肝膽疾病檢驗(yàn)

職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)肝膽疾病檢驗(yàn)BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE2概述第一節(jié)肝臟是人體最重要的器官之一，肝臟病變會(huì)引起多種功能的障礙，臨床上常通過一些試驗(yàn)來了解肝功能，幫助對(duì)肝膽疾病的診斷，預(yù)后判斷及療效觀察，這些試驗(yàn)統(tǒng)稱為肝功能試驗(yàn)。肝臟是人體最大的實(shí)質(zhì)性器官，成人肝臟占體重的2%，約1.2～1.5kg。它幾乎參與了體內(nèi)各種化學(xué)反應(yīng)，如分泌、排泄、解毒以及各種物質(zhì)代謝過程，故肝臟有“物質(zhì)代謝中樞”之稱。1肝結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)（一）肝具有雙重的血流輸入系統(tǒng)

即門靜脈和肝動(dòng)脈。門靜脈是肝的功能性血管，它匯集了胃腸、脾及胰腺的靜脈血流入肝，給肝帶來腸道吸收的大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和腐敗物。門靜脈血占肝總血量的75%。肝動(dòng)脈是肝的營(yíng)養(yǎng)性血管，給肝帶來大量的氧氣，同時(shí)也帶來肝外組織代謝產(chǎn)生的大量廢物，其血流量占肝總血流量的25%。1肝結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)

（二）肝具有雙重輸出系統(tǒng)

即血液輸出系統(tǒng)和膽道輸出系統(tǒng)。血液輸出系統(tǒng)是指肝靜脈，出肝后經(jīng)下腔靜脈與體循環(huán)相通，使經(jīng)肝處理后的代謝物通過腎臟隨尿排出。膽道輸出系統(tǒng)是指肝細(xì)胞分泌的膽汁通過膽道排入腸道，隨膽汁排出的有膽汁酸鹽和一些代謝產(chǎn)物。1肝結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)

（三）肝細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

肝細(xì)胞中亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)豐富。含有豐富的線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體。使肝臟能量供應(yīng)充分，并大量合成蛋白質(zhì)和脂類。含有大量的溶酶體和高爾基復(fù)合體。促進(jìn)對(duì)吞噬產(chǎn)物的分解和一些蛋白質(zhì)的加工與成熟。還有過氧化物酶體，能分解代謝中產(chǎn)生的過氧化氫，減輕活性氧的損傷。1肝結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)

（四）肝細(xì)胞的再生

肝細(xì)胞是體內(nèi)唯一具有再生能力的實(shí)質(zhì)細(xì)胞，而且再生能力很強(qiáng)。新生肝細(xì)胞的來源有兩種：1.由已分化的肝細(xì)胞增殖而來。

2.由未分化的小葉內(nèi)膽管上皮細(xì)胞分裂而來。由于肝細(xì)胞有很強(qiáng)的再生能力，所以輕度的損傷，難以通過肝功能試驗(yàn)檢測(cè)出來。2肝臟的生物化學(xué)功能（一）排泄功能肝臟能分泌膽汁，很多代謝物可隨膽汁通過膽道排入腸道而排泄。如膽汁酸、膽紅素、氨等物質(zhì)。

1.膽汁酸代謝

（1）膽汁：由肝細(xì)胞分泌的液體，正常人每天分泌量500～1000ml，稱為肝膽汁。進(jìn)入膽囊后水分被重吸收而濃縮，稱為膽囊膽汁。膽汁中含有膽汁酸鹽、膽色素、膽固醇、卵磷脂、粘蛋白、酶、尿素和無機(jī)鹽等物質(zhì)。其中膽汁酸鹽占固體成分50%以上。膽汁既是一種消化液，也是排泄液。2肝臟的生物化學(xué)功能膽固醇

7α-羥膽固醇膽酸鵝脫氧膽酸甘氨膽酸?；悄懰岣拾冰Z脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸腸道復(fù)雜反應(yīng)甘氨酸牛磺酸膽汁膽道初級(jí)游離膽汁酸初級(jí)結(jié)合膽汁酸初級(jí)膽汁酸的生成2肝臟的生物化學(xué)功能

HO

OH

COOH

HO

OHCONHCH2COOH

HOHO

OHCONHCH2CH2SO2H膽酸鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸甘氨膽酸初級(jí)膽汁酸

HOHO

OHCOOH2肝臟的生物化學(xué)功能脫氧膽酸石膽酸次級(jí)膽汁酸大部分通過主動(dòng)重吸收經(jīng)門靜脈入肝腸肝循環(huán)次級(jí)膽汁酸的生成與膽汁酸的腸肝循環(huán)甘氨膽酸腸牛磺膽酸道甘氨鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸膽酸鵝脫氧膽酸腸菌水解腸菌還原一部分通過被動(dòng)重吸收經(jīng)門靜脈入肝隨糞便排出2肝臟的生物化學(xué)功能

