第22章-引起侵襲性感染的真菌

第22章-引起侵襲性感染的真菌第一頁，共51頁。概論引起侵襲性感染的真菌，又稱深部感染真菌，是指能侵襲深部組織和內(nèi)臟及全身的真菌，主要有假絲酵母菌、隱球菌、曲霉、毛霉、組織胞漿菌和卡氏肺孢菌等，其中以隱球菌感染較常見。組織胞漿菌為二相性真菌，假絲酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等為條件致病性真菌，只有在一定條件下才引起機(jī)體致病。第二頁，共51頁。假絲酵母菌屬假絲酵母菌（Candida），俗稱念珠菌，生物學(xué)分類為半知菌亞門、半知菌綱、隱球菌目、假絲酵母菌屬。本屬菌有150多個(gè)種，其中有11種對人有致病性，其中以白假絲酵母菌為最常見的致病菌。第三頁，共51頁。白假絲酵母菌臨床意義：女性的假絲酵母菌性陰道炎、外陰炎；男性假絲酵母菌龜頭炎、包皮炎；體質(zhì)虛弱嬰兒的鵝口瘡；假絲酵母菌性腸炎、肺炎、膀胱炎、腎孟腎炎和心內(nèi)膜炎等；中樞神經(jīng)系統(tǒng)白色假絲酵母菌病，如腦膜炎、腦膜腦炎、腦膿腫等。第四頁，共51頁。第五頁，共51頁。白假絲酵母菌微生物檢驗(yàn)一、標(biāo)本直接檢查二、分離培養(yǎng)鑒定三、藥物敏感試驗(yàn)四、抗體檢測五、動(dòng)物試驗(yàn)

第六頁，共51頁。分離培養(yǎng)及鑒定菌落特征:標(biāo)本沙氏培養(yǎng)基上25℃

或37℃培養(yǎng)1~4d后，培養(yǎng)基表面可出現(xiàn)奶油色類酵母型菌落。鏡檢可見假菌絲和芽生孢子。鑒定試驗(yàn):芽管形成試驗(yàn)，厚膜孢子形成試驗(yàn)，糖同化或發(fā)酵試驗(yàn)，產(chǎn)色培養(yǎng)基鑒定。第七頁，共51頁。沙氏斜面血平板第八頁，共51頁。芽管形成試驗(yàn)第九頁，共51頁。產(chǎn)色培養(yǎng)基第十頁，共51頁。熱帶假絲酵母菌

直接顯微鏡檢查將標(biāo)本作涂片革蘭染色后鏡檢，觀察革蘭陽性的假絲酵母菌。分離培養(yǎng)與鑒定標(biāo)本沙氏培養(yǎng)基上形成色暗而干燥的菌落取菌落作TZC反應(yīng)取菌落作糖發(fā)酵或同化試驗(yàn)。芽管形成較遲（血清中6h以上），不形成厚膜孢子、動(dòng)物試驗(yàn)陰性。第十一頁，共51頁。隱球菌屬其中對人致病的最主要是新生隱球菌及其變種（新型隱球菌新型變種、新型隱球菌格特變種和新型隱球菌格魯比變種。新生隱球菌廣泛分布于自然界，也可存在于人體體表、口腔和腸道中。第十二頁，共51頁。新生隱球菌（墨汁負(fù)染色）

第十三頁，共51頁。隱球菌微生物檢驗(yàn)

直接鏡檢：用患者腦脊液作墨汁負(fù)染色檢查是診斷隱球菌腦膜炎最簡便、快速之方法。抗原檢測：用免疫學(xué)方法檢測隱球菌莢膜多糖特異性抗原，以乳膠凝集試驗(yàn)最為常用，此法簡便、快速。核酸檢測、藥物敏感試驗(yàn)、抗體檢測。分離培養(yǎng)：將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上，病原性隱球菌在25℃和37℃孵育的可生長，而非病原性隱球菌在37℃時(shí)不生長。培養(yǎng)2~5d后觀察菌落形態(tài)特點(diǎn)，并取菌落作印度墨汁負(fù)染色鏡檢。第十四頁，共51頁。新生隱球菌菌落第十五頁，共51頁。新生隱球菌微生物鑒定1.酚氧化酶試驗(yàn)將菌接種L-多巴枸櫞酸鐵和咖啡酸培養(yǎng)基中，培養(yǎng)2~5d，新生隱球菌呈棕黑色菌落。用已知新生隱球菌和淺白隱球菌分別作陽性和陰性對照。2.脲酶試驗(yàn)新生隱球菌能產(chǎn)生脲酶，可分解尿素瓊脂培養(yǎng)基的尿素形成NH4和CO2，使培養(yǎng)基pH升高，培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榉奂t色。白假絲酵母菌則為陰性。

