植物離體微繁中存在的主要問題

種子生產(chǎn)基礎(chǔ)《離體微繁中存在的主要問題》目錄CONTENTS一褐變二玻璃化三遺傳的穩(wěn)定性四污染褐變一、褐變褐變與菌類污染和玻璃化一起被稱為組織培養(yǎng)中的三大障礙。原因：材料的生理狀態(tài)、培養(yǎng)基成分、外植體大小、人為切割等?？朔拇胧哼x擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w和培養(yǎng)條件、抗氧化劑和抑制劑的作用、連續(xù)轉(zhuǎn)移和預(yù)處理。一、褐變玻璃化二、

玻璃化試管苗玻璃化：是指組織培養(yǎng)過程中的特有的一種生理失調(diào)或生理病變，試管苗呈半透明狀外觀形態(tài)異常的現(xiàn)象。（一）玻璃化苗的形態(tài)學(xué)、解剖學(xué)特征形態(tài)上，水漬化呈半透明狀，植株矮小腫脹，莖尖頂端分生組織相對較小，保持分生組織特性的時期也縮短，節(jié)間短或幾乎沒有，葉表面縮小或增大，葉片常皺縮并縱向卷曲，脆弱易破碎，其顏色不正常。八寶景天正常苗八寶景天玻璃化苗（一）玻璃化苗的形態(tài)學(xué)、解剖學(xué)特征顯微學(xué)觀察表明，玻璃化苗一般莖皮層及髓部的薄壁組織過度伸長、細(xì)胞間隙大、輸導(dǎo)組織發(fā)育不良或畸形，導(dǎo)管和管胞木質(zhì)化不完全。葉片柵欄組織細(xì)胞層數(shù)減少，或僅有海綿組織，葉肉細(xì)胞間隙大。車輪棠玻璃化與正常芽和葉片顯微結(jié)構(gòu)的對比（二）玻璃化苗的生理生化特點細(xì)胞中含水量高，葉綠素、蛋白質(zhì)、纖維素和木質(zhì)素等含量較低。牛自勉等研究發(fā)現(xiàn)蘋果玻璃化苗的葉片及莖尖中GA3、IAA、ABA含量極顯著上升，而CTK含量則顯著下降。hyperhydricityinOreopanax（及山參屬）

nymphaefolia（三）影響試管苗玻璃化的因素外植體：外植體類型及大小培養(yǎng)的環(huán)境條件：光照、溫度、濕度、pH值。培養(yǎng)基成分：Ms培養(yǎng)基是控制玻璃化發(fā)生較理想的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中增加K、P、Fe、Ca、Mn、Zn元素的含量，降低B含量，增加硝態(tài)氮，降低銨態(tài)氮，可起到降低玻璃化率的作用?，斂ǎㄋ模┎ＡЩ绲木C合控制選擇合適的外植體：玻璃化苗絕大多數(shù)為來自莖尖或莖切段培養(yǎng)物的不定芽。改善培養(yǎng)基組成：適當(dāng)降低培養(yǎng)基中NH4+濃度，適當(dāng)添加IAA、GA3、ABA，減少BA用量均可降低玻璃化苗的發(fā)生頻率。改善培養(yǎng)條件：適當(dāng)提高培養(yǎng)時的光照強度，延長光照時間，降低培養(yǎng)容器內(nèi)的空氣相對濕度，改善供氧狀況，采用有透氣膜的培養(yǎng)容器等培養(yǎng)條件的改良均可以降低玻璃化苗的發(fā)生頻率。遺傳的穩(wěn)定性三、遺傳的穩(wěn)定性實踐證明，莖尖分生組織是遺傳學(xué)上最穩(wěn)定的部分，通過頂芽和腋芽繁殖途徑進行增殖是最能保持原品種優(yōu)良特性的繁殖方式。變異的白花貝母蘭白花貝母蘭組培苗污染四、

污染（一）來源植物材料本身（表面、內(nèi)生菌）；在無菌操作和培養(yǎng)過程中由外界環(huán)境

進入培養(yǎng)容器而引起的。四、

污染（二）污染的癥狀

2～3d產(chǎn)生菌落——表面滅菌不徹底；3～5d后陸續(xù)產(chǎn)生——內(nèi)生菌所致。（三）污染所引起的危害引起早期培養(yǎng)的失敗，試管苗生長速度減慢、生活力下降、增殖效率降低、玻璃苗增加及生長不均勻、葉片失綠甚至死亡等；在后期導(dǎo)致試管苗移栽困難和死亡；污染也會引起培養(yǎng)物的遺傳變異。（四）污染的防止供體材料的選擇：盡可能使用溫室和人工氣候條件中培養(yǎng)的健康、無病蟲害植物作材料。培養(yǎng)物的檢測：特別要注意培養(yǎng)物和培養(yǎng)基接觸的部分。合理的擴繁殖程序：將最初的無菌培養(yǎng)物中一部分作為“原原種”進行專門保存，分批繁殖和復(fù)檢后再進行大規(guī)模生產(chǎn)。嚴(yán)格無菌操作規(guī)程（五）已污染培養(yǎng)物的處理抗菌素：弄清楚要抑制菌的種類；使用的抗生素是否對培養(yǎng)的植物組織有不良影響；還要確立抗生素的使用濃度、處理時間的長短。采取措施恢復(fù)無菌狀態(tài)，方法之一是使培養(yǎng)物在試管內(nèi)長成小植株后移栽，待它生長成健壯的幼苗后再重新消毒接種。另一種方法在一個較大的容器中生長，適當(dāng)降低容