HOHO

OHCOOH

HO

HO

COOH脫氧膽酸

HO

OH

COOH

HOCOOH石膽酸膽酸鵝脫氧膽酸次級(jí)膽汁酸7－脫氧7－脫氧2肝臟的生物化學(xué)功能2肝臟的生物化學(xué)功能①促進(jìn)脂類的消化吸收(4)膽汁酸的生理功能②防止膽石形成膽汁酸有親水基團(tuán):羥基、羧基、磺酰基膽汁酸有疏水基團(tuán):烴核、甲基因此可降低脂和水相之間的表面張力

有助于脂類的消化,吸收和維持膽汁中膽固醇的溶解

膽汁中膽汁酸鹽和磷脂酰膽堿,可防止膽固醇結(jié)晶沉淀形成結(jié)石2肝臟的生物化學(xué)功能

2.膽紅素代謝膽色素是鐵卟啉化合物分解代謝的產(chǎn)物，主要包括膽紅素、膽綠素、膽素原和膽素，主要隨膽汁排泄。（1）膽紅素（bilirubin）的生成衰老RBC

單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（肝、脾、骨髓）珠蛋白血紅素加氧酶膽綠素還原酶脂溶性，可進(jìn)入細(xì)胞產(chǎn)生毒害血紅素血紅蛋白

膽紅素COFe膽綠素

2肝臟的生物化學(xué)功能（2）膽紅素在血中的運(yùn)輸膽紅素血液水溶性，不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，也不透過腎小球未結(jié)合膽紅素間接膽紅素

膽紅素-清蛋白復(fù)合物清蛋白

①限制了膽紅素自由通過細(xì)胞膜，免除了對(duì)細(xì)胞的毒害作用。②增加了水溶性，有利于在血液中的運(yùn)輸。2肝臟的生物化學(xué)功能（3）肝臟在膽紅素代謝中的作用未結(jié)合膽紅素

Y-蛋白-膽紅素Z-蛋白-膽紅素Y-蛋白Z-蛋白葡萄糖醛酸-膽紅素UDPGA水溶性，不通過細(xì)胞膜，可通過腎小球肝細(xì)胞結(jié)合膽紅素直接膽紅素隨膽汁排入腸道攝取轉(zhuǎn)化排泄2肝臟的生物化學(xué)功能（4）膽紅素在腸道的變化及腸肝循環(huán)結(jié)合膽紅素膽素原腸道細(xì)菌還原大部分隨糞便排出80%～90%少部分被重吸收10%～20%大部分又隨膽汁排入腸道形成腸肝循環(huán)少部分進(jìn)入體循環(huán)通過腎隨尿排出經(jīng)門靜脈入肝0.6～4mg膽素原膽素O2膽素原膽素O240～280mg2肝臟的生物化學(xué)功能

血紅蛋白

珠蛋白

血紅素

COOFeNADPH

膽綠素

NADPH

膽紅素膽紅素胞液Y蛋白膽紅素-Y蛋白

Z蛋白膽紅素-Z蛋白

UDPGA內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

UDP葡萄糖醛酸膽紅素腎小部分大部分膽素原膽紅素－清蛋白復(fù)合物膽素原膽素

尿少量腸道膽素膽素原葡萄糖醛酸膽紅素糞便膽紅素葡萄糖醛酸單核－吞噬細(xì)胞肝細(xì)胞血液清蛋白2肝臟的生物化學(xué)功能

3.血氨代謝

（1）血氨的來源：①氨基酸的脫氨基作用及含氮化合物的分解，稱為內(nèi)源性氨。②腸道吸收，由未消化的蛋白質(zhì)和未吸收的氨基酸腐敗產(chǎn)生。

（2）血氨的去路：①合成尿素；②合成谷氨酰胺；③合成其他含氮化合物。

（3）尿素的合成與排泄：血氨進(jìn)入肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)合成尿素，經(jīng)腎臟隨尿排去。2肝臟的生物化學(xué)功能

（1）在蛋白質(zhì)代謝中的作用：是機(jī)體合成蛋白質(zhì)的重要器官。除合成肝臟本身所需蛋白質(zhì)外，還合成近100種血漿蛋白。

（2）在氨基酸代謝中的作用：是體內(nèi)氨基酸分解代謝的主要場(chǎng)所。如脫氨基作用，調(diào)節(jié)血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些含氮化合物。

（二）物質(zhì)代謝功能1.營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝2肝臟的生物化學(xué)功能維持血糖濃度恒定合成肝糖原肝糖異生血糖高（3）在糖代謝中的作用：維持血糖濃度的恒定。血糖低肝糖原分解2肝臟的生物化學(xué)功能分泌膽汁酸鹽，促進(jìn)脂類的消化吸收。合成各種脂類，如TG，Ch，PL等。進(jìn)行脂肪酸的β-氧化，產(chǎn)生酮體。參與脂蛋白代謝，合成HDL、VLDL；

