理化鑒別薄層色譜鑒別法

中藥制劑分析技術(shù)理化鑒別——薄層色譜鑒別法ShandongCollegeofTraditionalChineseMedicine一、概述薄層色譜法是將適宜的吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層，在同一塊薄層板上點(diǎn)加供試品和對(duì)照品，在相同條件下展開，顯色劑顯色，檢出色譜斑點(diǎn)，對(duì)比供試品與對(duì)照品的色譜圖進(jìn)行定性鑒別。薄層色譜鑒別法

二、儀器與材料

薄層板及固定相涂布器點(diǎn)樣器展開箱顯色與檢測(cè)儀器薄層色譜鑒別法1.薄層板具有一定機(jī)械強(qiáng)度、化學(xué)惰性、耐一定溫度、表面平整、厚度均勻，價(jià)格合理，常用為玻璃板。玻璃板的常用規(guī)格：5×20cm、10×20cm、20×20cm，要求光滑、平整、洗凈后不附水珠、干燥。任務(wù)3理化鑒別法2.固定相

硅膠：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶酸性；氧化鋁：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶堿性；硅藻土：中性吸附劑；纖維素：液-液分配色譜擔(dān)體（水為固定液），具一定粘性；聚酰胺：特殊有機(jī)薄層材料。硅膠G(含粘合劑煅石膏)，GF254(含波長(zhǎng)254nm熒光劑)，硅膠H(不含粘合劑)，硅膠HF254薄層色譜鑒別法3.涂布器有手工、半自動(dòng)、全自動(dòng)薄層涂布器薄層色譜鑒別法4.點(diǎn)樣器材

常用微升毛細(xì)管或手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器微升毛細(xì)管全自動(dòng)點(diǎn)樣器手動(dòng)點(diǎn)樣器薄層色譜鑒別法5.展開箱

上行展開可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時(shí)須能密閉；水平展開用專用的水平展開缸。薄層色譜鑒別法6.顯色與檢測(cè)儀器顯色有噴霧法及浸漬法薄層色譜數(shù)碼相機(jī)成像系統(tǒng)噴霧顯色熒光顯色薄層色譜鑒別法三、操作方法制板供試液及對(duì)照液的制備點(diǎn)樣展開顯色與檢視結(jié)果判斷與記錄薄層色譜鑒別法1.制板

市售薄層板：臨用前，110℃活化30min

聚酰胺薄膜不用活化自制薄層板一份固定相研磨混勻涂布器涂布三份水（或含有黏合劑的水溶液）自然干燥用前活化鋪制薄層板薄層色譜鑒別法自制薄層板的質(zhì)量要求：使用前應(yīng)在反射光及透射光下檢查其質(zhì)量，表面應(yīng)均勻、平整、光滑，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損、無(wú)污染。2.對(duì)照物的選擇與對(duì)照品溶液的制備對(duì)照物分為對(duì)照品（主要為有效成分和特征性成分的單體）、對(duì)照藥材和對(duì)照提取物三種。

對(duì)照物的設(shè)置方式：①對(duì)照品對(duì)照②對(duì)照品與對(duì)照提取物或?qū)φ账幉膶?duì)照(“雙對(duì)照”)

薄層色譜鑒別法3.點(diǎn)樣原點(diǎn)一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀。原點(diǎn)距薄層板底邊10～15mm，高效板原點(diǎn)基線離底邊8～10mm。原點(diǎn)直徑一般不大于4mm；條帶狀的寬度一般為5～10mm。高效板條帶寬度為4～8mm，原點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜，一般不少于8mm，高效板樣品間隔不少于5mm。薄層色譜鑒別法注意：點(diǎn)樣時(shí)勿損傷薄層表面薄層色譜鑒別法4.展開

展開劑的制備：新鮮配制展開：點(diǎn)樣后的薄層板放入加有展開劑的層析缸中，密閉，一般上行展開，薄層板浸入展開劑深度一般要求溶劑最初的前沿距原點(diǎn)約5mm，展開至規(guī)定展距后立即將薄層板取出，晾干，以備檢測(cè)。

展距：一般8～15cm，高效板5～8cm預(yù)吸附中展開中薄層色譜鑒別法5.顯色與檢視顯色：噴霧法或浸漬法噴霧顯色法熒光顯色法薄層色譜鑒別法5.顯色與檢視熒光淬滅斑點(diǎn)熒光淬滅法的GF254薄層板日光檢視紫外光365nm或254nm下檢視薄層色譜鑒別法四、注意事項(xiàng)

制備薄層板應(yīng)清潔干燥后制板；預(yù)制薄層板選擇符合要求的產(chǎn)品；使用新鮮溶劑配制展開劑；保持恒溫恒濕展開槽應(yīng)密閉良好注意防止邊緣效應(yīng)配制多元展開劑時(shí)，各種溶劑應(yīng)分別量取后再混合。同一物質(zhì)，在同一薄板上，用同一展開劑展開，出現(xiàn)邊緣部分的比移值大于中央部分的比移值的現(xiàn)象薄層色譜鑒別法

例：首烏丸的薄層色譜鑒別

提取方法：甲醇提取固定相：硅膠G+0.5%NaOH展開劑：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1）1大黃素2大黃素甲醚3-4何首烏對(duì)照藥材5首烏丸首烏丸的薄層色譜薄層色譜鑒別法T