細(xì)胞工程習(xí)題s

緒論1.生物技術(shù)：以生命科學(xué)為基礎(chǔ)，運用生物體系和工程學(xué)原理生產(chǎn)生物制品和發(fā)明新物種的一門綜合技術(shù)。重要涉及細(xì)胞工程、基因工程、發(fā)酵工程、酶工程、蛋白質(zhì)工程、生化工程。2.細(xì)胞工程是指應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)等方法，通過類似于工程學(xué)的環(huán)節(jié)，在細(xì)胞或細(xì)胞器水平上按照人們的醫(yī)院來改變下包內(nèi)的遺傳物質(zhì)，以獲得新的生物物種、品種或特種細(xì)胞產(chǎn)品的一門綜合性技術(shù)。3.細(xì)胞工程重要研究內(nèi)容：1）動植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)：重要涉及細(xì)胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。2）細(xì)胞融合3）染色體工程：按人們的需要來添加、削減或替換染色體的一種技術(shù)。重要用于新品種的哺育。4）胚胎工程：重要針對動物。涉及胚胎分割、胚胎融合、細(xì)胞核移植、體外受精、胚胎培養(yǎng)等。5）細(xì)胞遺傳工程：重要涉及動物克隆和轉(zhuǎn)基因技術(shù)。4.細(xì)胞工程的應(yīng)用：1）植物方面的應(yīng)用：微繁殖技術(shù)的應(yīng)用、細(xì)胞大量培養(yǎng)與有用代謝產(chǎn)物生產(chǎn)、單倍體技術(shù)的應(yīng)用、胚培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)、轉(zhuǎn)化。2）動物方面的應(yīng)用：快速繁殖優(yōu)良、瀕危品種及新品種；運用動物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)活性產(chǎn)物、藥品；供醫(yī)學(xué)器官修復(fù)或移植的組織工程；轉(zhuǎn)基因動物的生物反映器。3）細(xì)胞工程在能源、環(huán)境保護等領(lǐng)域的應(yīng)用第一章組織培養(yǎng)的基本設(shè)備和基本方法1.植物細(xì)胞工程（plantcellengineering）:一種在細(xì)胞水平上進行遺傳操作的生物技術(shù)，它以植物細(xì)胞為對象，通過離體培養(yǎng)，實現(xiàn)植物個體快速繁殖、品種改良或有效成分的生產(chǎn)和應(yīng)用的目的。研究內(nèi)容：（1）器官培養(yǎng)（organculture）：指對植物根、莖、葉、花、果實以及各部原基（芽原基、根原基）的培養(yǎng)。（2）胚胎培養(yǎng)（embryo～）：指以胚珠、幼胚、成熟胚（涉及胚乳）為材料的離體培養(yǎng)。（3）組織培養(yǎng)（tissue～）：指以植物各部分組織為材料的離體培養(yǎng)，如莖組織、葉肉組織、根組織、中柱鞘、形成層、髓組織等。（4）細(xì)胞培養(yǎng)（cell～）：指以能保持較好分散性的植物細(xì)胞或很小的細(xì)胞團為材料進行的離體培養(yǎng)。（5）原生質(zhì)體培養(yǎng)（protoplast～）：指對脫除細(xì)胞壁的裸露細(xì)胞的培養(yǎng)，使其在特定培養(yǎng)基上重新形成細(xì)胞壁，并繼續(xù)分裂、分化形成完整植株。2.基本培養(yǎng)基：培養(yǎng)基由無機營養(yǎng)（大量元素、微量元素）、有機營養(yǎng)（碳源、維生素、氨基酸）和激素這幾大類成分構(gòu)成。不具有激素的培養(yǎng)基稱為基本培養(yǎng)基，如常用的基本培養(yǎng)基有MS、LS、AA、SH培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基的基本成分：（1）無機營養(yǎng)（大量、微量）（2）有機營養(yǎng)（碳源、氮源、生理活性物質(zhì)）（3）植物激素：生長素類（IAA、IBA、NAA）、細(xì)胞分裂素類（KT、BA、ZT）、其他類（GA3、ABA、乙烯）。