（4）在脂類代謝中的作用：對(duì)脂類的消化、吸收、分解、合成及運(yùn)輸?shù)冗^程均起有重要作用肝功能受損脂肪肝2肝臟的生物化學(xué)功能

2.激素及維生素代謝

（1）在激素代謝中的作用：對(duì)多種激素進(jìn)行滅活和排泄，如類固醇激素、胰島素、腎上腺素、甲狀腺激素等。滅活后的產(chǎn)物大部分隨尿排出。肝功能嚴(yán)重?fù)p害激素調(diào)節(jié)功能紊亂

（2）在維生素代謝中的作用膽汁酸鹽有助于脂溶性Vit的吸收。儲(chǔ)存維生素(A,K,D,B12)。參與維生素的轉(zhuǎn)化。某些肝疾病的臨床生化第二節(jié)1黃疸的分類與生化診斷一、黃疸的分類與生化診斷

（一）黃疸的分類當(dāng)血清膽紅素濃度超過34.2μmol/L時(shí)，會(huì)導(dǎo)致皮膚、鞏膜黃染的現(xiàn)象，這稱為黃疸。根據(jù)黃疸的發(fā)病機(jī)制可分為三類：1黃疸的分類與生化診斷

1.溶血性黃疸（肝前性黃疸）由于各種原因使紅細(xì)胞大量破壞，以致未結(jié)合膽紅素明顯增加，超過肝臟的轉(zhuǎn)化能力，但結(jié)合膽紅素正常。新生兒血腦屏障發(fā)育不全，游離膽紅素易進(jìn)入腦組織，與腦部基底核的脂類結(jié)合，將神經(jīng)核染成黃色，稱為核黃疸（膽紅素腦?。?。1黃疸的分類與生化診斷

2.阻塞性黃疸（肝后性黃疸）由于膽道阻塞，膽汁不能排出而淤積在膽管內(nèi)，使上端膽管內(nèi)壓力不斷升高，最后使小膽管和毛細(xì)膽管擴(kuò)張，通透性增加，甚至破裂，使膽汁返流入血，血中結(jié)合膽紅素增加。1黃疸的分類與生化診斷

3.肝細(xì)胞性黃疸（肝源性黃疸）由于肝細(xì)胞病變，肝功能減退，使肝臟對(duì)膽紅素的攝取、轉(zhuǎn)化和排泄作用發(fā)生障礙。一方面肝臟不能將未結(jié)合膽紅素轉(zhuǎn)化成結(jié)合膽紅素，使血中未結(jié)合膽紅素增加；另一方面，病變區(qū)壓迫毛細(xì)膽管，使結(jié)合膽紅素返流入血，血中結(jié)合膽紅素也增加。1黃疸的分類與生化診斷

（二）黃疸的生化診斷

1.血清總膽紅素和結(jié)合膽紅素的測(cè)定用于黃疸類型的鑒別，肝細(xì)胞損害程度和預(yù)后判斷。

2.尿三膽的測(cè)定尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素合稱為尿三膽。由于尿膽素是由尿膽素原遇空氣氧化而來，故臨床上一般只測(cè)定尿膽紅素和尿膽素原。1黃疸的分類與生化診斷3.膽紅素葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的誘導(dǎo)試驗(yàn)（1）糖皮質(zhì)激素的誘導(dǎo)試驗(yàn)：糖皮質(zhì)激素能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，促進(jìn)未結(jié)合膽紅素的轉(zhuǎn)化與排泄，使血清膽紅素迅速下降。（2）苯巴比妥試驗(yàn)：苯巴比妥類藥物能誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)Y蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶的合成，苯巴比妥類藥物可用于核黃疸的治療。2肝硬化的生化是由于多種損傷因素長(zhǎng)期或反復(fù)作用于肝，使肝細(xì)胞彌漫性變性、壞死，以及肝結(jié)締組織彌漫性增生，導(dǎo)致肝廣泛的纖維化和結(jié)節(jié)的形成稱為肝硬化。

（一）肝硬化病因的分類

1.確定的病因：①乙型、丙型病毒性肝炎；②乙醇中毒；③代謝性疾?。貉?、Wilson病、半乳糖血癥等；④肝內(nèi)、外長(zhǎng)期膽汁淤積；⑤門靜脈回流受阻；⑥免疫功能紊亂：狼瘡性肝炎；毒素及治療性藥物：氨甲蝶呤、異煙肼等。2肝硬化的生化

乙醇的飲用量與肝硬化的發(fā)病率有密切關(guān)系，飲酒量越高的國(guó)家其肝硬化死亡率也越高。如飲酒量年人均量在10升以下的瑞典、英國(guó)、丹麥等國(guó)家，肝硬化死亡率在10/10萬以下；而飲酒量年人均在27升左右的法國(guó)，肝硬化死亡率為30/10萬以上。由于長(zhǎng)期飲酒易形成乙醇性脂肪肝、乙醇性肝炎、乙醇性肝硬化。2肝硬化的生化乙醇在胃和小腸上部迅速被吸收（胃30%、小腸上部70%），被吸收的乙醇90%～98%在肝內(nèi)被代謝，其余的隨尿和呼出氣排出。乙醇的代謝途徑有乙醇脫氫酶（alcoholdehydrogenase，ADH）乙醇氧化體系、微粒體乙醇氧化體系（microsomalethanoloxidizingsystem，MEOS）、NADPH氧化酶-過氧化氫酶體系、黃嘌呤氧化酶-過氧化氫酶體系。前二者最重要。

