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文檔簡介

病理檢驗(yàn)技術(shù)

特殊染色病原微生物

螺旋體螺旋體(spirochaeta)是一類細(xì)長、柔軟、彎曲呈螺旋狀,運(yùn)動活潑的原核細(xì)胞型微生物，具有細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)，細(xì)胞壁有脂多糖和壁酸。螺旋體在自然界和動物體內(nèi)廣泛存在，而對人類能致病的有以下幾種。

1.密螺旋體(treponema)菌體長約6~14um,寬為0.25~0.5um,有8~12個(gè)細(xì)密而均勻的螺旋,兩端尖直。對人致病的有梅毒螺旋體。2.疏螺旋體(borrelia)有5~10個(gè)稀疏而排列不規(guī)則的螺旋。對人致病的有回歸熱螺旋體。3.鉤端螺旋體(leptospira)菌體細(xì)長,螺旋數(shù)目較多而細(xì)密,一端或兩端彎曲成鉤狀。菌體常屈曲呈C形、S形。常在染色后,由于菌體粗大,細(xì)密的螺旋看不清楚。如引起高熱、出血和黃疸等多種癥狀的鉤端螺旋體。

梅毒螺旋體多用組織塊鍍銀的Levaditi法顯示,切片亦可用Warthin-Starry法、改良的Dieterle法、Steiner和Steiner法,這些都屬鍍銀法。顯示鉤端螺旋體則多用Warthin-Starry鍍銀法?；貧w熱螺旋體則可取血液涂片作Giemsa染色。硝酸銀法(I)

根據(jù)(Levaditi)(一)試劑配制1.2%的硝酸銀(silvernitrate)2.還原液

焦性沒食子酸(pyrogallicacid)4g

濃甲醛(formaldehyde)5ml

蒸餾水100ml(二)染色步驟1.取組織厚約1-2mm為宜,10%的甲醛固定2-4天。2.流水沖洗一晚。3.95%的乙醇浸泡24小時(shí)。4,蒸水沒洗,并不時(shí)輕輕搖動,至組織下沉為止。5.再換餾水浸洗約10分鐘。6.移入2%的硝酸銀液(加蓋),置于37℃的溫箱內(nèi)3天,其間于第2天更換新的2%的硝酸銀液1次。

7.蒸餾水浸洗3次,每次10分鐘。

8.還原液(加蓋)于室溫置暗處2天。

9.蒸餾水浸洗3次,每次約2分鐘。

10.常規(guī)脫水透明,浸蠟包埋。

11.切片厚6~8um,貼片,烤干。

12.二甲苯脫蠟2次。

13.中性樹膠封固。(三)結(jié)果

梅毒螺旋體呈黑色或棕黑色,背景呈淡黃色至淡棕黃色。(四)染色機(jī)制梅毒螺旋體用通常的染色方法是不易著染的,但它有嗜銀性,在一定條件下,螺旋體可從銀液中吸附銀離子,經(jīng)還原液處理后,螺旋體內(nèi)吸附的銀離子被還原為黑色的金屬銀而顯色。(五)應(yīng)用這方法可顯示梅毒螺旋體,也可顯示鉤端螺旋體(leptospira)。梅毒螺旋體有8~12個(gè)均勻的螺旋,兩端尖直；鉤端螺旋體細(xì)長,螺旋數(shù)目較

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