第八章超敏反應(yīng)及其疾病

提要利用免疫學(xué)原理建立的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)主要應(yīng)用于對(duì)多種免疫性疾?。ǜ腥拘约膊?、免疫缺陷病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反應(yīng)和腫瘤等）的診斷、療效評(píng)估、發(fā)病機(jī)制探討、以及對(duì)抗原性物質(zhì)或免疫細(xì)胞的定性、定量，對(duì)細(xì)胞因子、粘附分子及細(xì)胞受體的檢測(cè)等。目前一頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)第一節(jié)抗原或抗體的檢測(cè)抗原-抗體反應(yīng)包括沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、溶解反應(yīng)、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)等?？乖?抗體反應(yīng)可用已知的特異性抗體檢測(cè)未知的抗原；也可用已知的抗原檢測(cè)未知的抗體。免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)、同位素標(biāo)記技術(shù)、發(fā)光免疫分析等免疫標(biāo)記技術(shù)提高了抗原抗體反應(yīng)的敏感性。目前二頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)抗原-抗體反應(yīng)的特點(diǎn)抗原-抗體的結(jié)合是特異性結(jié)合抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合抗原抗體反應(yīng)可分為兩個(gè)階段特異性結(jié)合階段可見(jiàn)的反應(yīng)階段抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)可見(jiàn)的反應(yīng)現(xiàn)象，于兩者的分子比例密切相關(guān)目前三頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)抗原抗體比例對(duì)反應(yīng)現(xiàn)象的影響目前四頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)抗原-抗體反應(yīng)受多種因素影響1電解質(zhì)：抗原-抗體反應(yīng)通常應(yīng)用0.85%的氯化鈉作為稀釋液，以供給適應(yīng)濃度的電解質(zhì)。2溫度：一般常使用反應(yīng)在37度水浴或孵育箱中進(jìn)行。3.酸堿度：抗原-抗體反應(yīng)適應(yīng)的酸堿度

為PH6~8。抗原-抗體反應(yīng)受多種因素影響目前五頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)抗原抗體的檢測(cè)方法凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體溶血反應(yīng)和補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中和反應(yīng)用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)目前六頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)凝集反應(yīng)

(Agglutination)細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集現(xiàn)象，稱(chēng)為凝聚反應(yīng)。1、直接凝集：將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。2、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細(xì)胞或乳膠顆粒表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象。目前七頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)血球凝集目前八頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)

沉淀反應(yīng)

（Precipitation)血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，這一類(lèi)反應(yīng)稱(chēng)為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)可在液體中進(jìn)行，如絮狀沉淀。大多沉淀反應(yīng)是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散故也稱(chēng)免疫擴(kuò)散。目前九頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)單向免疫擴(kuò)散

(SingleImmunodiffusion)是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗原加入孔中擴(kuò)散?？乖跀U(kuò)散過(guò)程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量成正比相關(guān)。本法常用于測(cè)定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗體的凝膠沉淀環(huán)目前十頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)雙向免疫擴(kuò)散

（DoubleImmunodiffusion)是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周?chē)鷶U(kuò)散并相遇，在比例合適處形成沉淀線。如果反應(yīng)體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性、組成和兩種抗原相關(guān)性分析的檢測(cè)。目前十一頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)免疫電泳

（Immunoelectrophoresis)是先將待側(cè)血清標(biāo)本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組分被分成不同的區(qū)帶，然后與電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)的抗血清，把分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴(kuò)散，在各區(qū)帶相應(yīng)的位置形成沉淀弧。該法常用于血清蛋白種類(lèi)分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。目前十二頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)火箭電泳（RocketElectrophoresis)

火箭電泳也稱(chēng)免疫擴(kuò)散，是把單向免疫擴(kuò)散同電泳結(jié)合在一起的方法?？乖诤卸靠贵w的瓊脂中泳動(dòng)，兩者比例適宜時(shí)，在較短時(shí)間內(nèi)生成錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內(nèi)，沉淀峰的高度與抗原含量成正比。此法的特點(diǎn)是需時(shí)較短，故可用于快速沉淀標(biāo)本中抗原的含量。目前十三頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)火箭電泳示意圖目前十四頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（ComplementFixation,CFT)