2肝硬化的生化

ADH乙醇氧化體系：CH3CH2OH＋NAD+CH3CHO＋NADH＋H+CH3CHOCH3COOH乙酰輔酶A

三羧酸循環(huán)

微粒體乙醇氧化體系（MEOS）：CH3CH2OH＋NADPH＋H+＋O2CH3CHO＋NADP+＋2H2O

NADPH氧化酶-過氧化氫酶體系：NADPH＋H+＋O2NADP+＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHO2肝硬化的生化黃嘌呤氧化酶-過氧化氫酶體系：次黃嘌呤＋H2O＋O2

黃嘌呤＋H2O2H2O2＋CH3CH2OH2H2O＋CH3CHO

2.可能的原因：①營(yíng)養(yǎng)不良；②感染：新生兒梅毒、血吸蟲病蟲卵所致門管區(qū)纖維組織增生；③隱原性肝硬化；④肉芽腫性肝硬化。2肝硬化的生化

（二）肝硬化的生物化學(xué)檢查肝硬化的早期診斷非常困難。近年來發(fā)展起來的幾項(xiàng)生化檢查為肝硬化的早期診斷提供了重要信息。1.單胺氧化酶（MAO）測(cè)定血清MAO與肝纖維化程度成正比。肝纖維化僅限于門脈區(qū)或中央靜脈周圍時(shí)，血清MAO幾乎全部正常。2肝硬化的生化門靜脈纖維增生侵入肝小葉實(shí)質(zhì)內(nèi)時(shí)，半數(shù)患者血清MAO活性增高。門靜脈區(qū)間或門靜脈區(qū)間與中央靜脈之間結(jié)締組織相連時(shí)，80%患者血清MAO活性增高。當(dāng)有假小葉形成時(shí)，則100%患者血清MAO活性增高。

2肝硬化的生化

2.β-脯氨酸羥化酶（β-PH）測(cè)定

β-PH在膠原合成中起關(guān)鍵作用。當(dāng)肝纖維化時(shí)其含量和活性明顯增高。正常人為29.2±5.9ng/ml，肝硬化患者為654.9±90.2ng/ml。

3.血清透明質(zhì)酸（HA）測(cè)定肝纖維化時(shí)，門-腔靜脈分流增大，進(jìn)入肝內(nèi)清除的HA減少，使血清HA明顯增高。2肝硬化的生化4.血清Ⅲ型前膠原肽（PⅢP）

是由Ⅲ型前膠原經(jīng)內(nèi)切酶作用而產(chǎn)生的多肽。正常人為7.91±0.86μg/L，肝硬化患者明顯增高，診斷肝硬化的敏感性為95%，特異性為93%。2肝硬化的生化3肝性腦病的生化機(jī)制肝性腦病又稱肝昏迷，是由嚴(yán)重的肝病所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，是嚴(yán)重肝病的重危合并癥。目前認(rèn)為氨基酸的代謝障礙可能是肝性腦病發(fā)生的生化基礎(chǔ)。

（一）氨中毒學(xué)說由于肝功能不全，肝臟合成尿素的功能障礙，血氨升高，血氨易通過血腦屏障，進(jìn)入腦組織，氨對(duì)腦組織有嚴(yán)重的毒害作用。如抑制丙氨酸脫氫酶的活性，影響乙酰輔酶A的生成；與三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸結(jié)合生成谷氨酸，耗竭三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸，減少ATP的生成；與谷氨酸結(jié)合生成谷氨酰胺，增加ATP的消耗。影響腦組織的能量代謝。3肝性腦病的生化機(jī)制

（二）假神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說在腸道，芳香族氨基酸，如酪氨酸和苯丙氨酸經(jīng)腸菌的氨基酸脫羧酶作用，生成苯乙胺和酪胺，在正常情況下可被肝內(nèi)單胺氧化酶分解而清除，肝功能不全時(shí)，單胺氧化酶活性低下，苯乙胺和酪胺進(jìn)入腦組織，經(jīng)腦組織的非特異性羥化酶作用，生成苯乙醇胺和β-羥酪胺，它們與兒茶酚胺遞質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，但不能傳遞神經(jīng)沖動(dòng)，故稱為假神經(jīng)遞質(zhì)。3肝性腦病的生化機(jī)制3肝性腦病的生化機(jī)制

假神經(jīng)遞質(zhì)釋放后引起神經(jīng)系統(tǒng)某些部位（如腦干網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上行激動(dòng)系統(tǒng)）功能發(fā)生障礙，使大腦發(fā)生深度抑制而昏迷。