（4）附加物類：瓊脂、活性炭、蛋白水解物等。3.培養(yǎng)基的滅菌方式：高溫消毒、過濾消毒4.常用的滅菌方法：1）干熱滅菌法：運用鼓風(fēng)機干箱進行烘烤滅菌。合用于各種玻璃器皿和器械的滅菌消毒。2）濕熱滅菌法：運用高壓蒸汽滅菌的方法。合用于培養(yǎng)基、蒸餾水、各種器械等物品滅菌。3）熏蒸滅菌法：運用藥物熏蒸以達(dá)成滅菌的目的。合用于接種室和培養(yǎng)室的滅菌。4）過濾滅菌法：指用細(xì)菌過濾器進行滅菌的方法。使用的濾膜孔徑在0.3～0.45um范圍內(nèi)。5）藥劑滅菌法：指采用一定濃度的化學(xué)藥品進行滅菌的方法。如氯化汞、漂白粉等。6）燒灼滅菌法：指用酒精燈燒灼進行滅菌的方法。合用于接種器械、瓶口、瓶塞的滅菌。7）照射滅菌法：指用紫外燈照射進行滅菌的方法。合用于接種室內(nèi)和工作臺面的消毒滅菌。植物材料的消毒方式：次氯酸鈣、次氯酸鈉、過氧化氫、氯化汞等。植物材料進行消毒解決后，必須用無菌水沖洗3～4次，以清除消毒的殘留。第二章植物細(xì)胞的全能性與脫分化、再分化1.植物細(xì)胞全能性（totipotent）：指植物細(xì)胞具有該植物體所有遺傳信息，在一定條件下如同受精卵同樣，具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力，涉及兩種含義：1)植物細(xì)胞無論是生殖細(xì)胞還是體細(xì)胞，均具有該物種所有的遺傳信息；2）每個植物細(xì)胞均具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。離體培養(yǎng)條件下植物細(xì)胞全能性實現(xiàn)的途徑：①以植物體細(xì)胞為材料，植株有兩套染色體，可正常開花；②以性細(xì)胞為材料，含單套染色體組，不能正常開花；③以原生質(zhì)體為材料；④通過某種方式促進不同的原生質(zhì)體融合，得雜種植株；⑤外源基因?qū)胫参锛?xì)胞。2.細(xì)胞分化（differentiation）指由于細(xì)胞的分工而導(dǎo)致的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的改變，或發(fā)育方式改變的過程。3.胚性細(xì)胞(embryogeniccells）：可以在離體環(huán)境下增殖，可以分化發(fā)育成完整的植株的細(xì)胞。4.細(xì)胞脫分化（dedifferentiation）：指在離體培養(yǎng)條件下，分化細(xì)胞失去其原有分化的典型特性，轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)或胚性狀態(tài)的現(xiàn)象。條件：創(chuàng)傷和外源激素。第三章影響植物細(xì)胞脫分化和再分化的因子1.影響植物細(xì)胞脫分化和再分化的因子：重要涉及內(nèi)因和外因兩個方面。內(nèi)因：重要指植物的遺傳特性和生理狀態(tài)。；外因：重要涉及植物細(xì)胞營養(yǎng)條件（無機營養(yǎng)、有機營養(yǎng)、植物激素、天然提取物等）和環(huán)境條件（滲透壓、酸堿度、溫度、濕度、光照等）。2.常用的植物激素有哪些？各有什么作用？1）生長素：IAA、IBA、NAA等。作用：促進細(xì)胞分裂和伸長；使頂芽保持頂端優(yōu)勢；刺激生根；加速木質(zhì)部導(dǎo)管的形成；防止葉片的脫落。2）細(xì)胞分裂素：KT、6-BA、ZT等。作用：促進細(xì)胞的分裂和器官的形成；終止種子和芽的休眠；打破頂端優(yōu)勢；延遲葉片衰老；增長酶活性；促進物質(zhì)運送；提高機體的抗逆性。3）赤霉素（不耐高溫）作用：促進細(xì)胞的伸展和莖葉的伸長；誘導(dǎo)長日照植物提前開花；促進果實發(fā)育，誘導(dǎo)單性生殖等；誘導(dǎo)某些酶的合成；打破種子或器官的休眠。4）乙烯作用：加速果實的成熟和組織的老化。5）脫落酸作用：促進芽和種子進入休眠狀態(tài)；促進某些短日照植物提前開花等。第四章植物組織培養(yǎng)與快速繁殖1.