第四章藥物分析方法驗(yàn)證演示文稿

第四章藥物分析方法驗(yàn)證演示文稿目前一頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)優(yōu)選第四章藥物分析方法驗(yàn)證目前二頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)第一節(jié)

定量分析樣品的前處理方法概述不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法前處理：特殊分析對象的前處理：藥物制劑、生物樣品

特殊藥物成分的前處理目前三頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)概述前處理的目的：將特定原子或離子從藥物中分離出來，轉(zhuǎn)變?yōu)檫m合分析狀態(tài)適用藥物對象：含金屬元素（Bi、Al、Mg、Zn等）含鹵素元素（F、Cl、I）含氮、硫、磷等前處理方法：依據(jù)待測元素在藥物分子中結(jié)合的牢固程度，各有不同目前四頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)

泛影酸碘番酸

三氯叔丁醇磺溴酞鈉Organichalides（有機(jī)鹵化物）目前五頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)

酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵

卡巴胂Organicmetal-containingdrugs（有機(jī)金屬化物）目前六頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)概述前處理的目的：將特定原子或離子從藥物中分離出來，轉(zhuǎn)變?yōu)檫m合分析狀態(tài)適用藥物對象：含金屬元素（Bi、Al、Mg、Zn等）含鹵素元素（F、Cl、I）含氮、硫、磷等前處理方法：依據(jù)待測元素在藥物分子中結(jié)合的牢固程度，各有不同目前七頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

適用于：所含金屬離子或待測元素易于解離的藥物常用前處理方法：直接測定法經(jīng)水解后測定法經(jīng)還原分解后測定法常用測定方法：配位滴定，氧化還原滴定，沉淀滴定目前八頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)直接測定的分析方法－－應(yīng)用示例葡萄糖酸銻鈉的測定

取本品約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水100ml、鹽酸15ml與碘化鉀試液10ml，密塞、振搖后，在暗處靜置10min，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.088mg的Sb。目前九頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)經(jīng)水解后測定法－－分析示例三氯叔丁醇的測定原理三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過量的硝酸銀滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，過量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨液回滴定。目前十頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)目前十一頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法

適用于：所含金屬離子或待測元素易于解離的藥物常用前處理方法：直接測定法經(jīng)水解后測定法經(jīng)還原分解后測定法常用測定方法：配位滴定，氧化還原滴定，沉淀滴定目前十二頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法適用于原子與碳原子結(jié)合牢固的藥物濕法破壞

(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸鹽法等)干法破壞目前十三頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)濕法破壞－－凱氏定氮法凱氏定氮法（Kjeldahlmethod，）是一種常用的確定有機(jī)化合物中氮含量的檢測方法。這種方法是由凱耶達(dá)爾在1883年發(fā)明的。凱氏定氮法的普遍適用性、精確性和可重復(fù)性已經(jīng)得到了國際的廣泛認(rèn)可。它已經(jīng)被確定為檢測食品中蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)方法。

目前十四頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)樣本的分解：蛋白質(zhì)+H2SO4→(NH4)2SO4(aq)+CO2(g)+SO2(g)+H2O(g)銨鹽的分解：(NH4)2SO4(aq)+2NaOH→Na2SO4(aq)+2H2O(l)+2NH3(g)氨的固定：B(OH)3+H2O+NH3→NH4++B(OH)4–

返滴定：2NH4++2B(OH)4–

+H2SO4→（NH4)2SO4+2B(OH)3+2H2O目前十五頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)凱氏定氮法（kjeldahlnitrogendetermination）儀器裝置

凱氏燒瓶：為30~50ml（半微量法）或500ml（常量法）硅玻璃或硼玻璃制成的硬質(zhì)茄形燒瓶蒸餾裝置（半微量法）：1000ml的圓底燒瓶（A）、安全瓶（B）、連有氮?dú)馇虻恼麴s器（C）、漏斗（D）、直形冷凝管（E）、100ml錐形瓶（F）橡皮管夾（G、H）目前十六頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)目前十七頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)注意通過凱氏定氮法測得的含氮量一般被稱作總凱氮量?？倓P氮量有時并不能真正地反映樣本中的蛋白質(zhì)含量，因?yàn)樗鶞y定的部分含氮量可能不是由蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化來的。如今，凱氏定氮法已經(jīng)可以自動化進(jìn)行，一些催化劑（如氧化汞或硫酸銅）也被使用來提高反應(yīng)速率。目前十八頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)干法破壞