（三）氨基酸不平衡學(xué)說嚴(yán)重肝功能損傷和門腔靜脈短路時(shí)，血漿支/芳比明顯降低（正常健康人為4.0，慢性肝功能不全為0.9，急性肝功能不全0.8）。3肝性腦病的生化機(jī)制由于芳香族氨基酸主要在肝內(nèi)分解，肝功能不全，芳香族氨基酸在肝內(nèi)代謝發(fā)生障礙，在血中濃度增高；支鏈氨基酸主要在肌肉組織中代謝，肝功能不全時(shí)對(duì)胰島素的滅活障礙，高水平的胰島素促進(jìn)支鏈氨基酸大量進(jìn)入肌肉組織被分解，血中濃度降低。芳香族氨基酸進(jìn)入腦組織，引起假神經(jīng)遞質(zhì)生成增多，5-羥色胺（抑制性神經(jīng)遞質(zhì)）增多，使中樞進(jìn)入抑制狀態(tài)。肝功能試驗(yàn)第三節(jié)1肝功能試驗(yàn)血清酶測(cè)定（一）氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定1．賴氏法測(cè)定ALT（１）原理：

（２）方法評(píng)價(jià)：①賴氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；②NaOH的濃度對(duì)顯色有影響；③該法的重復(fù)性差。1肝功能試驗(yàn)【參考范圍】

5～25卡門氏單位【臨床意義】(2)慢性活動(dòng)性肝炎或脂肪肝：(1)肝細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo):ALT輕度增高(100～200IU),或?qū)僬７秶?1肝功能試驗(yàn)2.連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定ALT（１）原理：

采用酶偶聯(lián)反應(yīng),即L-丙氨酸和α-酮戊二酸在ALT作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸再在LD作用下生成L-乳酸，同時(shí)NADH被氧化為NAD+,可在340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)到NADH的消耗量,從而計(jì)算出ALT活性濃度。

雙試劑法

:首先使血清與缺少α-酮戊二酸的底物溶液混合，37℃保溫5分鐘，將標(biāo)本中所含的α-酮酸(如丙酮酸)消耗完，然后，加入α-酮戊二酸啟動(dòng)ALT催化的反應(yīng)，在波長(zhǎng)340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度下降速率。根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度下降速率(-△A/min)，來計(jì)算ALT的活性。1肝功能試驗(yàn)（２）方法評(píng)價(jià)：①存在著兩個(gè)副反應(yīng)，會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏高；A、血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。B、血清中谷氨酸脫氫酶(GLDH)增高時(shí)，在有氨存在條件下，亦能消耗NADH。

②雙試劑法，因溫育期長(zhǎng)，能有效地消除干擾反應(yīng)，測(cè)定準(zhǔn)確性高，是ALT測(cè)定的首選方法；③血清不宜反復(fù)冰凍保存，以免影響酶活性；避免使用溶血標(biāo)本。1肝功能試驗(yàn)3.賴氏法測(cè)定AST（１）原理：

血清中的AST可催化門冬氨酸(aspartate)與α-酮戊二酸間的氨基移換，生成草酸乙酸(oxaloacetate)和L-谷氨酸。草酸乙酸自行脫羧轉(zhuǎn)變成為丙酮酸。反應(yīng)60分鐘后，加入2，4-二硝基苯肼終止反應(yīng)，并與酮酸生反應(yīng)生成兩種2，4-二硝基苯腙。在堿性條件下,兩種苯腙的吸收光譜曲線有差別，在505nm處差異最大，由草酸乙酸轉(zhuǎn)變成的丙酮酸所生成的苯腙呈色強(qiáng)度顯著大于α-酮戊二酸苯腙。據(jù)此可用比色法測(cè)定AST活性。

（２）方法評(píng)價(jià)：①賴氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；②該法的重復(fù)性差：負(fù)干擾現(xiàn)象

1肝功能試驗(yàn)【參考范圍】

8～28卡門氏單位【臨床意義】肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎：血清AST也可輕度增高。心肌梗死：血清中AST活性增高各種肝病病人：血清AST的升高1肝功能試驗(yàn)4．連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定AST（１）原理：

采用酶偶聯(lián)反應(yīng),即L-門冬氨酸和α-酮戊二酸在AST作用下，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶作用下生成L-蘋果酸，同時(shí)伴有NADH轉(zhuǎn)化為NAD+，在340nm監(jiān)測(cè)NADH的轉(zhuǎn)化速率，從而計(jì)算出AST的活性。

雙試劑法

:同ＡＬＴ測(cè)定。1肝功能試驗(yàn)（２）方法評(píng)價(jià)

誤差可來自內(nèi)源性和(或)外源性內(nèi)源性干擾主要來自血清中高濃度丙酮酸和L-谷氨酸脫氫酶(GLDH)。外源性干擾來自試劑中污染的GLDH和AST。

【參考范圍】

5～40IU/L(連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定)

【臨床意義】

見賴氏法1肝功能試驗(yàn)(二)ALP測(cè)定化學(xué)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法：鮑氏法金氏法皮氏法1肝功能試驗(yàn)１、金氏法測(cè)定ALP（１）原理：

