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外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗2021/10/1011.血涂片的制備:手工推片法2.血涂片的染色:瑞氏染色法3.紅細(xì)胞的形態(tài)檢查內(nèi)容2021/10/102將血標(biāo)本均勻地涂抹在清潔干燥的載玻片上,經(jīng)染色后在顯微鏡下檢查,是血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基本方法,臨床應(yīng)用廣泛,特別是對于各種貧血及血液病的診斷和鑒別診斷具有重要價值。血涂片(bloodsmear)的制備2021/10/1031.新玻片上有游離堿質(zhì),須清洗后使用。3.使用時切勿用手觸及玻片表面。載玻片的清潔血涂片的制備2.用過的載玻片須用肥皂水或乙醇除去染料和油污。2021/10/104手工推片法灰白層涂片法血涂片的制備方法血涂片的制備薄血涂片法厚血涂片法自動血液涂片法**2021/10/105手持玻片推制血膜推片用推片從血滴前方接觸血滴推片角度吸附血液成一線推完血片,迅速干燥手工薄血推片法2021/10/106厚薄適宜,頭體尾分明,細(xì)胞分布均勻,邊緣整齊,兩邊和兩端留有一定空隙。良好血涂片的標(biāo)準(zhǔn)血涂片的制備2021/10/107血滴越大,推片角度越大,速度越快,血液粘度越高,則血膜越厚。血滴越小,推片角度越小,速度越慢,血液粘度越低,則血膜越薄。如果取血量較少,在推血片時應(yīng)如何才能使血膜的厚薄合適?對于嚴(yán)重貧血患者,應(yīng)如何推制血片?影響血膜厚薄的因素血涂片的制備2021/10/108角度大,速度快,太厚,太短推制適當(dāng)?shù)难ね破还饣拭钣昧Σ痪?,呈搓板狀血量過多,無尾玻片油膩,有空泡2021/10/1091.灰白層涂片法抗凝血離心,取灰白層涂片。用于白細(xì)胞減少者的白細(xì)胞分類和紅斑狼瘡細(xì)胞(LEC)檢查。其他方法血涂片的制備2.厚血涂片法用于瘧原蟲、微絲蚴的檢查2021/10/1010血涂片的染色染色的目的是使細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、胞漿中顆粒及細(xì)胞核等主要結(jié)構(gòu)染上特定的顏色,以便于顯微鏡下觀察與識別。2021/10/1011一、瑞氏染色法(Wright’sstain)二、吉姆薩染色法(Giemsa’sstain)三、瑞氏-吉姆薩復(fù)合染色法血涂片的常用染色方法對胞漿和中性顆粒染色較好,對胞核稍差。對胞漿和中性顆粒染色較差,對胞核和寄生蟲著色較好。取二者之長,染色效果好。2021/10/1012瑞氏染色法染料:酸性染料伊紅和堿性染料美蘭(亞甲藍(lán))的復(fù)合染料。亞甲藍(lán)氧化為次級染料天青。溶劑:甲醇。溶解+固定。磷酸鹽緩沖液(PBS):pH6.4~6.82021/10/1013染色原理1.血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性物質(zhì),與酸性伊紅結(jié)合染成粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì)。2.嗜堿性顆粒和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性,與堿性美蘭結(jié)合,染成紫色或藍(lán)色,稱為嗜堿性物質(zhì)。3.中性顆粒呈等電點狀態(tài)與伊紅美蘭均可結(jié)合,染成紫紅色,稱為中性物質(zhì)。2021/10/1014pH對細(xì)胞染色的影響在酸性環(huán)境中染色偏紅;在堿性環(huán)境中染色偏藍(lán)。因此要求用磷酸鹽緩沖液,使染色環(huán)境維持在6.4~6.8之間,以達(dá)到滿意的染色效果。2021/10/10151.用玻璃筆在血膜兩端劃線。2.瑞氏染液覆蓋血膜,染