干法破壞法適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)物（如含氮雜環(huán)類有機(jī)物）以及某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。

氧瓶燃燒破壞氧瓶燃燒法系將有機(jī)藥物在氧氣中燃燒，燃燒產(chǎn)物被吸收液吸收后，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測定，該法適用于含鹵素或含硫、磷、硒等有機(jī)藥物分析的前處理。

目前十九頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)氧瓶燃燒法

原理：氧瓶燃燒法系將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲測物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測定。適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析。目前二十頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)目前二十一頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)氧瓶燃燒法②稱樣用材料及稱樣

A.固體樣品無灰濾紙

B.液體樣品紙袋

C.軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無灰濾紙包裹目前二十二頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)③氧氣④吸收液作用：吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價(jià)態(tài)。目前二十三頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)氧瓶燃燒法樣品

吸收液測定方法FH2O茜素氟藍(lán)分光光度法

ClNaOH溶液

銀量法、汞量法

BrSO2-NaOH液或NaOH液-硫酸肼飽和液銀量法、分光法INaOH液硫酸肼飽和液

銀量法、碘量法、汞量法、分光法目前二十四頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)第二節(jié)定量分析方法的特點(diǎn)容量分析法光譜分析法 色譜分析法目前二十五頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)含量測定的表述方式原料藥：原料藥的百分含量

W測定量/W稱取量×100%藥物制劑：表示量的百分含量

W測定的每片主成分含量/W標(biāo)示的每片主成分含量×100%W測定的每片主成分含量：實(shí)際測定時取10-20片計(jì)算平均片重、混合均勻后測定平均每片的主成分含量目前二十六頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)容量分析法容量分析法：用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，滴定一定體積的待測溶液，直到化學(xué)反應(yīng)完全為止，到達(dá)終點(diǎn)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積和濃度計(jì)算待測物質(zhì)含量的方法。特點(diǎn)：簡便，快速，準(zhǔn)確度高，專屬性較差（化學(xué)原料藥分析）目前二十七頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)容量分析法滴定度 每1ml標(biāo)準(zhǔn)滴定液相當(dāng)待測物的mg數(shù)。滴定度計(jì)算目前二十八頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)容量分析法直接滴定法的結(jié)果計(jì)算V為滴定液的消耗體積(ml)；T為滴定度；W為供試品的稱樣量(g)；10－3為質(zhì)量換算因數(shù)(1mg等于10－3g)；F為滴定液的濃度校正因數(shù)。目前二十九頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)精密稱取阿司匹林0.3972g，用氫氧化鈉（0.1021mol/L）滴定,消耗反應(yīng)體積21.35ml。計(jì)算每1ml標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的滴定度，以及阿司匹林的含量。（分子式C9H8O4

分子量180.2）目前三十頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)取司可巴比妥鈉膠囊（標(biāo)示量為0.1g）20粒，除去囊殼后測得內(nèi)容物總重為3.0780g，稱取0.1536g，按藥典規(guī)定用溴量法測定。加入溴液（0.05mol/L）25mL，剩余的溴液用硫代硫酸鈉液（0.1025mol/L）滴定到終點(diǎn)時，用去17.94mL?？瞻自囼?yàn)用去硫代硫酸鈉液25.00mL。按每1mL溴液（0.05mol/L）相當(dāng)13.01mg的司可巴比妥鈉，計(jì)算該膠囊標(biāo)示量百分含量。（注：溴與硫代硫酸鈉反應(yīng)摩爾比為1：2）目前三十一頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)光譜分析法

光譜分析法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析的方法。單色光穿過吸光物質(zhì)溶液時，在一定的濃度范圍內(nèi)，被該物質(zhì)吸收的光量與該物質(zhì)溶液的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比。其關(guān)系式如下：