ALP在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解釋放出酚和磷酸。酚在堿性溶液中與4－氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化形成紅色醌類化合物，根據(jù)紅色深淺確定ALP的活力。(2)方法評(píng)價(jià)：

磷酸苯二鈉比色法與更早的β-甘油磷酸鈉法相比具有較大的優(yōu)點(diǎn)，如水解速度快，保溫時(shí)間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、不需去蛋白、操作簡(jiǎn)單、快速。但與磷酸對(duì)硝基酚連續(xù)監(jiān)測(cè)法相比，準(zhǔn)確度、精密度較低；操作比較繁瑣,，靈敏度低。1肝功能試驗(yàn)【參考范圍】成人：3～13單位，兒童：5～28單位

ALP金氏單位定義是100ml血清，37℃與底物保溫15分鐘，產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)金氏單位。ALP主要用于診斷肝膽和骨骼疾病【臨床意義】1肝功能試驗(yàn)2.連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定ALP（1）原理：以磷酸對(duì)硝基酚(p-nitrophenylphosphate,4-NPP)為底物，2-氨基-2-甲基-1,3-丙醇（2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP）或二乙醇胺為磷酸基的受體。在堿性環(huán)境下，ALP催化4-NPP水解產(chǎn)生游離的對(duì)硝基酚，對(duì)硝基酚(p-nitrophenol，4-NP)在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成黃色。根據(jù)405nm處吸光度增高速率來計(jì)算ALP活性單位。（2）方法評(píng)價(jià)：線性范圍可達(dá)500U/L，批內(nèi)CV為2.06%～2.36%，批間CV為2.74%。1肝功能試驗(yàn)【參考范圍】男性：1～12歲<500U/L,女性：1～12歲<500U/L

12～15歲<750U/L，>15歲40～150U/L，

>25歲40～150U/L?！九R床意義】

見金氏法1肝功能試驗(yàn)(三)GGT測(cè)定法化學(xué)法（重氮反應(yīng)比色法）和連續(xù)監(jiān)測(cè)法。1.重氮反應(yīng)比色法測(cè)定GGT原理：

【參考范圍】男性3～17U/L；女性2～13U/L2.連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定GGT(1)原理：

(2)方法評(píng)價(jià)：

(2)方法評(píng)價(jià)：重氮比色法活性單位：100ml血清在37℃下反應(yīng)1hr,生成0.5μmol的α-苯胺為1個(gè)GGT活性單位。男性：11～50U/L；(以γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物)女性：7～32U/L

男性：≤40U/L；女性：≤30U/L(以γ-谷氨酰-4-硝基苯胺為底物)【參考范圍】1肝功能試驗(yàn)(四)MAO測(cè)定原理:

MAO主要作用于CH2-NH2基團(tuán)，在氧參與下，氧化脫氨生成相應(yīng)的卞醛、氨及過氧化氫。以芐氨偶氮-β-萘酚為底物,在O2和H20參與下，MAO催化生成芐醛偶氮-β-萘酚、氨及過氧化氫，用環(huán)己烷抽提后進(jìn)行比色測(cè)定。(2)方法評(píng)價(jià)：【單位定義】：

1ml血清與底物在37℃孵育60分鐘，催化單胺氧化產(chǎn)生1nmol芐醛偶氮-β-萘酚為1個(gè)MAO單位?！緟⒖挤秶?2～40U/ml(12×103～40×103U/L)?！九R床意義】：肝硬化時(shí)，肝纖維化現(xiàn)象十分活躍，MAO活性明顯升高。

1肝功能試驗(yàn)血清膽紅素測(cè)定重氮鹽法膽紅素氧化酶(bilirubinoxidase,BOD)法高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)、導(dǎo)數(shù)分光光度法直接分光光度計(jì)法測(cè)定方法1肝功能試驗(yàn)1．重氮鹽改良J-G(JendrassikandGrofmethod,J-G)法(1)原理:

血清中結(jié)合膽紅素與重氮鹽反應(yīng)生成偶氮膽紅素；同樣條件下，游離膽紅素需要在加速劑作用下，使游離膽紅素分子內(nèi)的次級(jí)鍵斷裂，極性上升并與重氮試劑反應(yīng)。反應(yīng)完成后加入終止試劑，繼而加入堿性酒石酸鉀鈉使紫色偶氮試劑轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，波長(zhǎng)600nm下比色分析，求出血樣中總膽紅素的含量。

(2)方法評(píng)價(jià)：

推薦的常規(guī)方法，其方法的線性范圍較寬，在342μmol/L(200mg/L)濃度下有較好的準(zhǔn)確性和精確性，高濃度時(shí)準(zhǔn)確性和精確性降低。因此，建議濃度過高時(shí)減少血樣用量測(cè)定。

1肝功能試驗(yàn)【臨床意義】【參考范圍】

黃疸的鑒別診斷總膽紅素:5.1～19.0μmol/L(0.3～1.1mg/dL)直接膽紅素:1.71～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dL)1肝功能試驗(yàn)2．膽紅素BOD測(cè)定法(1)原理:BOD在不同pH條件下催化不同組份的膽紅素氧化生成膽綠素，膽綠素與氧進(jìn)行非酶促反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榈仙衔铮懠t素的最大吸收峰在450nm