敏感性和特異性均較高，但該試驗(yàn)影響因素較多，現(xiàn)在已有被其它新方法取代的趨勢(shì)。目前十五頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)免疫標(biāo)記技術(shù)用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗體（或抗原）進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)。標(biāo)記物質(zhì)與抗體（或抗原）的化學(xué)連接未改變抗體（或抗原）的免疫學(xué)特性，同時(shí)標(biāo)記物的性質(zhì)依然存在，因而極大的提高了反應(yīng)的靈敏度，可以對(duì)微量物質(zhì)進(jìn)行定量、定性或定位檢測(cè)。免疫標(biāo)記技術(shù)主要有三種基本類(lèi)型：免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)和同位素標(biāo)記技術(shù)。目前十六頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)免疫熒光顯微技術(shù)

(ImmunofluorescenceTechnique)是用熒光素（常用的有異硫氰酸熒光素，F(xiàn)ITC)與抗體連接成熒光抗體，再與待測(cè)標(biāo)本的抗原反應(yīng)，，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光，借此對(duì)標(biāo)本中的抗原作鑒定和定位。包括直接熒光法、間接熒光法和補(bǔ)體法。目前十七頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)直接熒光法：將熒光素直接標(biāo)記抗體作標(biāo)本染色。該法的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，但其缺點(diǎn)是每檢測(cè)一種抗原必須制備相應(yīng)的熒光抗體。間接熒光法：用一抗與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色。該法的優(yōu)點(diǎn)是敏感性比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗可用于多種抗原的檢測(cè)，但非特異性熒光亦會(huì)增加。補(bǔ)體結(jié)合免疫熒光法：此法是在間接法的第一步抗原—抗體反應(yīng)時(shí)加入補(bǔ)體，使之與抗原——抗體復(fù)合物結(jié)合；再用熒光素標(biāo)記的抗C3抗體進(jìn)行示蹤。目前十八頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)間接免疫熒光法示意圖目前十九頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)免疫熒光顯微技術(shù)目前二十頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,FCM)

FCM是將免疫熒光技術(shù)應(yīng)用于流式細(xì)胞儀，對(duì)單個(gè)細(xì)胞的表面標(biāo)志（抗原或受體）進(jìn)行快速、精確的分析和自動(dòng)檢測(cè)，并將不同類(lèi)型的細(xì)胞分選收集。FCM還可對(duì)同一細(xì)胞的多種參數(shù)（如DNA、RNA、蛋白質(zhì)和細(xì)胞體積等）進(jìn)行多信息分析，為當(dāng)代生命科學(xué)研究領(lǐng)域中廣泛使用的一項(xiàng)新技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)目前二十一頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)流式細(xì)胞儀工作原理目前二十二頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)酶免疫測(cè)定

(EnzymeImmunoassay,EIA)是用酶（常用的有辣根過(guò)氧化物酶，HRP和堿性磷酸酶，AP)標(biāo)記的抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。EIA將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判定結(jié)果。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和酶免疫組化法，前者測(cè)定可溶性抗原或抗體，后者測(cè)定組織中或細(xì)胞表面的抗原。目前二十三頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA)是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法BAS-ELISA等。目前二十四頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)ELISA檢測(cè)抗體目前二十五頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)目前二十六頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)放射免疫測(cè)定法

(Radioimmunoassay,RIA)是用放射性核素標(biāo)記抗原進(jìn)行的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。它將放射性核素顯示的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合，使檢測(cè)的敏感性達(dá)pg水平。常用于標(biāo)記的放射性核素有I125和I131。常用于胰島素、生長(zhǎng)激素、藥物等微量物質(zhì)的測(cè)定。目前二十七頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)

Ag*AbAg

標(biāo)記抗原特異性抗體待測(cè)抗原(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗體復(fù)合物分離Ag*-Ab和游離Ag*從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀知含量測(cè)定Ag*-Ab和/或游離Ag*放射性放射免疫測(cè)定法(RIA)示意圖目前二十八頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)RIA法原理及標(biāo)準(zhǔn)曲線

