前三十頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)制備基質(zhì)溶液：常用的基質(zhì)有圖示的4種?；|(zhì)種類可能影響質(zhì)譜峰的形成。有研究表明，DHB50mg/mL，3150%乙腈，0.1%三氟乙酸為基質(zhì)，檢測(cè)液體培養(yǎng)細(xì)菌，可獲得最佳質(zhì)譜圖。

現(xiàn)已有商品化的配套基質(zhì)溶液可以購(gòu)買。MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用目前三十一頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)2.樣品的制備（A）直接挑菌落涂片（75%～90%）（B）乙醇/乙晴處理（10%～20%）臨床標(biāo)本接種于培養(yǎng)基（液體或固體）挑取菌落或取液體培養(yǎng)液，經(jīng)水和乙醇處理再經(jīng)70%甲酸/乙腈（1：1）處理32MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用目前三十二頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)3.質(zhì)譜分析取一定量樣品上清液點(diǎn)加到靶盤上，晾干后再點(diǎn)等量基質(zhì)（如CHCA等），放干后進(jìn)行MALDI-TOF-MS分析脈沖激光、模式、加速電壓、激光強(qiáng)度等參數(shù)還未獲得一個(gè)統(tǒng)一的模式，需要優(yōu)化。33MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用Ekin=1/2mV2目前三十三頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)4.數(shù)據(jù)分析

通過軟件處理質(zhì)譜圖，并進(jìn)行主成分分析*橫坐標(biāo)為質(zhì)荷比（m/z），縱坐標(biāo)為吸收峰強(qiáng)度34MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用目前三十四頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)35MALDI-TOF-MS在臨床微生物中的應(yīng)用簡(jiǎn)要操作流程目前三十五頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)36（二）MALDI-TOF-MS在細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用范圍細(xì)菌菌種鑒定多血清型細(xì)菌鑒定耐藥性不同的菌株鑒定真菌的鑒定血液、尿液及其他無菌液體標(biāo)本的鑒定糞便標(biāo)本的鑒定目前三十六頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)MALDI-TOF-MS在細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用范圍1、細(xì)菌菌種鑒定Eigner等應(yīng)用細(xì)菌菌落直接檢測(cè)上千株代表臨床微生物實(shí)驗(yàn)室主要分離的細(xì)菌，能準(zhǔn)確鑒定95.2%。Seng等研究1066株分離細(xì)菌菌株，代表109個(gè)不同的種，84.1%能準(zhǔn)確鑒定到種，11.3%只能鑒定到屬。Bizzini等分析1371株臨床分離株發(fā)現(xiàn)93.2%能鑒定到種水平，5.3%到屬水平。在鑒定到種的水，MS和傳統(tǒng)生化方法平一致率為95.1%。37目前三十七頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)MALDI-TOF-MS在細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用范圍1、細(xì)菌菌種鑒定在鑒定非發(fā)酵菌方面，用人類感染相關(guān)的37個(gè)屬的248株非發(fā)酵菌建立數(shù)據(jù)庫(kù)，測(cè)定80株臨床分離菌，并且和16SrRNA基因序列分析比較。MS能鑒定67株（85.9%），9株鑒定錯(cuò)誤，2株不能鑒定。結(jié)論：MALDI-TOF-MS能準(zhǔn)確、可重復(fù)地鑒定細(xì)菌且在10min內(nèi)，不需要其他的耗材。

