實驗一：培養(yǎng)基的制備和滅菌

試驗目的〔〕〔〕〔〕根本原理培育基是依據(jù)微生物生長生殖所需要的各種養(yǎng)分物質(zhì)用人工方法配制而成的基質(zhì)〔〕將培育基調(diào)整到肯定的pH范圍，如，細菌培育基中性偏堿、放線菌培育基偏堿、霉菌、酵母菌培育基偏酸?；某煞峙c液體一樣，僅在液體培育基中參加凝固劑作支持物，通常參加0.5~2.0%的瓊脂，半固體參加0.3~0.5%瓊脂作支持物，有時也可用明膠或硅膠作為凝固劑?；呐渲品椒ㄊ菑氖挛⑸飳W試驗工作的重要根底。高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，100C的溫度。導致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而到達滅菌的目的。三、實驗器材〔一〕藥品：待配各種培育基的組成成分〔牛肉膏、蛋白胨、NaCI〕、瓊脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。〔〕〔〕瓷缸、量筒、三角瓶、培育皿、玻璃漏斗等。〔〕

pH號筆、標簽紙、紗布、棉花、牛皮紙、線繩、剪刀、鑷子、白瓷盤等。四、試驗步驟〔一〕玻璃器皿的洗滌和包裝量筒等浸入含用。滅菌前玻璃器皿的包裝皿包成一包。0.5cm1~1.5cm。棉花要塞得松緊適宜，吹時以能通氣而又不使棉花滑下為準。試驗圖-3移液管的包扎先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條，然后將已塞好棉花的移液管尖端放在長45C角，折疊紙條包住尖端，用左手握住移液管身，有手將移滅菌。(二液體及固體培育基的配制過程液體培育基配制稱量：一般可用O.OIg天平稱量配制培育基所需的各種藥品，先按培育基配方計算出各成分的用量?然后進展準確稱量。溶解：將稱好的藥品置于一燒杯中，先參加少量水(依據(jù)試驗需要可用自來水或蒸餾水)，用玻璃棒攪動，加熱溶解。定容：待全部藥品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需體積。如某種藥品用調(diào)pH:—般用pH試紙測定培育基的pH1mol/LNaoH1mol/LHCl溶液進展調(diào)整。調(diào)整pH時，應(yīng)逐滴參加NaOH或HCI溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培育基中成分。邊加邊攪拌，并不時用pHpH為止。過濾：用濾紙或多層紗布過濾培育基。一般無特別要求時，此步可省去。固體培育基的配制〔1.5~2%〕蒸發(fā)而失去水分。〔三〕棉塞的制作及試管、錐形瓶的包扎為了培育好氣性微生物，需供給優(yōu)良通氣條件，同時為防止雜菌污染，則必需對塞等。試管棉塞的制作制棉塞時，應(yīng)選用大小、厚薄適中的一般棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊卷塞法制作棉塞。制作的棉塞應(yīng)緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準。棉塞的2/3在試管內(nèi)，1/3在試管外。目前也有承受硅膠塞代替棉塞直接蓋在試管口上。試驗圖-4棉塞的制備 試驗圖-5正確與不正確的棉塞將裝好培育基并塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。用記號筆注明培育基名稱及配制日期，滅菌待用。三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶口上。有時為了進展液體振蕩培育加大通8層紗布代替棉塞包在瓶口上，目前也有承受硅膠塞直接蓋在瓶口上。在裝好培育基并塞好棉塞或包扎八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上， 再包上一層牛皮紙并用線繩捆好，滅菌待用?！菜摹撑囵B(yǎng)基的滅菌培育基經(jīng)分裝包扎后，應(yīng)馬上按配制方法規(guī)定的滅菌條件進展高壓蒸汽滅菌?！参濉承泵婧推桨宓闹谱餍泵娴闹谱鲗⒁褱缇b有瓊脂培育基的試管，趁熱置于木棒或玻棒上，使成適當斜度，1/2基時，滅菌后則應(yīng)垂直放置至凝固。平板的制作50C培育皿中。溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低于50C，培育基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應(yīng)在火旁進展，右手拿三角瓶的底部或試管，左手拿培育皿，同時用食指夾住皿蓋，靠近火焰，將皿蓋掀開一縫至瓶口正好伸入，將已熔化的培育基10~15mL倒入無菌平皿，快速蓋好皿蓋，置于桌上，輕輕旋轉(zhuǎn)平皿，使培育基均勻分布于整個平皿中，冷凝后即成平板。〔六〕培養(yǎng)基的滅菌檢查1~2〔瓶37C溫箱1~2天，確定無菌前方可使用?！财摺碂o菌水的制備250mL100mL的蒸餾水并塞上棉塞或硅膠塞。在每支試4.5mL蒸餾水，塞上棉塞或硅膠塞。再在棉塞上包上一張牛皮紙，高壓蒸汽滅菌，O.IMPa滅菌20~30min。留意事項留意事項1、稱取藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙稱一種藥品；22騰外溢；4、分裝量依據(jù)試管大小和實際需要而定，固體培育基裝量約為管高的1/5,1/4,半固體分裝試管一般以管高度三分之一為宜，三角