附近。隨著膽紅素被氧化,450nm下降，下降程度與膽紅素濃度成正比。；在pH8.0條件下,未結(jié)合膽紅素及結(jié)合膽紅素均被氧化，用于測(cè)定總膽紅素,在pH=4.5的酸性條件下，BOD僅能催化結(jié)合膽紅素和大部分δ膽紅素，而游離膽紅素不被氧化，測(cè)定其含量代表結(jié)合膽紅素。(2)方法評(píng)價(jià)：BOD法測(cè)定總膽紅素的準(zhǔn)確性、精密度比改良J-G法好

1肝功能試驗(yàn)【參考范圍】血清總膽紅素：10.26±4.10μmol/L血清結(jié)合膽紅素：2.57±2.56μmol/L膽紅素μmol/L=膽紅素mg/LX17.1【臨床意義】見重氮比色法1肝功能試驗(yàn)四、血清膽汁酸測(cè)定高效液相色譜法放射免疫分析法酶免疫分析法比色分析測(cè)定法測(cè)定方法1肝功能試驗(yàn)(1)酶比色法測(cè)定原理3α-HSD膽汁酸+NAD+3-氧-5β類固醇+NADH（1）

NADH+NBT甲jie（藍(lán)色化合物λ=540nm）（2）

3-氧-5β類固醇+NAD+3-氧-5β類固醇+NADH（3）黃遞酶△4-DH酶比色法1肝功能試驗(yàn)由于膽汁酸在血中含量低，方法檢測(cè)的靈敏度達(dá)不到要求，通過增加3-氧-5β-類固醇脫氫酶(△4-DH)，膽汁酸經(jīng)3α-HSD催化的產(chǎn)物3-氧代膽酸在△4-DH作用下再次脫氫，加大了NADH的生成量，提高了反應(yīng)的檢測(cè)能力（見反應(yīng)式1、2、3）。但以上兩種方法都存在一個(gè)缺點(diǎn)：生成的藍(lán)色產(chǎn)物是一種染料，易于附著管壁，難于清洗或堵塞管道。酶循環(huán)法測(cè)定原理為：NAD+

Thio-NADThio-NADH膽汁酸3-氧代膽汁酸NADH3α-HSD1肝功能試驗(yàn)(2)酶比色測(cè)定法評(píng)價(jià)：快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠和適用的優(yōu)點(diǎn)。它即可以手工操作、也可以在自動(dòng)化儀器上進(jìn)行。但試劑價(jià)貴、不易保持。對(duì)酶量的要求嚴(yán)格，以保證酶促反應(yīng)在零級(jí)反應(yīng)下進(jìn)行，酶量不足易產(chǎn)生誤差。此外，標(biāo)準(zhǔn)品的制備非常重要。常采用甘氨膽酸溶入小牛血清中制成凍干品。

1肝功能試驗(yàn)【參考范圍】1～7μmol/L

(成人空腹血清總膽汁酸)【臨床意義】

任何引起肝細(xì)胞損傷的病理過程都可能引起血中膽汁酸升高可見于各種類型的肝病、肝硬化、脂肪肝，也見于急慢性膽道阻塞。其中空腹膽汁酸測(cè)定是一種敏感、特異性強(qiáng)并相對(duì)簡(jiǎn)單的肝功能試驗(yàn)，是目前公認(rèn)最敏感的肝功能試驗(yàn)之一。特別適用于可疑有肝病但其它生化試驗(yàn)正?；蜉p度異常的病人診斷。1肝功能試驗(yàn)血氨測(cè)定為一步法，也叫直接測(cè)定即不需從全血中分離出氨即可直接測(cè)定兩步法，即先從全血中分離出氨,而后再進(jìn)行測(cè)定；微量擴(kuò)散法、離子交換法酶法和氨電極法1肝功能試驗(yàn)原理：

血漿中的氨在足量α-酮戊二酸和NADPH存在時(shí)，經(jīng)谷氨酸脫氫酶作用生成谷氨酸,并消耗NADPH，NADPH的下降速率與血漿氨濃度成正比。

NH3＋α-酮戊二酸＋NADPH谷氨酸＋NADP+＋H2O谷氨酸脫氫酶速率法：谷氨酸脫氫酶(2)方法評(píng)價(jià)：本法特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短，是較為理想的氨分析方法。在200μmol/L范圍內(nèi)、線性良好。精密度：批內(nèi)CV=3.9%；批間CV=4.5%?；厥章蕿?7.9%～102.7%。1肝功能試驗(yàn)【參考范圍】血氨測(cè)定在診斷治療肝性腦病中占有重要作用?！九R床意義】18～72μmol/L

(酶法)1血清膽紅素測(cè)定未結(jié)合膽紅素間接膽紅素血清膽紅素

結(jié)合膽紅素直接膽紅素加速劑常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、尿素。最近在血清中還發(fā)現(xiàn)了第三種膽紅素，稱為δ-膽紅素，性質(zhì)與結(jié)合膽紅素相似，含量很低。1肝功能試驗(yàn)（一）重氮法