3.糖同化及發(fā)酵試驗(yàn)新生隱球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能發(fā)酵糖類、不同化硝酸鹽。非致病性隱球菌則不能同化肌醇。第十六頁，共51頁。曲霉菌

曲霉菌是條件致病菌，人體對其有極強(qiáng)免疫力，只有在人體免疫功能降低時(shí)才能致病。曲霉可引起呼吸系統(tǒng)曲霉病；全身性曲霉?。磺箍僧a(chǎn)生毒素引起機(jī)體食物中毒；致癌作用。

第十七頁，共51頁。曲霉微生物檢驗(yàn)

直接顯微鏡檢查取痰液等被檢材料涂于載玻片上，在鏡下可見分枝的菌絲、較粗的分生孢子頭，頂端膨大形成頂囊，頂囊上有小梗，小梗上有許多小分生孢子?？乖瓩z測、抗體檢測、藥敏試驗(yàn)、皮膚試驗(yàn)。分離培養(yǎng)與鑒定：標(biāo)本接種沙氏瓊脂，室溫培養(yǎng)后菌落形成快，呈毛狀，一般為黃綠色。將菌落涂片鏡檢可見特征性的分子孢子頭和足細(xì)胞。根據(jù)不同的曲霉的形態(tài)和菌落特征確定菌種。

第十八頁，共51頁。曲霉結(jié)構(gòu)圖第十九頁，共51頁。煙曲霉菌落煙曲霉,光鏡X400第二十頁，共51頁。黃曲霉菌落黃曲霉,光鏡X200

第二十一頁，共51頁。黑曲霉菌落

黑曲霉,光鏡X200第二十二頁，共51頁。土曲霉菌落

土曲霉，光鏡X200

第二十三頁，共51頁。構(gòu)巢曲霉菌落

構(gòu)巢曲霉,光鏡X400第二十四頁，共51頁。雜色曲霉菌落雜色曲霉,光鏡X400第二十五頁，共51頁。曲霉菌

曲霉菌是條件致病菌，人體對其有極強(qiáng)免疫力，只有在人體免疫功能降低時(shí)才能致病。曲霉可引起呼吸系統(tǒng)曲霉病；全身性曲霉??；曲霉可產(chǎn)生毒素引起機(jī)體食物中毒；致癌作用。最常見的是煙曲霉、黃曲霉和黑曲霉。第二十六頁，共51頁。曲霉微生物檢驗(yàn)

直接顯微鏡檢查取痰液等被檢材料涂于載玻片上，在鏡下可見分枝的菌絲、較粗的分生孢子頭，頂端膨大形成頂囊，頂囊上有小梗，小梗上有許多小分生孢子?？乖瓩z測、抗體檢測、藥敏試驗(yàn)、皮膚試驗(yàn)。分離培養(yǎng)與鑒定：標(biāo)本接種沙氏瓊脂，室溫培養(yǎng)后菌落形成快，呈毛狀，一般為黃綠色。將菌落涂片鏡檢可見特征性的分子孢子頭和足細(xì)胞。根據(jù)不同的曲霉的形態(tài)和菌落特征確定菌種。

第二十七頁，共51頁。曲霉結(jié)構(gòu)圖第二十八頁，共51頁。煙曲霉菌落煙曲霉,光鏡X400第二十九頁，共51頁。黃曲霉菌落黃曲霉,光鏡X200

第三十頁，共51頁。黑曲霉菌落

黑曲霉,光鏡X200第三十一頁，共51頁。土曲霉菌落

土曲霉，光鏡X200

第三十二頁，共51頁。構(gòu)巢曲霉菌落

構(gòu)巢曲霉,光鏡X400第三十三頁，共51頁。雜色曲霉菌落雜色曲霉,光鏡X400第三十四頁，共51頁。組織胞漿菌屬有兩個(gè)種：莢膜組織胞漿菌、組織孢漿菌的杜波變種。本菌傳染性極大，主要侵犯網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，有時(shí)也可由血行播散而侵犯全身各臟器。組織胞漿菌是一種雙相型真菌，在25℃培養(yǎng)時(shí)呈典型菌絲體，在37℃培養(yǎng)時(shí)為酵母型，位于細(xì)胞內(nèi)或外。

第三十五頁，共51頁。微生物檢驗(yàn)1.直接顯微鏡檢查應(yīng)涂片染色后檢查。痰液等標(biāo)本：涂片后先用甲醇固定10min，再用姬

姆薩染色鏡檢。皮損、膿液等標(biāo)本：用20%KOH涂片后鏡檢2.抗原檢測、藥物敏感試驗(yàn)、抗體檢測3.分離培養(yǎng)與鑒定①標(biāo)本含抗生素的沙氏培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)，生長緩慢，有時(shí)需4~6周才開始生長，逐漸形成白色至棕色絨毛狀菌落。