植物的繁殖方式：1）有性繁殖：指植物通過開花、傳粉、受精和產(chǎn)生種子的繁殖過程。2）無性繁殖：指植物的營養(yǎng)生長到一定期期，就進入生殖生長階段，產(chǎn)生具有生殖功能的細(xì)胞，這些細(xì)胞不經(jīng)兩性結(jié)合，可直接發(fā)育新個體的繁殖方式。3）營養(yǎng)繁殖：屬于無性繁殖。2.微繁殖技術(shù)：以植物的器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體為外植體，在立體培養(yǎng)條件下快速進行植株再生的技術(shù)。微繁殖技術(shù)用途：1）克服高度雜合物種因有性繁殖而引起的后代嚴(yán)重分離；2）名優(yōu)植物或瀕危植物的快速繁殖；3）無病毒苗木生產(chǎn)；4）單獨繁殖雌株或雄株；5）種質(zhì)資源保存。3.舉例說明微繁殖技術(shù)的過程?（紅豆杉的芽培養(yǎng)與快速繁殖）：1）取材及低溫預(yù)解決：從優(yōu)良的成年樹或扦插苗上采用枝條，放入4℃的冰箱中解決4天，備用。；2）消毒解決；3）外植體的制備及接種培養(yǎng)；4）繼代培養(yǎng)及褐化的防止；5）壯芽培養(yǎng)；6）生根培養(yǎng)4.愈傷組織：脫分化后的細(xì)胞，通過度裂，產(chǎn)生無組織結(jié)構(gòu)、無明顯極性的細(xì)胞團稱為愈傷組織。其細(xì)胞大而不規(guī)則，高度液泡化，沒有次生細(xì)胞壁和胞間連絲。外植體：指植物組織培養(yǎng)中用來進行離體無菌培養(yǎng)的材料的切塊或切斷（如子葉的切塊、胚軸切段、莖段等），也可以是器官、組織、細(xì)胞和原生質(zhì)體。繼代培養(yǎng)：外植體在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間以后，培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)局限性、水分散失，并且積累一些代謝產(chǎn)物，需將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到新的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，這種轉(zhuǎn)移培養(yǎng)的過程稱為繼代。5.當(dāng)前植物脫病毒的方法重要有：莖尖培養(yǎng)脫毒法、高溫和低溫解決脫毒法、化學(xué)解決脫毒法、微體嫁接離體培養(yǎng)脫毒法、株心組織培養(yǎng)脫毒法等、蒜臺圓盤培養(yǎng)脫毒法。6.莖尖培養(yǎng)脫病毒的因素：能量競爭；傳導(dǎo)克制；激素克制；酶缺少導(dǎo)致克制；克制因子存在影響因素：第五章胚胎培養(yǎng)1.胚培養(yǎng)涉及幾種？成熟胚培養(yǎng)：將成的種子通過表面滅菌，在超凈工作臺上解剖種子，取出胚，接種在培養(yǎng)基上，在常規(guī)條件下進行培養(yǎng)即可萌發(fā)形成完整植株。幼胚培養(yǎng)：幼胚在胚珠中是異養(yǎng)的，培養(yǎng)時須通過培養(yǎng)基提供足夠的營養(yǎng)和適宜的培養(yǎng)條件2.影響幼胚培養(yǎng)的因素：胚胎發(fā)育時期、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件3.克制幼胚提前萌發(fā)的措施：1）提高培養(yǎng)基的滲透壓。提高培養(yǎng)基中蔗糖的濃度（高于10%），或加入甘露醇，部分地代替蔗糖。2）加入0.01～0.2mg/L的ABA和200～500mg/L的酪蛋白水解物。其中ABA的作用在于克制幼胚的吸水過程，是胚胎逐漸脫水干燥，發(fā)育為形態(tài)正常的成熟胚，然后產(chǎn)生健壯的幼苗。3）將培養(yǎng)物在高溫（32℃）和強光條件下培養(yǎng)。4.胚培養(yǎng)的應(yīng)用：拯救雜種胚，獲得稀有雜種；單倍體的產(chǎn)生；打破種子休眠，縮短育種周期；稀有植物的繁殖5.胚乳培養(yǎng)的應(yīng)用前景如何？P1106.