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文檔簡介

實驗一腸桿菌科噬菌體的分離、鑒定及噬菌斑的觀察溫紅玲噬菌體分布廣泛，嚴格寄生，高度的種特異性和型特異性噬菌體侵入細菌細胞后進行復制導致細胞裂解，噬菌體從中釋放，在液體培養(yǎng)基中可使混濁的菌懸液變?yōu)槌吻?，此現(xiàn)象可指示噬菌體存在；利用這一特性，在樣品中加入敏感菌株與液體培養(yǎng)基，進行培養(yǎng)，使噬菌體增殖、釋放，從而可分離到特異的噬菌體。在宿主細菌生長的固體瓊脂平板上，噬菌體可裂解細菌而形成噬菌斑。據此可利用噬菌體對細菌進行分型，用于新發(fā)現(xiàn)細菌的分類鑒定、細菌性疾病傳染源的追蹤、傳播途徑的確定、菌型與疾病之間的關系研究等。實驗原理掌握噬菌體的分離和鑒定方法腸桿菌科噬菌體噬菌斑的觀察目的意義1.大腸桿菌懸液：1ml/支（第一天用完不要丟棄，放冰箱冷藏，第三天繼續(xù)用）2.增殖培養(yǎng)：于10ml三倍濃縮的營養(yǎng)肉湯的三角燒瓶中，加入污水樣品20ml與大腸桿菌懸液0.2ml，37℃培養(yǎng)12h～24h以增殖噬菌體。3.制備裂解液：將以上增殖的混合培養(yǎng)液5000r/min離心15min。將上清液倒入無菌平皿，針管抽取液體，在針栓式濾器上過濾除菌。所得濾液倒入滅菌瓶內，取少量濾液作無菌試驗，即將它接入肉湯培養(yǎng)液中，置于37℃培養(yǎng)過夜，以作無菌檢查。剩余的噬菌體裂解液，放置4℃保存?zhèn)溆?。步驟方法（4）噬菌體確證試驗：于已烘干的營養(yǎng)瓊脂平板表面加一滴大腸桿菌懸液，再用滅菌涂布棒將菌液涂布成均勻的一薄層。放置數(shù)分鐘，待瓊脂表面干燥，在菌層的表面布點5個～7個，每點滴加上述濾液1小滴，同時選擇其中一點不加濾液只滴加一小滴生理鹽水為對照，再放置數(shù)分鐘，使液滴被瓊脂吸干。倒置平板，37℃培養(yǎng)過夜。次日觀察結果。（5）觀察結果若平板上滴加濾液的部位出現(xiàn)噬菌斑，而在對照滴中處無噬菌斑，則表明該濾液中含有大腸桿菌相應噬菌體。若噬菌斑融合形成裂解區(qū)，說明有大量該噬菌體存在。（6）噬菌斑的種類從肉眼勉強可見的小形斑到直徑1厘米以上的大形斑不等。混濁噬菌斑：溫和噬菌體的噬菌斑中央殘存著已溶原化的細胞。毒性噬菌體：形成透明噬菌斑。透明與混濁部分相混雜的斑駁噬菌斑。（7）噬菌體的保存：本實驗制備的噬菌體裂解液可直接4℃保存至少1周，不宜超過3～4周。冷凍干

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