乙肝丙肝核酸檢測的新平臺(臨床)

自動化程度

199219961998200120032006MWPCOBASAMPLICOR

COBASAMPLIPREP

COBASAMPLICORMONITOR羅氏分子診斷標(biāo)準(zhǔn)化自動化重復(fù)性COBASTAQMAN48COBAS

TAQMAN96一直以來，羅氏分子診斷對臨床核酸檢測市場提供完善可靠和創(chuàng)新性的產(chǎn)品及解決方案目前一頁\總數(shù)二十八頁\編于二點目前乙肝和丙肝臨床治療過程中遇到的主要問題治療終點無法準(zhǔn)確判定有些病人經(jīng)一段時間治療后DNA/RNA檢測結(jié)果忽陰忽陽，但臨床癥狀依然明顯不能及時預(yù)測耐藥（病毒學(xué)突破）核苷（酸）類似物治療后病毒DNA/RNA快速下降至檢測限以下，不久卻發(fā)現(xiàn)病毒出現(xiàn)反跳療效的準(zhǔn)確監(jiān)測？？？治療后12或24周病毒DNA/RNA下降幅度直接決定預(yù)后問題的根源在哪里？目前二頁\總數(shù)二十八頁\編于二點內(nèi)容HBV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要HCV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結(jié)目前三頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HBVDNA監(jiān)測在抗病毒治療中的臨床應(yīng)用HBVDNA是監(jiān)測抗病毒治療響應(yīng)和時間的關(guān)鍵標(biāo)志物HBV治療的路線圖理念，為HBVDNA監(jiān)測用于臨床實踐提供了指導(dǎo)對用藥耐藥性的監(jiān)測（拉米夫定－YMDD，…）肝移植HBV復(fù)發(fā)風(fēng)險的降低（術(shù)前，術(shù)后）……目前四頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HBVDNA監(jiān)測的臨床應(yīng)用HBV治療路線圖

KeeffeE.ClinGastroHepatology2007;5:890-897.侯金林等，慢性乙型肝炎抗病毒治療方案優(yōu)化，中國肝臟病雜志目前五頁\總數(shù)二十八頁\編于二點國產(chǎn)試劑現(xiàn)狀目前使用的國產(chǎn)試劑能解決的問題，不能解決的問題：HBV試劑盒說明：500～5×107IU/mL較可信的測試范圍：104～5×107IU/mL對部分發(fā)生HBV病毒突變的病人無法準(zhǔn)確檢測注：1IU/mL=1copy/mL目前六頁\總數(shù)二十八頁\編于二點內(nèi)容HBV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要HCV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結(jié)目前七頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HCVDNA監(jiān)測在抗病毒治療中的臨床應(yīng)用HCV病毒感染是可治愈的疾病HCVRNA檢測可以有效指導(dǎo)臨床用藥治療的終點是核酸檢測為陰性（核酸檢測可以直接指導(dǎo)停藥時機）目前八頁\總數(shù)二十八頁\編于二點慢性HCV治療方案治療應(yīng)答名稱描述快速病毒學(xué)應(yīng)答（RVR）4周時未檢測到HCVRNA早期病毒學(xué)應(yīng)答（EVR）-完全早期病毒學(xué)應(yīng)答（cEVR）未RVR，但12周時未檢測到HCVRNA-部分早期病毒學(xué)應(yīng)答（pEVR）未RVR，12周時HCVRNA拷貝數(shù)下降≥2log10，但仍檢測到HCVRNA沒有應(yīng)答12周時HCVRNA拷貝數(shù)下降<2log10治療結(jié)束（EOT）治療結(jié)束未檢測到HCVRNA持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答（SVR）治療結(jié)束后24周，未檢測到HCVRNA反彈治療期間曾有HCVRNA低于檢出限，但尚未停藥即出現(xiàn)HCVRNA重新升高復(fù)發(fā)治療期間HCVRNA低于檢出限，但治療結(jié)束（停藥）后HCVRNA重新升高目前九頁\總數(shù)二十八頁\編于二點慢性HCV治療方案用藥12周早期病毒學(xué)反應(yīng)HCVRNA下降<2logHCV病毒檢測陰性HCV病毒檢測陽性停藥HCV病毒檢測陰性治療到24周HCVRNA檢測HCVRNA下降>2log繼續(xù)治療至48周繼續(xù)治療至24周考慮停藥目前十頁\總數(shù)二十八頁\編于二點國產(chǎn)試劑現(xiàn)狀目前使用的國產(chǎn)試劑能解決的問題，不能解決的問題：HCV試劑盒說明：500～5×107IU/mL較可信的測試范圍：104～5×107IU/mL注：1IU/mL=1copy/mL目前十一頁\總數(shù)二十八頁\編于二點內(nèi)容HBV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要HCV核酸檢測的現(xiàn)狀與需要羅氏的CAP/CTM能帶來什么益處總結(jié)目前十二頁\總數(shù)二十八頁\編于二點全世界第一臺用于體外診斷的全自動熒光定量分子診斷系統(tǒng)真正實現(xiàn)“樣品進(jìn)，結(jié)果出”全球安裝超過2,000臺，國內(nèi)安裝超過40臺COBASAmpliPrep/COBASTaqMan系統(tǒng)COBAS