第三十六頁，共51頁。②轉(zhuǎn)種于血瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)，很快形成酵母型菌落。③培養(yǎng)物顯微鏡特征：25℃沙氏培養(yǎng)，可以發(fā)現(xiàn)特征性的大分生孢子，但初代培養(yǎng)不典型，繼代培養(yǎng)可有典型大分生孢子。④鑒定：取可疑菌落涂片染色鏡檢，并作脲酶

試驗(yàn)和明膠液化試驗(yàn)。第三十七頁，共51頁。莢膜組織胞漿菌菌落為棉絮狀，鏡檢可見細(xì)長有隔菌絲，菌絲側(cè)面或孢子柄上長有特殊的圓形大分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齒輪直徑8～14μm，表面有指狀突起，形成對組織胞漿菌有突出診斷意義的特征性齒輪狀大分生孢子。血液標(biāo)本油鏡下鏡檢可見在中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞中有卵圓形或圓形的酵母細(xì)胞。第三十八頁，共51頁?？ㄊ戏捂呔ㄊ戏捂呔╬neumocycsiscarinii,PC），曾稱為卡氏肺孢子蟲。卡氏肺孢菌可寄生于多種動(dòng)物，也可寄生于健康人體。廣泛分布于自然界，如土壤和水等。卡氏肺孢菌病的傳播途徑主要是空氣傳播，在健康人體內(nèi)，多為無癥狀的隱性感染。當(dāng)宿主免疫力下降，如長期使用免疫抑制劑、器官移植、腫瘤、艾滋病等，潛伏的卡氏肺孢菌在病人肺內(nèi)大量繁殖擴(kuò)散，使肺泡上皮細(xì)胞受損，導(dǎo)致間質(zhì)性漿細(xì)胞肺炎，又稱卡氏肺孢菌性肺炎（PCP）。

第三十九頁，共51頁?？ㄊ戏捂呔⑸餀z驗(yàn)

直接顯微鏡檢查

從患者痰液、支氣管肺泡灌洗液或肺活檢組織中檢查PC是確診本病的重要依據(jù)。常用的染色方法有吉姆薩染色、果氏環(huán)六亞甲基四胺銀染色(GMS)和亞甲胺藍(lán)染色?？梢詸z出包囊和滋養(yǎng)體兩種形態(tài)。抗原檢測，核酸檢測，抗體檢測等。第四十頁，共51頁?？ㄊ习铱ㄊ习液妥甜B(yǎng)體第四十一頁，共51頁。毛霉目真菌

毛霉目真菌屬于接合菌門、接合菌綱，有7個(gè)科，主要是毛霉科。本病是一種發(fā)病急，進(jìn)展快、病死率極高的系統(tǒng)性條件致病性真菌感染。毛霉目真菌有無隔菌絲，在一些陳舊培養(yǎng)基中偶見有隔菌絲。第四十二頁，共51頁。毛霉目真菌微生物檢驗(yàn)

直接鏡檢臨床標(biāo)本＋20%KOH濕片，直接鏡檢可見折光性強(qiáng)的粗大菌絲，偶見孢子囊及孢子囊梗。分離培養(yǎng)臨床標(biāo)本接種于不含放線菌酮的麥芽糖培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基及沙氏瓊脂培養(yǎng)基，25℃或37℃培養(yǎng)。藥物敏感試驗(yàn)，抗體檢測。鑒定根據(jù)毛霉、根霉與梨頭霉的形態(tài)特點(diǎn)。第四十三頁，共51頁。毛霉

根霉

梨頭霉

第四十四頁，共51頁。馬尼爾菲青霉

雙相性，在自然界中以菌絲形式存在，在組織中則可形成小圓形到橢圓形細(xì)胞。馬尼爾菲青霉可引起馬尼爾菲青霉病，引起廣泛性播散性感染，主要侵犯人的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)。

第四十五頁，共51頁。馬尼爾菲青霉微生物檢驗(yàn)

標(biāo)本直接檢驗(yàn)：取骨髓涂片、皮膚印片或淋巴結(jié)活體組織瑞氏染色后鏡檢，可見到典型圓形或卵圓形有明顯橫隔的細(xì)胞，常在巨噬細(xì)胞內(nèi)。分離培養(yǎng)與鑒定：標(biāo)本接種沙氏培養(yǎng)基上，在25℃培養(yǎng)為青霉相；37℃酵母相。抗原檢測鑒別要點(diǎn)：馬尼爾菲青霉的孢子易與莢膜組織胞漿菌孢子相混淆，但前者孢子常有橫隔，從不出芽