0.5~1min。3.加等量或稍多的緩沖液,混勻,染5~10min。4.流水沖去染液,干燥后鏡檢。染色步驟瑞氏染色法2021/10/1016正常血膜外觀為淡紫紅色。鏡下RBC和嗜酸性顆粒染粉紅色,嗜堿性顆粒染紫黑色,中性顆粒染淡紫紅色,細(xì)胞核染紫紅色。染色結(jié)果瑞氏染色法2021/10/10175.若有染料殘渣,可用少量甲醇溶解,并立即用流水沖洗。1.血膜正面朝上,干透后再染色。2.染色時間與染液濃度、室溫和細(xì)胞多少有關(guān)。3.染色過程中防止蒸發(fā)沉淀。4.沖洗時應(yīng)以流水沖洗,沖洗時間不能太久。注意事項瑞氏染色法6.復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液再加染液,或加染液與緩沖液的混合液。2021/10/1018質(zhì)量控制瑞氏染色法1.載玻片要清潔。2.制備良好的血涂片。3.選擇抗凝劑。4.處理白細(xì)胞濃度較低的標(biāo)本。5.血細(xì)胞比容與涂片關(guān)系。6.新配置染液的處理。7.染色過深、過淺的處理。2021/10/1019紅細(xì)胞形態(tài)檢查
在貧血或其他血液系統(tǒng)疾病時紅細(xì)胞除有數(shù)量變化外,往往伴有形態(tài)改變,表現(xiàn)在紅細(xì)胞大小、形狀、染色性質(zhì)和內(nèi)涵物的異常。因此,紅細(xì)胞形態(tài)檢查對貧血的診斷和鑒別診斷有重要的臨床價值。2021/10/1020紅細(xì)胞形態(tài)檢查方法低倍鏡:油鏡:制備血涂片染色鏡檢檢查區(qū)域:體尾交界處,細(xì)胞分布均勻,紅細(xì)胞緊密排列但不重疊。估計細(xì)胞分布和染色情況,瀏覽全片是否存在異常細(xì)胞。觀察紅細(xì)胞形態(tài)。2021/10/1021正常紅細(xì)胞形態(tài)雙凹圓盤形,淡桔紅色,中央1/3為生理性淡染區(qū),呈正常色素性。紅細(xì)胞直徑為6.7~7.7μm,平均直徑7.2μm左右,厚約2μm。無核,胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)構(gòu)。除健康人外,還見于急性失血、再生障礙性貧血和部分白血病。2021/10/1022正常紅細(xì)胞形態(tài)2021/10/1023異常紅細(xì)胞形態(tài)紅細(xì)胞大小異常紅細(xì)胞形狀異常血紅蛋白充盈度與著色異常紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)紅細(xì)胞排列異常有核紅細(xì)胞
2021/10/1024紅細(xì)胞大小異常1.小紅細(xì)胞(microcyte):直徑<6μm。血片中出現(xiàn)大量的染色過淺的小紅細(xì)胞,提示血紅蛋白生成障礙,常見于缺鐵性貧血(IDA)、珠蛋白生成障礙性貧血。遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥(HS),血紅蛋白充盈良好,生理性中心淡染區(qū)消失。2021/10/1025小紅細(xì)胞(microcyte)2021/10/1026紅細(xì)胞大小異常2.大紅細(xì)胞(macrocyte):直徑>10μm。最常見于缺乏葉酸和維生素B12所致的巨幼細(xì)胞性貧血(MA)。也可見于溶血性貧血(HA)、骨髓增生異常綜合癥(MDS)。3.巨紅細(xì)胞(megalocyte):直徑>15μm。常見于巨幼細(xì)胞性貧血(MA)和骨髓增生異常綜合癥(MDS)。2021/10/1027大紅細(xì)胞巨紅細(xì)胞2021/10/1028紅細(xì)胞大小異常4.紅細(xì)胞大小不均(anisocytosis):指紅細(xì)胞之間直徑相差一倍以上。見于嚴(yán)重的增生性貧血的血涂片中。巨幼細(xì)胞性貧血尤為明顯,與骨髓造血紊亂有關(guān)。2021/10/1029紅細(xì)胞大小不均2021/10/1030紅細(xì)胞大小異常小紅細(xì)胞(microcyte)大紅細(xì)胞(macrocyte)