結(jié)果錯(cuò)誤或不能鑒定是由于MALDI-TOF-MS數(shù)據(jù)庫(kù)不完善，大部分的差異是因?yàn)橄到y(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù)相關(guān)的分類學(xué)差異。38目前三十八頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)2、多血清型細(xì)菌的鑒定傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)和生化鑒定方法無法對(duì)沙門氏菌、大腸埃希氏菌、霍亂弧菌和副溶血性弧菌等多種與人類健康密切相關(guān)的多血清型病原菌進(jìn)行分類，需要進(jìn)一步采用血清學(xué)或噬菌體試驗(yàn)等技術(shù)。應(yīng)用MALDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)這些多血清型細(xì)菌進(jìn)行鑒定和分類得到了初步應(yīng)用，在沙門氏菌分型中表現(xiàn)出較好的分型能力。39MALDI-TOF-MS在細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用范圍目前三十九頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)3、耐藥性不同的菌種一些研究表明MALDI-TOF-MS可以快速區(qū)分凝固酶陽性和凝固酶陰性的金黃色葡萄球菌美國(guó)范德堡大學(xué)和英國(guó)曼切斯特大學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)MALDI-TOF-MS可部分替代甲氧西林或頭孢西丁紙片法檢測(cè)耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌（MRSA）可以用MALDI-TOF-MS檢測(cè)針對(duì)抗菌劑分子的細(xì)菌各種獲得性酶，如β-內(nèi)酰胺酶、甲基化酶、質(zhì)子泵等。40MALDI-TOF-MS在細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用范圍目前四十頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)4、真菌MALDI-TOF-MS可用來鑒定酵母菌、酵母樣菌、絲狀霉菌。Marklein等研究表明，250株臨床分離的念珠菌，包含15個(gè)種，96%可準(zhǔn)確鑒定。5、血液、尿液及其他無菌液體標(biāo)本應(yīng)用血清分離管或氯化銨溶血標(biāo)本，MS直接鑒定>79%的單一細(xì)菌感染。MS對(duì)尿液標(biāo)本中的細(xì)菌快速、準(zhǔn)確，尤其是大腸埃希菌，正確鑒定率為97.6%。也有研究應(yīng)用MS直接檢測(cè)和鑒定其他正常無菌液體中的細(xì)菌，正確鑒定率為96%。41MALDI-TOF-MS在細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用范圍目前四十一頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)6、糞便標(biāo)本直接從糞便選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的可疑菌落進(jìn)行MALDI-TOF-MS分析，從而對(duì)常規(guī)引起腹瀉的致病菌進(jìn)行快速鑒別與鑒定。該方法可提前2～3d對(duì)大多數(shù)非乳糖發(fā)酵正常菌群，如大腸埃希菌、枸櫞酸桿菌、變形桿菌、陰溝腸桿菌、摩根菌等做出準(zhǔn)確判定。42MALDI-TOF-MS在細(xì)菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用范圍目前四十二頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)快速檢測(cè)耐甲氧西林金葡菌

（MRSA）（三）MALDI-TOF-MS應(yīng)用舉例43目前四十三頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)1.配制基質(zhì)溶液最佳基質(zhì)溶液是50mg/mLDHB+50%乙腈+0.1%三氟乙酸（TFA）。2.制備樣品所有菌株按照1%的比例接種于5mLLB培養(yǎng)基中,在37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器中培養(yǎng)8h。取1mL培養(yǎng)液6000×g離心3min收集菌體,用75%乙醇溶液滅活,離心去上清。用超純水將菌體洗滌2次,最后用1mL超純水重懸菌體。取1μL細(xì)菌重懸液與1μL基質(zhì)溶液充分混合后點(diǎn)樣,室溫干燥。44MALDI-TOF-MS應(yīng)用舉例目前四十四頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)3.質(zhì)譜分析選用配置脈沖氮激光(337nm)離子源的UltraflexⅢ串聯(lián)質(zhì)譜儀,線性模式,正離子譜測(cè)定,加速電壓控制在22kV。每個(gè)樣品隨機(jī)選擇10個(gè)不同的點(diǎn),累擊2000次,相對(duì)激光強(qiáng)度為40%,掃描范圍2000～20000Da。用1pmol的標(biāo)肽和標(biāo)準(zhǔn)蛋白混合物對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校正,使誤差<0.1%.4.數(shù)據(jù)分析通過FlexAnalysis3.0軟件處理質(zhì)譜圖,包括質(zhì)譜圖的平滑、衰減及標(biāo)峰處理(信噪比大于5)。通過ClinProToolTM2.1軟件進(jìn)行主成分分析。

45MALDI-TOF-MS應(yīng)用舉例目前四十五頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)根據(jù)主成分分析,可以對(duì)一套譜圖進(jìn)行自動(dòng)多變量分析。對(duì)11株細(xì)菌分別進(jìn)行培養(yǎng)檢測(cè),每株細(xì)菌重復(fù)點(diǎn)3個(gè)靶點(diǎn),應(yīng)用主成分分析能夠?qū)?shí)驗(yàn)中的3種細(xì)菌明顯地區(qū)分開。46a：大腸桿菌；b：志賀氏菌；c：副傷寒沙門氏菌MALDI-TOF-MS應(yīng)用舉例目前四十六頁\總數(shù)五十三頁\編于十四點(diǎn)MALDI-TOF-MS所得質(zhì)譜圖47AB大腸埃希菌