離體受精：將精子及卵細(xì)胞分離出來，在體外融合成受精卵的過程過程：精子的分離，卵細(xì)胞的分離，精卵離體的融合，合子離體培養(yǎng)7.影響胚狀體發(fā)生的因素：供體植物的基因型、外植體的來源和培養(yǎng)物的生理狀況、與胚狀體發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá)、培養(yǎng)基中外源激素、培養(yǎng)基的氮源、天然提取物和活性炭對胚狀體形成的作用。8.人工種子：將植物組織培養(yǎng)產(chǎn)生的胚狀體包裹上用有機化合物和營養(yǎng)物質(zhì)制作的人工種皮，即為人工種子。制作過程：1）胚狀體同步發(fā)育的控制；2）人工種皮的研制；3）人工胚乳；4）胚狀體的包埋。特點：具有發(fā)育良好的體細(xì)胞胚，并能發(fā)育成正常的完整植株；具有人工胚乳可提供種胚發(fā)育的營養(yǎng)；具有能引起保護作用的人工種皮。9.胚珠培養(yǎng)：將胚珠從子房中剝離出來進行培養(yǎng)，然后將花粉授在胚珠的珠孔端，可實現(xiàn)雙受精，獲得健康的種子。第六章花藥培養(yǎng)1.藥培養(yǎng)的一般程序：1）取材：從植株上取花藥單核期的花蕾或幼穗。2）預(yù)解決：在保濕條件下低溫預(yù)解決。3）消毒：對花藥進行常規(guī)表面消毒。4）接種及培養(yǎng)：將花藥接種到合適的培養(yǎng)基上，在適宜溫度下進行培養(yǎng)。5）植株再生：將花粉胚或花粉愈傷組織轉(zhuǎn)入再生培養(yǎng)基中，進行植株再生培養(yǎng)。6）染色體加倍：在試管階段或移栽成活后，采用秋水仙素解決等方法對花粉植株的染色體加倍。2.影響花藥培養(yǎng)的因素：1）供體的基因型；2）供體植株的生理狀況；3）花粉的發(fā)育時期；4）材料的預(yù)解決和預(yù)培養(yǎng)；5）培養(yǎng)基；6）培養(yǎng)方式；7）培養(yǎng)條件4.單倍體在植物遺傳育種中的作用：1）控制雜種分離，縮短育種周期；2）提高常規(guī)育種的選擇效率；3）單倍體是誘變育種的良好材料；誘導(dǎo)單倍體的途徑：1）自然界自發(fā)單倍體發(fā)生①孤雌生殖：由胚囊中未受精的卵細(xì)胞（大孢子）分裂形成單倍體胚，進一步發(fā)育成單倍體植株。②孤雄生殖：傳粉后卵細(xì)胞退化消失，由精細(xì)胞發(fā)育成單倍體植株。③無融合生殖：由胚囊中卵細(xì)胞之外的其他細(xì)胞發(fā)育成單倍體植物。④體細(xì)胞減數(shù)分裂：體細(xì)胞減數(shù)分裂的幾率很小，只是偶爾發(fā)生。2）人工誘導(dǎo)單倍體的途徑：①孤雄生殖：離體培養(yǎng)花藥或花粉，誘發(fā)小孢子發(fā)育成單倍體植物。②孤雌生殖：離體培養(yǎng)未受精的子房或胚珠，誘發(fā)卵細(xì)胞發(fā)育成單倍體植株。第七章原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交1.原生質(zhì)體：指去掉細(xì)胞壁的單細(xì)胞，它是離體培養(yǎng)條件下可以再生完整植株的最小單位。2.分離原生質(zhì)體的方法：1）機械分離法：能避免酶制劑對原生質(zhì)體的破壞作用，但產(chǎn)量少；2）酶解分離法影響原生質(zhì)體活力的因素：酶的種類和組合、滲透壓穩(wěn)定劑、質(zhì)膜穩(wěn)定劑、pH值、溫度、植物材料的生理狀態(tài)。3.培養(yǎng)方式有幾種？影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素是什么？原生質(zhì)體培養(yǎng)方式：固體培養(yǎng)、液體淺層培養(yǎng)、雙層培養(yǎng)、微滴培養(yǎng)、滋養(yǎng)培養(yǎng)影響原生質(zhì)體培養(yǎng)的因素：原生質(zhì)體的活力、原生質(zhì)體密度、細(xì)胞壁再生速度、培養(yǎng)條件4.原生質(zhì)體培養(yǎng)目的：原生質(zhì)體融合，克服遠(yuǎn)緣雜交障礙，實現(xiàn)體細(xì)胞雜交，產(chǎn)生雜交后代5.