AmpliPrep/COBASTaqMan48?系統(tǒng)COBASAmpliPrep/COBASTaqMan96?系統(tǒng)（帶連接系統(tǒng)）COBASAmpliPrep/COBASTaqMan96?系統(tǒng)

（無連接系統(tǒng)）目前十三頁\總數(shù)二十八頁\編于二點COBASAmpliPrep儀器簡介全自動系統(tǒng)，自動進(jìn)行核酸提取純化和PCR反應(yīng)體系配制基于MGP磁珠分離技術(shù)，確保高質(zhì)量的核酸提取純化最多72個樣品可以同時上機，運行中可連續(xù)裝載上架，提高工作效率包括耗材、樣品、試劑均可以連續(xù)上樣目前十四頁\總數(shù)二十八頁\編于二點DNA或者RNA1.裂解、穩(wěn)定和去蛋白2.核酸捕獲病毒或細(xì)胞3.沖洗4.洗脫37°C孵育COBASAmpliPrep儀器

MGP磁珠分離技術(shù)室溫80°C孵育目前十五頁\總數(shù)二十八頁\編于二點取SPU槍頭樣本管/反應(yīng)管管蓋抓手樣本初始體積感應(yīng)器取試劑鋼針CAP機械臂介紹樣本管/反應(yīng)管結(jié)構(gòu)目前十六頁\總數(shù)二十八頁\編于二點COBAS

TaqMan/COBASTaqMan48分析儀簡介檢測通量可達(dá)4*24測試獨立的24孔熱循環(huán)儀TaqMan48有2個模塊，TaqMan96有4個模塊最多可同時進(jìn)行4個不同的分析檢測操作簡單，核酸擴增和檢測全部自動完成實時定量PCR檢測技術(shù)，卓越的檢測性能，靈敏度高和特異性好，動態(tài)范圍寬目前十七頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HBV-DNA定量測試用于藥品FDA注冊試驗通用名商品名

FDA批準(zhǔn)日期關(guān)鍵的HBV-DNA測試Interferonalfa-2bα-2b干擾素

INTRON?A1991N/ALamivudine拉米夫定EPIVIR-HBV?1998雜交研究解決方案

1Adefovirdipivoxil阿德福韋酯HEPSERA?2002AmplicorMonitor2Entecavir恩替卡韋BARACLUDE?2005CobasAmplicor3Peginterferonalfa-2a聚乙二醇干擾素α-2aPEGASYS?2005CobasAmplicor4Telbivudine替比夫定TYZEKA?2006CobasAmplicor5Tenofovir替諾福韋VIREAD(HIV)Phase3CobasTaqMan6