目前三十二頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)取標(biāo)示量為25mg的鹽酸氯丙嗪片20片，除去糖衣后精密稱定，總重量為2.4120g，研細(xì)，精密稱量片粉0.2368g，置500ml量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml量瓶中，加同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，在254nm波長處測得吸收度為0.435，按百分吸收系數(shù)為915計(jì)算，求其標(biāo)示量百分含量？(10分)目前三十三頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法用于藥物含量測定的方法有三種：1對照品比較法分別配制供試品和對照品溶液，在規(guī)定波長處分別測定吸光度，按下式計(jì)算供試品溶液中被測組分的濃度。CX=（AX/AR）CR

2吸收系數(shù)法按各品種項(xiàng)下方法，配制供試品溶液，在規(guī)定波長處測定其吸光度，再根據(jù)吸收系數(shù)按下式計(jì)算供試品溶液的濃度。

目前三十四頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)紫外-可見分光光度法3比色法

供試品本身在紫外-可見區(qū)沒有強(qiáng)吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后測定用比色法測定時，由于顯色時影響的因素較多，應(yīng)取供試品與對照品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的試劑，并用同樣方法處理，在規(guī)定的波長處測定吸光度后，按對照品比較法公式計(jì)算供試品溶液的濃度。

目前三十五頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)色譜法色譜法（chromatography）是利用混合物不同組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)（或吸附系數(shù)、滲透性等），當(dāng)兩相作相對運(yùn)動時，不同組分在兩相中進(jìn)行多次反復(fù)分配實(shí)現(xiàn)分離后，通過檢測器得以檢測，進(jìn)行定性定量分析。目前三十六頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)指用規(guī)定的對照品對色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到的要求。（一）色譜柱的理論板數(shù)（n）在選定的色譜條件下，測定主成分或內(nèi)標(biāo)物色譜峰的保留時間（tR）和半峰寬（W1/2），按塔板理論公式計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。如果測得的理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長、載體性能、色譜柱填充的優(yōu)劣等），使理論板數(shù)達(dá)到要求。目前三十七頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)（二）分離度（R）定量分析時，為便于準(zhǔn)確測量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。（三）重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次， 除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn) 偏差應(yīng)不大于2.0%。目前三十八頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)（四）拖尾因子為保證測量精度，特別當(dāng)采用峰高法測量時，應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子是否符合各種項(xiàng)下的規(guī)定。拖尾因子（T）以下式計(jì)算：除另有規(guī)定外，T應(yīng)在0.95～1.05之間。目前三十九頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證

一、目的

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求，方法驗(yàn)證過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草和修訂說明中。

目前四十頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)二、用途1、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。2、藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。目前四十一頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)三、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目1.鑒別試驗(yàn)；2.雜質(zhì)定量或限度檢查；3.原料或制劑中有效成分含量測定；4.制劑中其它成分（降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定；5.溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等 的測試方法。目前四十二頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)驗(yàn)證內(nèi)容有：

準(zhǔn)確度、 精密度（重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、

專屬性、 檢測限、 定量限、 線性、 范圍和耐用性四、驗(yàn)證內(nèi)容

目前四十三頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)

（一）準(zhǔn)確度（accuracy）

準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。

原料藥可用已知純度的對照品或樣品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。目前四十四頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)

制劑可用含己知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定。目前四十五頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)

回收試驗(yàn)空白+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M目前四十六頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)

加樣回收試驗(yàn)

已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M目前四十七頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)數(shù)據(jù)要求

規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，如制備三個不同濃度樣品各測三次。目前四十八頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)

（二）精密度（precision）

精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。目前四十九頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD），也稱變異系數(shù)（CV）目前五十頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)1.重復(fù)性

在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價(jià)，或制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測6次進(jìn)行評價(jià)。目前五十一頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)2.中間精密度

同一實(shí)驗(yàn)室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。考察隨機(jī)變動因素的影響。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備目前五十二頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)3.重現(xiàn)性不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如建立藥典分析方法時通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗(yàn)的過程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。

目前五十三頁\總數(shù)六十一頁\編于十一點(diǎn)

（三）檢測限（limitofdetection，LOD