原生質(zhì)體的融合方式：1）自發(fā)融合:由于細(xì)胞間胞間絲的擴展和粘連，有些相鄰的原生質(zhì)體間能彼此自發(fā)融合。2）誘發(fā)融合：NaNO3誘導(dǎo)融合、高pH和高鈣離子誘導(dǎo)融合、PEG誘導(dǎo)融合、PEG與pH、高鈣離子相結(jié)合的誘導(dǎo)法、電擊融合。6.同核體：同一親本原生質(zhì)體自身融合即自體融合，得到同核體。異核體：由于不同種親本原生質(zhì)體見發(fā)生融合即異體融合，得到異核體。7.如何對雜種細(xì)胞進行選擇？如何進行體細(xì)胞雜種的鑒定？選擇：互補選擇法（白化互補、遺傳互補）、運用對外源激素的規(guī)定不同進行選擇、運用生長習(xí)性和愈傷組織顏色不同進行選擇、根據(jù)原生質(zhì)體形態(tài)機械分離雜種細(xì)胞、熒光染色標(biāo)記法。鑒定：形態(tài)特性觀測、染色體數(shù)目和核型檢查、生物化學(xué)與分子生物學(xué)檢測。8.體細(xì)胞雜交在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用：1）體細(xì)胞雜合形成新物種2）體細(xì)胞雜交可哺育抗病新品種3）胞質(zhì)雜種在育種上的應(yīng)用9.滋養(yǎng)培養(yǎng)：是運用可以分泌腎功能無活性物質(zhì)的細(xì)胞或組織培養(yǎng)物作為滋養(yǎng)者，來促進原生質(zhì)體的分裂和生長。10．看護培養(yǎng)法：是指用一塊活躍生長的愈傷組織塊來看護單個細(xì)胞，并使其生長和增殖11.不對稱的細(xì)胞融合技術(shù)：使一個親本的原生質(zhì)體和另一個親本的細(xì)胞質(zhì)結(jié)合在一起雜種細(xì)胞：具有一個親本細(xì)胞核的兩個親本細(xì)胞質(zhì)的體細(xì)胞雜種。胞質(zhì)雜種細(xì)胞產(chǎn)生的途徑：正常原生質(zhì)體+去核的原生質(zhì)體；正常的原生質(zhì)體+核失活的原生質(zhì)體；融合后的某一個階段一個親本的核或染色體被排除。第九章植物細(xì)胞培養(yǎng)1.植物細(xì)胞大量培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物：藥用代謝產(chǎn)物（苷類、甾醇、生物堿、醌類、蛋白質(zhì)類、有機酸等）、天然食物添加劑、殺蟲劑和殺菌劑。2.植物細(xì)胞大量培養(yǎng)的重要環(huán)節(jié)：1）誘導(dǎo)植物產(chǎn)生旺盛生長的愈傷組織和懸浮培養(yǎng)：植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)是指在離體條件下，將于上組織或其他易分散的組織置于液體培養(yǎng)中進行振蕩培養(yǎng)，得到游離的懸浮細(xì)胞，通過繼代培養(yǎng)使細(xì)胞增殖，從而獲得大量細(xì)胞群體的一種技術(shù)。2）篩選高產(chǎn)細(xì)胞系；3）在生物反映器中大量培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞團3.成功的細(xì)胞懸浮系應(yīng)當(dāng)滿足的條件：懸浮培養(yǎng)物分散性好，細(xì)胞較??；均一性好；生長迅速4.簡述細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過程中的生長動態(tài)：延遲期：由于細(xì)胞剛接種到一個新的環(huán)境，有一段適應(yīng)期，細(xì)胞很少分裂或剛開始分裂；對數(shù)生長期：細(xì)胞生長旺盛，細(xì)胞數(shù)目迅速增長；減緩期：由于培養(yǎng)和細(xì)胞衰老等因素的限制，細(xì)胞數(shù)目的增長速度減緩；靜止期：細(xì)胞分裂停止，數(shù)目恒定，此時營養(yǎng)物質(zhì)耗盡，必須及時進行繼代培養(yǎng)，細(xì)胞死亡速度加快，細(xì)胞開始死亡，即衰亡期。5.高產(chǎn)細(xì)胞系篩選：1）根據(jù)細(xì)胞表型進行篩選；2)根據(jù)單克隆此生代謝產(chǎn)物的含量進行篩選保存：高產(chǎn)細(xì)胞系的超低溫保存6.