巨紅細(xì)胞(megalocyte)紅細(xì)胞大小不均(anisocytosis)2021/10/1031紅細(xì)胞形狀異常1.球形紅細(xì)胞(spherocyte):直徑小于正常,厚度增加大于2μm。無中心淡染區(qū)。常見于遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥(HS)和伴有球形細(xì)胞增多的其他溶血性貧血如AIHA、HDN等。2021/10/1032球形紅細(xì)胞2021/10/1033紅細(xì)胞形狀異常2.橢圓形紅細(xì)胞(elliptocyte):細(xì)胞呈卵圓形、桿狀,長度可大于寬度3~4倍。這類紅細(xì)胞成熟后在高滲、等滲、低滲及正常血清內(nèi),其橢圓形保持不變。常見于遺傳性橢圓形紅細(xì)胞增多癥(HE),可高達(dá)25%~75%(正常人為1%)。也見于巨幼細(xì)胞貧血。
2021/10/1034橢圓形紅細(xì)胞2021/10/1035紅細(xì)胞形狀異常3.靶形紅細(xì)胞(targetcell):紅細(xì)胞中心部位染色較深,其周圍為蒼白區(qū)域,而細(xì)胞邊緣又深染,形如射擊之靶。常見于各種低色素貧血(主要是地中海貧血,珠蛋白生成障礙性貧血)??赡芤騂bA含量貧乏而又分布不均所致。應(yīng)注意與在血涂片制作中未及時固定而引起的改變相區(qū)別。2021/10/1036靶形紅細(xì)胞2021/10/1037紅細(xì)胞形狀異常4.口形紅細(xì)胞(stomatocyte):紅細(xì)胞中央蒼白區(qū)呈扁平狀,頗似張開的嘴巴或魚口。血涂片中口形紅細(xì)胞增多,見于遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥(HST),常>10%。也可見于酒精中毒、小兒消化系統(tǒng)疾病引起的貧血等。2021/10/1038口形紅細(xì)胞2021/10/1039紅細(xì)胞形狀異常5.鐮形紅細(xì)胞(sicklecell):呈狹長形,形如鐮刀,兩端尖銳,正常情況下少見。主要見于HbS病,是由于紅細(xì)胞內(nèi)存在異常HbS所致。在缺氧的情況下,異常HbS溶解度降低,形成狹長的結(jié)晶體,使紅細(xì)胞變形。2021/10/1040鐮形紅細(xì)胞2021/10/1041紅細(xì)胞形狀異常6.棘形紅細(xì)胞(acanthocyte):紅細(xì)胞表面有針狀或指狀突起,間距不規(guī)則,突起的長度和寬度可不一。在β-脂蛋白缺乏癥病人的血涂片中出現(xiàn)較多。也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥、溶性性貧血及重金屬中毒。應(yīng)與皺縮紅細(xì)胞區(qū)別。2021/10/1042紅細(xì)胞形狀異常7.皺縮紅細(xì)胞:也稱鈍鋸齒形紅細(xì)胞(echinocyte),主要由于高滲、制片不當(dāng)?shù)仍蛟斐?,紅細(xì)胞周邊呈鈍鋸齒狀排列緊密,大小相等,長短一致。
2021/10/1043皺縮紅細(xì)胞2021/10/1044紅細(xì)胞形狀異常8.淚滴形紅細(xì)胞(teardropcell):形如淚滴或梨狀,正常人偶見。多見于骨髓纖維化。2021/10/1045淚滴形紅細(xì)胞2021/10/1046紅細(xì)胞形狀異常9.裂片細(xì)胞(schistocyte):為紅細(xì)胞碎片或不完整的紅細(xì)胞,系紅細(xì)胞通過管腔狹小的微血管受牽拉、擠壓所致。有各種形態(tài)如刺形、盔形、三角形及扭轉(zhuǎn)形等。正常人血片中裂片紅細(xì)胞<2%。增多見于彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、微血管病性溶血性貧血(MHA)。
2021/10/1047紅細(xì)胞形狀異常10.紅細(xì)胞形態(tài)不整(poikilocyte):指紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生無規(guī)律的明顯改變。如淚滴狀、梨形、棍棒形及新月形。最常見于具有巨幼細(xì)胞性貧血(MA)。可能是由于貧血嚴(yán)重而造血原料不足,在骨髓內(nèi)粗制濫造所致。也可能是紅細(xì)胞脆性較大,在推片時碎裂所致。