INTRON?A(Interferonalfa-2b)[packageinsert].Schering-PloughCorp.Kenilworth,NJ2.EPIVIR-HBV?(Lamivudine)[packageinsert]GlaxoSmithKline,ResearchTrianglepark,NC3.HEPSERA?(Adefovirdipivoxil)[packageinsert]GileadSciences.FosterCity,CA4.Pegasys(Peginterferonalfa-2a)[packageinsert].Hoffmann-LaRocheInc.Nutley,NJ5.TYZEKA?(Telbivudine)[PackageInsert].NovartisPharmaceuticalsCorp.EHanover,NJ6.MarcellinPetal.HepDART2007MeetingAbstract63,Dec9-132007,Lahaina,HI目前十八頁\總數(shù)二十八頁\編于二點國外發(fā)表的文獻(xiàn)Evaluationofinitialvirologicalresponsetoadefoviranddevelopmentofadefovir-resistantmutationsinpatientswithchronichepatitisB.Gallegoetal.,JournalofViralHepatitis,2008,15,392–398Evaluationofanautomated,highlysensitive,real-timePCR-basedassay(COBASAmpliprepTM/COBASTaqManTM)forquantificationofHCVRNA.ChristophSarrazinaetal.,JournalofClinicalVirology,2008,43,162–168COBASAmpliPrep-COBASTaqManHepatitisBVirus(HBV)Test:aNovelAutomatedReal-TimePCRAssayforQuantificationofHBVDNAinPlasma.TizianoAlliceetal.,JournalofClinicalMicrobiology,Mar.2007,p.828–834EvaluationoftheCOBASAmpliPrep-totalnucleicacidsolation-COBASTaqManhepatitisBvirus(HBV)quantitativetestandcomparisontotheVERSANTHBVDNA3.0assay.RonsinCetal.,JournalofClinicalMicrobiology2006vol.44(no.4)ComparisonoftheCOBASTaqManTMHBVTestWiththeCOBASAmplicorMonitorTMTestforMeasurementofHepatitisBVirusDNAinSerum.SimonSiu-ManSumetal.,JournalofMedicalVirology2005,77:486–490HepatitisBvirus(HBV)genotypedeterminationbytheCOBASAmpliPrep/COBASTaqManHBVTest,v2.0inserumandplasmamatrices.GoedelSetal.,JournalofClinicalVirology2009Jul;45(3):232-6ComparisonofVersantHBVDNA3.0andCOBASAmpliPrep-COBASTaqManassaysforhepatitisBDNAquantitation:Possibleclinicalimplications.GARBUGLIAA.R.etal.,Journalofvirologicalmethods2007,vol.146,no1-2,pp.274-280PerformanceoftheCobasAmpliPrep/CobasTaqManReal-TimePCRAssayforHepatitisBVirusDNAQuantification.Ste′phaneChevaliezetal.,JournalofClinical,May2008,p.1716–1723……目前十九頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HBV的定量檢測性能指標(biāo)國產(chǎn)HBV試劑CAP/CTMHBV靈敏度(LOD)500IU/mL？12IU/mL檢測范圍104～5×107IU/mL54-1.1×108IU/mL定量方法外標(biāo)法定量內(nèi)標(biāo)法定量其它對部分發(fā)生HBV病毒突變的病人無法準(zhǔn)確檢測涵蓋亞型:A-G加強pre-core突變檢測注：國產(chǎn)試劑1IU/mL=1copy/mL目前二十頁\總數(shù)二十八頁\編于二點HCV的定量檢測性能指標(biāo)國產(chǎn)HCV試劑CAP/CTMHCV靈敏度(LOD)500IU/mL？15IU/mL檢測范圍104～5×107IU/mL43–6.9×107IU/mL定量方法外標(biāo)法定量內(nèi)標(biāo)法定量其它未知1-6型(能區(qū)分0.5log濃度變化)目前二十一頁\總數(shù)二十八頁\編于二點定量原理

外標(biāo)法定量（國產(chǎn)試劑）使用一組（4管）外部標(biāo)準(zhǔn)品定量，分別為5×104到5×107IU/mL未考慮各患者血液成分間的差異性對結(jié)果的影響目前二十二頁\總數(shù)二十八頁\編于二點定量原理

內(nèi)標(biāo)定量InternalQuantitationStandard(CAP/CTM)內(nèi)標(biāo)是已知拷貝數(shù)的人工構(gòu)建核酸，加入每一反應(yīng)管，與靶核酸競爭擴增，管內(nèi)定量可提示反應(yīng)是否存在反應(yīng)抑制，避免假陰性結(jié)果充分考慮管間反應(yīng)效率的差異，得到可靠精確的結(jié)果目前二十三頁\總數(shù)二十八頁\編于二點COBASAmpliPrep/COBASTaqMan系統(tǒng)封閉樣品管輸入，封閉PCR管輸出標(biāo)準(zhǔn)化，重復(fù)性純化好的核酸主反應(yīng)液PCR反應(yīng)體系的配制試劑、樣品和耗材的裝載上機樣品處理單元K-槍頭K-管樣品試劑目前二十四頁\總數(shù)二十八頁\編于二點Branchburg生產(chǎn)廠房

羅氏投資超過1.5億美金，建成全球最大分子診斷試劑生產(chǎn)基地

目前每月生產(chǎn)14萬套試劑

目前二十五頁\總數(shù)二十八頁\編于二點羅氏分子診斷嚴(yán)格的生產(chǎn)和質(zhì)控體系

為整個行業(yè)設(shè)定了高標(biāo)準(zhǔn)1.原料嚴(yán)格把關(guān)3.GMP生產(chǎn)2.原料質(zhì)檢4.GMP生產(chǎn)6.成品質(zhì)檢5.試劑盒成品7.資料入檔目前二十六頁\總數(shù)二十八頁\編于二點COBASAmpliPrep/COBASTaqMan

全自動熒光定量分子診斷系