影響植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的因素：光照、攪拌、通氣、培養(yǎng)基成分、接種量、脅迫因子、誘導(dǎo)子、前提物質(zhì)第十一章動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)與植物細(xì)胞相比,動物細(xì)胞培養(yǎng)有何特點?答:1)與植物細(xì)胞相比，動物細(xì)胞之間的連接形式復(fù)雜的多，重要有五種形式：緊密連接,間隙連接,隔壁連接,中間連接,橋粒連接；2)動物細(xì)胞在體外培養(yǎng)時具有貼附,接觸克制,密度依賴等特點.；3)動物細(xì)胞對營養(yǎng)規(guī)定更加苛刻,除一般營養(yǎng)外,還需要血清.；4)對培養(yǎng)環(huán)境適應(yīng)性更差.；5)動物細(xì)胞生長緩慢,因此培養(yǎng)時間較長.與微生物細(xì)胞的不同點：動物細(xì)胞比微生物細(xì)胞大,無細(xì)胞壁.；動物細(xì)胞倍增時間長，生長緩慢，易受污染。；培養(yǎng)過程需氧量少，對機械攪拌或剪切力敏感。；動物細(xì)胞重要以聚集形式存在。；原代細(xì)胞一般繁殖50代左右即退化死亡.體外生長特點：貼附、接觸克制、密度依賴貼壁培養(yǎng)是指細(xì)胞貼附在一定的固相表面進行的培養(yǎng).貼壁培養(yǎng)的材料:規(guī)定有靜電荷和高度的表面活性.重要的材料有:玻璃,塑料,金屬,微載體.貼壁培養(yǎng)的基本操作:通過機械分散法或酶消化法將培養(yǎng)材料分散成細(xì)胞懸液過濾,離心,純化,漂洗后接種到適宜的培養(yǎng)基上.放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng).貼壁生長的過程:游離期,吸附期,繁殖期,退化期.細(xì)胞系：是由原代培養(yǎng)經(jīng)初步純化，獲得的以一種細(xì)胞為主的、能在體外長期生存的不均一的細(xì)胞群體。動物細(xì)胞組織培養(yǎng)的方法重要有幾種方式?定義:動物細(xì)胞與組織培養(yǎng)是指從動物體內(nèi)取出細(xì)胞或組織,模擬體內(nèi)的生理環(huán)境,在無菌,適溫和營養(yǎng)充足等條件下,使離體細(xì)胞或組織生存,生長并維持結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù).可分為原代培和傳代培養(yǎng)兩類.方式:動物細(xì)胞培養(yǎng)的傳統(tǒng)方法:懸滴培養(yǎng)法,旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法,灌注小室培養(yǎng)法,培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法,培養(yǎng)板培養(yǎng)法.原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)期是指從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代培養(yǎng)這個階段,連續(xù)1-4周,此時期細(xì)胞比較活躍,有細(xì)胞分裂,但不旺盛；基本過程：接種與培養(yǎng)、常規(guī)檢查動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù):懸浮培養(yǎng),微載體培養(yǎng),多孔載體培養(yǎng),微囊化培養(yǎng),中空纖維法等.器官培養(yǎng)的意義：器官培養(yǎng)的基本技術(shù)要點是取出動物器官或進一步修整成器官型植塊,將其接種到固體培養(yǎng)基上或培養(yǎng)液上,在適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng),氣相,生長基質(zhì)等條件下使其存活和生長.