2021/10/1048紅細(xì)胞形態(tài)不整2021/10/1049紅細(xì)胞形狀異常球形紅細(xì)胞 橢圓形紅細(xì)胞靶形紅細(xì)胞 口形紅細(xì)胞鐮形紅細(xì)胞 棘形紅細(xì)胞皺縮紅細(xì)胞 淚滴形紅細(xì)胞裂片細(xì)胞 紅細(xì)胞形態(tài)不整2021/10/1050血紅蛋白充盈度與著色異常1.低色素性(hypochromic):紅細(xì)胞的生理性中心淡染區(qū)擴大,染色淡薄,甚至為環(huán)形紅細(xì)胞,提示血紅蛋白含量明顯減少,常見于缺鐵性貧血(IDA)、珠蛋白合成障礙性貧血、鐵幼粒細(xì)胞性貧血(SA)和某些血紅蛋白病。2021/10/1051低色素性(hypochromic)2021/10/1052血紅蛋白充盈度與著色異常2.高色素性(hyperchromic):紅細(xì)胞的生理性中心淡染區(qū)消失,整個紅細(xì)胞著色較深,而且胞體也大,區(qū)別于球形紅細(xì)胞,MCH增高。最常見于巨幼紅細(xì)胞性貧血(MA)。
2021/10/1053高色素性(hyperchromic)2021/10/1054血紅蛋白充盈度與著色異常3.嗜多色性(polychromic):屬于尚未成熟的紅細(xì)胞,呈淡灰藍(lán)色或灰紅色,胞體大,相當(dāng)于活體染色的網(wǎng)織紅細(xì)胞。由于胞質(zhì)中含有多少不等嗜堿性物質(zhì)RNA與血紅蛋白并存,因此呈嗜多色性。嗜多色性紅細(xì)胞增多提示骨髓增生活躍,見于急性失血性貧血和溶血性貧血。2021/10/1055嗜多色性(polychromic)2021/10/1056血紅蛋白充盈度與著色異常4.細(xì)胞著色不一(anisochromia):紅細(xì)胞著色不一致,血紅蛋白充盈度偏離較大,如同時出現(xiàn)低色素性和正常色素性紅細(xì)胞,常見于鐵粒幼細(xì)胞性貧血(SA)。2021/10/1057血紅蛋白充盈度與著色異常低色素性(hypochromic)高色素性(hyperchromic)細(xì)胞著色不一(anisochromia)嗜多色性(polychromic)2021/10/1058紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)
1.嗜堿性點彩紅細(xì)胞(basophilicstipplingcell):簡稱點彩紅細(xì)胞。在瑞氏染色條件下,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性灰藍(lán)色點狀物的紅細(xì)胞。屬于未完全紅細(xì)胞,其顆粒大小不一、數(shù)量不等。重金屬中毒者增多,常作為鉛中毒的診斷篩選試驗。2021/10/1059嗜堿性點彩紅細(xì)胞2021/10/1060紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)
2.豪焦小體(howell-jollysbody):又稱染色質(zhì)小體。位于成熟或幼紅細(xì)胞的胞質(zhì)中,圓形,有1~2μm大小,染成紫紅色,有1至多個,是核的殘余物。常見于巨幼細(xì)胞貧血、溶血性貧血、脾切除后和白血病。2021/10/1061豪焦小體2021/10/1062紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)
3.卡波環(huán)(Cabotring):胞質(zhì)內(nèi)變性脂蛋白所致。位于成熟或幼稚紅細(xì)胞的胞質(zhì)中,呈圓形或8字形的細(xì)線圈狀結(jié)構(gòu)。見于脾切除后或巨幼細(xì)胞性貧血。常與豪周小體并存。2021/10/1063卡波環(huán)2021/10/1064紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)
4.寄生蟲。如瘧原蟲的環(huán)狀體。2021/10/1065紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu)
嗜堿性點彩紅細(xì)胞豪焦小體卡波環(huán)寄生蟲2021/10/1066紅細(xì)胞排列異常1.紅細(xì)胞緡錢狀形成(rouleauxformation):
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