對(duì)氨基苯磺酸＋亞硝酸鈉氯化重氮苯磺酸＋NaCl＋2H2O

膽紅素＋氯化重氮苯磺酸紫紅色的偶氮化合物λ=560nm

加速劑為甲醇。靈敏度較低，溶血標(biāo)本干擾大。重氮試劑在室溫中不穩(wěn)定，易分解，故一般在臨用前新鮮配制。HClpH1-21肝功能試驗(yàn)

（二）改良J-G法1938年由Jendrossik和Grof建立，幾經(jīng)改進(jìn)成為今天廣泛應(yīng)用的J-G法。加速劑為苯甲酸鈉-咖啡因。紫紅色的偶氮膽紅素在強(qiáng)堿性酒石酸鈉和咖啡因存在下，生成藍(lán)色的偶氮膽紅素。pH13，λ=660nm靈敏度高，ε7.4×104；線性范圍寬，0～2736μmol/L；顯色穩(wěn)定；精確度較好；干擾少。是我國(guó)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)會(huì)推薦的方法。1肝功能試驗(yàn)（三）膽紅素氧化酶法總膽紅素＋1/2O2

膽綠素＋H2O膽綠素＋O2

淡紫色化合物

膽紅素在460nm波長(zhǎng)處，吸光度的下降與濃度成正比。在pH8.2時(shí)，膽紅素氧化酶可催化結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素氧化；在pH4.5時(shí)，膽紅素氧化酶僅催化結(jié)合膽紅素氧化。因此，調(diào)節(jié)溶液pH可分別測(cè)定總膽紅素和結(jié)合膽紅素。靈敏度高，干擾少，精確度好，線性范圍寬。1肝功能試驗(yàn)

【參考范圍】血清總膽紅素5.1～17.1μmol/L血清結(jié)合膽紅素0～6μmol/L結(jié)合膽紅素/總膽紅素20%～35%

1肝功能試驗(yàn)【臨床意義】

診斷黃疸和鑒別黃疸類型，血清總膽紅素17.1～34.2μmol/L為隱性黃疸，＞34.2μmol/L為臨床黃疸，根據(jù)結(jié)合膽紅素占總膽紅素的百分比可鑒別黃疸類型。

溶血性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的20%以下。肝細(xì)胞性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的35%以上。阻塞性黃疸結(jié)合膽紅素占總膽紅素的50%以上。

2血氨測(cè)定血氨主要來自腸道的吸收及組織中氨基酸的脫氨基作用。主要的去路是在肝臟經(jīng)鳥氨酸循環(huán)合成尿素。血液中的游離氨以兩種形式存在，NH4+和NH3，在生理pH條件下，NH4+占98%以上。血氨測(cè)定的方法主要有三類：化學(xué)法（堿性酚次氯酸鹽直接顯色法）；酶法（谷氨酸脫氫酶速率法）；離子選擇電極法。2血氨測(cè)定

（一）堿性酚次氯酸鹽直接顯色法血清經(jīng)鎢酸沉淀蛋白質(zhì)后，濾液中的與堿性酚次氯酸鹽試劑反應(yīng)生成藍(lán)色化合物（靛藍(lán)），λ=625nm，此反應(yīng)又稱Berthlot反應(yīng)。顯色穩(wěn)定，但血液離體后，血液中的含氮化合物可分解產(chǎn)生氨，時(shí)血氨緩慢升高，此時(shí)應(yīng)迅速將血液標(biāo)本制成無蛋白濾液。2血氨測(cè)定

（二）谷氨酸脫氫酶速率法

血漿中的在NH4+足量的α-酮戊二酸和NADPH存在下，經(jīng)GLDH催化生成谷氨酸NADP+，對(duì)340nm紫外光吸光度下降。NH4+＋α-酮戊二酸＋NADPH谷氨酸＋NADP+＋H2O

【參考范圍】13～57μmol/L（酶法）2血氨測(cè)定

【方法評(píng)價(jià)】特異性強(qiáng)、分析時(shí)間短，在200μmol/L范圍內(nèi)線性良好，精密度好，批內(nèi)CV＝3.9%；批間CV＝4.5%?；厥章蕿?7.9%～102.7%。是較為理想的氨分析方法。

【臨床意義】肝性腦病，重癥肝炎，尿毒癥血氨增高。3血清膽汁酸測(cè)定

膽酸肝臟游離型鵝脫氧膽酸初級(jí)膽汁酸

結(jié)合型膽汁酸

腸道脫氧膽酸次級(jí)膽汁酸石膽酸甘氨膽酸甘氨鵝脫氧膽酸?；悄懰崤；蛆Z脫氧膽酸3血清膽汁酸測(cè)定

肝臟在膽汁酸的生成、分泌、排泄和攝取等代謝過程中有極其重要的作用。血液流經(jīng)肝臟一次約90%的膽汁酸被