迄今為止醫(yī)學(xué)界已經(jīng)對乳腺,眼,內(nèi)耳,肝,腦,角膜,腎,肺,骨,皮膚,子宮,胸腺,腸,牙.氣管,副甲狀腺,心臟,食管等人體器官進行培養(yǎng),解決了醫(yī)學(xué)上的重大問題.干細(xì)胞:干細(xì)胞是一類具有自我更新和分化潛能的細(xì)胞.形態(tài)上通常呈圓形或橢圓形,體積小,核質(zhì)比例大.具有較高的端粒酶活性,因此具有較強的增殖能力.干細(xì)胞培養(yǎng)的意義:1)組織培養(yǎng)或器官修復(fù)；2)基因治療用于植物細(xì)胞大量培養(yǎng)的生物反映器：攪拌式反映器、氣聲式生物反映器、固定化細(xì)胞反映器光照反映器、轉(zhuǎn)鼓式生物反映器、空氣和細(xì)胞雙升式反映器。組織工程：是應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和工程學(xué)原理，將人體某些部分的組織細(xì)胞種植和吸附在一種生物材料支架上進行人工培養(yǎng)、繁殖、擴增，然后移植到人體內(nèi)所需要的部位，從而達(dá)成器官修復(fù)或再造的治療目的的一種技術(shù)。第十二章動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合方法：仙臺病毒法,PEG誘導(dǎo)融合,電融合技術(shù).動物細(xì)胞融合技術(shù)的用途：動物細(xì)胞融合最有價值的應(yīng)用就是運用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體.動物細(xì)胞融合技術(shù)環(huán)節(jié):1)動物免疫與免疫脾細(xì)胞懸浮液的制備；2)骨髓瘤細(xì)胞的獲得與培養(yǎng)；3)細(xì)胞融合；4)HAT選擇雜交瘤；5)抗體的檢測與雜交瘤的選擇；6)單克隆抗體的大量生產(chǎn).第十三章胚胎工程胚胎工程：以體外受精和體外初期胚胎發(fā)育為基礎(chǔ),在胚胎發(fā)育過程中進行的卵子切割,性別控制,嵌合體制作,細(xì)胞核移植,轉(zhuǎn)基因操作等定向控制,改造和發(fā)明新遺傳性狀的技術(shù)統(tǒng)稱胚胎工程.對動物實行胚胎工程的意義：發(fā)揮優(yōu)良母畜的繁殖能力；促進家畜改良的速度；作為胚胎操作的基礎(chǔ)；保存遺傳資源胚胎工程采用的技術(shù):體外受精,胚胎移植,胚胎分割與融合,胚胎性別鑒定,胚胎冷凍,基因?qū)氲?核心技術(shù):體外受精,胚胎移植.胚胎移植:又稱受精卵移植,是指母畜發(fā)情排卵并通過配種后,從其生殖道取出受精卵和胚胎,或者體外培養(yǎng)受精卵發(fā)育到囊胚期,然后把它們移植到與供體同時發(fā)情排卵,但未經(jīng)配種的母畜的輸卵管或子宮角,使來自供體的胚胎可以在受體的子宮著床,并繼續(xù)生長和發(fā)育,最后產(chǎn)下供體的后代.即借腹懷胎.胚胎分割:重要是借助顯微操作技術(shù)或徒手操作方法,將一枚初期胚胎切割成2,4等多等分,再移植給受體動物,從而制造同卵雙生或多生后代的技術(shù).胚胎融合:又稱胚胎嵌合,是將兩枚或兩枚以上同種或異種動物胚胎的部分或所有細(xì)胞融合在一起,使之發(fā)育成一個胚胎,然后移植到受體內(nèi),讓其繼續(xù)發(fā)形成一種嵌合體后代的技術(shù).性別控制：通過人為干預(yù)或操作手段，使動物按人們的愿望繁殖所需要的性別后代的技術(shù)。胚胎移植過程：供體受體的選擇→超數(shù)排卵解決→同步發(fā)情→人工受精→胚胎的采集、鑒別→胚胎移植試管動物:將供體動物的精子和卵子在體外受精,體外培養(yǎng)胚胎,然后發(fā)育到一定限度的胚胎移植入受體,所獲得的動物成為試管動物.試管動物的培養(yǎng)過程:雌性供體超排卵解決,雄性供體人工受精------體外人工受精-----采集受精卵------體外培養(yǎng)或冷凍保存------雌性受體選擇-------胚胎移植------受體內(nèi)發(fā)育------試管動物.試管嬰兒:試管嬰兒是指分別將卵子和精子取出后,在體外進行受精,并發(fā)育成胚胎,再植回母體子宮內(nèi)發(fā)育,出生的嬰兒.試管嬰兒