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有絲分裂ppt王蘇玲E-mail:slwang@O-Tel:

84395344(理科樓A320)曹愛忠E-mail:caoaz@O-Tel:

84395344(理科樓A318)實驗一植物有絲分裂實驗目的

1)學習植物材料的固定方法和常規(guī)壓片方法 2)觀察有絲分裂過程中染色體的變化 3)掌握染色體形態(tài)觀察和計數(shù)方法

植物細胞有絲分裂是植物細胞增殖的主要方式,只要能進行細胞分裂的植物組織或單個細胞都可以作為觀察染色體的材料。如植物的頂端分生組織(根尖和莖尖)、居間分生組織(禾本科植物的幼莖及葉殼)、愈傷組織和胚乳、萌發(fā)的花粉管等。

適時取材、固定、離析、染色,制成標本,利用顯微鏡對有絲分裂過程中染色體進行觀察,對物種親緣關系鑒定、雜種分析等工作中具有廣泛的用途。2.實驗說明染色體是核中重要和穩(wěn)定的成分,具有特定形態(tài)結(jié)構(gòu)和自我復制能力,并且積極參與代謝活動,出現(xiàn)連續(xù)而有規(guī)律性的變化。染色體控制生物的遺傳性狀,它在形態(tài)、數(shù)目、結(jié)構(gòu)上的變化,也會導致遺傳性狀的相應變化。染色體染色體核型L:長臂S:短臂C:著絲粒SAT:隨體SC:次級縊痕細胞周期(cellcycle)

G1期

S期間期(interphase)

細胞周期G2期前期(prophase)

M期

中期(metaphase)

后期(anaphase)

末期(telophase)

一般S期時間較長,且較穩(wěn)定;G1和G2的時間較短,變化也較大。因物種、細胞種類和生理狀態(tài)的不同而異。哺乳動物離體培養(yǎng)細胞的有絲分裂周期,G1為10小時,S為9小時,G2為4小時,間期共長23小時。而細胞分裂期M全長只有1小時。低溫方法:小麥1-5度;DNA復制(核小體復制)DNA轉(zhuǎn)錄蛋白質(zhì)合成3)掌握染色體形態(tài)觀察和計數(shù)方法化學方法:秋水仙素、8-羥基喹啉、-溴萘等。后期是染色體活躍、迅速運動的時期,也是整個有絲分裂過程最短的時期。而細胞分裂期M全長只有1小時。在整個過程染色體會產(chǎn)生有規(guī)律的變化,包括兩個緊密過程:核分裂為二,細胞質(zhì)分裂,二個子細胞各含一個核。將根尖放在載玻片2/3處,切取尖端不透明部分,滴上一滴45%冰醋酸,用解剖針在蓋玻片上輕輕敲打,使材料成一片很均勻的薄層。S期間期(interphase)ME-mail:slwang@njau.這期間要完成DNA的復制、有關DNA的轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)的合成,并為細胞分裂積蓄能量。低溫方法:小麥1-5度;染色體高度螺旋化,

適于進行細胞學研究染色體到達兩極,子核形成,產(chǎn)生2個子細胞1)學習植物材料的固定方法和常規(guī)壓片方法有絲分裂各個時期持續(xù)的時間(小時):植物G1期S期G2期M期分裂周期溫度°C普通小麥0.810.02.01.214.023大麥1.010.425蠶豆5.07.55.02.019.520蠶豆(另一實驗)4.09.03.51.918.023蠶豆根尖細胞的細胞周期

M

2.0h

G25.0h5.0h

G1

7.5h

S

2.1染色體的復制和有絲分裂的準備 間期(表面上的平靜)G1SG2DNA復制(核小體復制)DNA轉(zhuǎn)錄蛋白質(zhì)合成在間期,染色體呈染色質(zhì)狀態(tài),在光學顯微鏡下觀察時,它們看上去似乎是靜止的,但間期染色體正處于高度活躍的狀態(tài),為有絲分裂緊張的準備條件。這期間要完成DNA的復制、有關DNA的轉(zhuǎn)錄及蛋白質(zhì)的合成,并為細胞分裂積蓄能量。2.2有絲分裂(mitosis)的各個主要時期在整個過程染色體會產(chǎn)生有規(guī)律的變化,包括兩個緊密過程:核分裂為二,細胞質(zhì)分裂,二個子細胞各含一個核。根據(jù)核分裂的變化特征可以將有絲分裂分為四個時期:前期中期后期末期。2.2.1前期

a.

染色質(zhì)濃縮為染色體 b.核膜解體

c.核仁消失

d.

形成紡錘體在前期,染色體以染色質(zhì)的形式存在,呈細絲狀,經(jīng)連續(xù)的盤旋和折疊而成為染色體。每一前期染色體都由2條遺傳組成相同的姊妹染色單體組成,這是S期DNA復制并凝集的結(jié)果。2.2.2中期

染色體排列于赤道板上;

染色體高度螺旋化,

適于進行細胞學研究

2.2.3后期

后期是染色體活躍、迅速運動的時期,也是整個有絲分裂過程最短的時期。在這一時期中,姊妹染色單體分開并移向兩極。當子染色體到達兩極時,此期結(jié)束。染色體運動速度:0.2~5m/min2.2.4末期及細胞質(zhì)分裂

染色體到達兩極,子核形成,產(chǎn)生2個子細胞3.實驗用具及材料:實驗用具:顯微鏡、載玻片、蓋玻片、指形管、酒精燈、鑷子、解剖針、刀片、吸水紙、小標簽、鉛筆;實驗材料:黑麥根尖。4.實驗方法及步驟:

1)材料的準備和取材種子浸泡于水中,種子吸脹后將種子撈出,放在墊有濾紙的培養(yǎng)皿中,置于25度條件下(溫箱)發(fā)芽。待根長約1-1.5cm時此時大量細胞進行分裂時剪根(一般以上午10:30-11:30為宜)。2)預處理:

a:目的:獲得較多的有絲分裂中期分裂相;使染色體收縮變短.

b:預處理方法:化學方法:秋水仙素、8-羥基喹啉、-溴萘等。低溫方法:小麥1-5度;水稻、玉米6-8度約

20-40小時。剪取根尖放入盛有蒸餾水的指形管中,再置于冰水共存的冰瓶中,將冰瓶置0-3度冰箱處理24小時。染色體數(shù)目較多的材料可適當延長處理時間。3)固定:要求采用一定濃度的滲透力強的固定液將植物的組織、細胞迅速殺死,使蛋白質(zhì)沉淀并盡量保持其原有狀態(tài)。常用的固定液:

CarnoyI:冰醋酸:純酒精=1:3 時間:24hr

4)解離、染色:

酸解法、酶解法 染液:①洋紅:醋酸洋紅②Schiff試劑目的是使細胞易于分散,便于壓片。5)壓片操作:

將根尖放在載玻片2/3處,切取尖端不透明部分,滴上一滴45%冰醋酸,用解剖針在蓋玻片上輕輕敲打,使材料成一片很均勻的薄層。在酒精燈上微熱,使根尖軟化,然后將載玻片放在硬而平整的桌面上,用中指或拇指壓片.目的是使根尖軟化著色。加熱時要注

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