7550301001101001000未標(biāo)記抗原濃度（ng/ml)結(jié)合/未結(jié)合的放射活性（%）目前二十九頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)免疫印跡法(Immunoblotting)是將凝膠電泳與固相免疫測(cè)定結(jié)合，先把電泳分區(qū)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體，再用酶免疫、放射免疫等技術(shù)測(cè)定。該法能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子量。常用于檢測(cè)多種病毒如HIV的抗體或抗原。目前三十頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)免疫印跡法示意圖目前三十一頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)第二節(jié)淋巴細(xì)胞的測(cè)定

檢測(cè)各群體淋巴細(xì)胞的數(shù)量與功能是觀察機(jī)體免疫狀態(tài)的重要手段。外周血是病人主要的檢測(cè)標(biāo)本，但僅代表再循環(huán)的淋巴細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物還可取胸腺、脾、淋巴結(jié)等作為標(biāo)本進(jìn)行檢查。目前三十二頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)(1)抗凝靜脈血(2)加等量NS(4)密度梯度離心血漿分離液RBCPBMCPMN(3)混勻后，緩慢加于分離液上目前三十三頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)一、淋巴細(xì)胞類(lèi)型和數(shù)目的測(cè)定1、花結(jié)試驗(yàn)：E花結(jié)試驗(yàn)可用于檢測(cè)T細(xì)胞數(shù)目。EA花結(jié)試驗(yàn)可用于檢測(cè)B細(xì)胞數(shù)目。2、免疫熒光法：常采用間接免疫熒光法。3、流式細(xì)胞術(shù)：借助流式細(xì)胞儀（FCM)。目前三十四頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)花結(jié)試驗(yàn)示意圖目前三十五頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)T細(xì)胞功能測(cè)定體外法：T細(xì)胞增殖試驗(yàn)形態(tài)學(xué)檢查

3H-TdR摻入法

MTT法體內(nèi)法：用生物抗原或化學(xué)抗原作皮內(nèi)試驗(yàn)。OT-PPD皮試SD-SK皮試

目前三十六頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細(xì)胞全血分層液離心過(guò)濾測(cè)量放射性淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)（3H-TdR摻入法）示意圖目前三十七頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)靶細(xì)胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細(xì)胞測(cè)量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時(shí)細(xì)胞毒試驗(yàn)（51Cr釋放法）示意圖目前三十八頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法

（Enzyme-LinkedImmunospot,ELISA)是在ELISA的基礎(chǔ)上建立的檢測(cè)抗體生成細(xì)胞及細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞的方法。目前三十九頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)CK抗體包被的反應(yīng)板

CK抗原包被的反應(yīng)板加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)記二抗加入底物檢測(cè)抗原特異性B細(xì)胞加入底物T細(xì)胞產(chǎn)生CK的檢測(cè)加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)的CK抗體目前四十頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（形態(tài)學(xué)示意圖）原理：人T細(xì)胞表面有PHA或ConA受體，T細(xì)胞在體外受PHA或ConA的刺激后能轉(zhuǎn)化為體積較大、代謝旺盛、且能進(jìn)行分裂的淋巴細(xì)胞，以此測(cè)定T細(xì)胞的功能。

PHA刺激48~72小時(shí)目前四十一頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)淋巴細(xì)胞增殖—3H-TdR摻入法原理：將單個(gè)核細(xì)胞中加入PHA共同培養(yǎng)，在終止培養(yǎng)前8~15小時(shí)加入氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR),經(jīng)β-液體閃爍儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞DNA的3H-TdR摻入量，推測(cè)淋巴細(xì)胞增殖的程度。目前四十二頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)MTT(四甲基偶氮唑鹽）法原理：在細(xì)胞培養(yǎng)終止前數(shù)小時(shí)加入MTT，活細(xì)胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶分解MTT產(chǎn)生藍(lán)色甲攢（Formazan)沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周?chē)?，形成甲攢的量與細(xì)胞增殖程度成正相關(guān)。目前四十三頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)細(xì)胞毒試驗(yàn)CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)：常采用51Cr釋放法NK細(xì)胞的細(xì)胞毒試驗(yàn)：常用的靶細(xì)胞為K562細(xì)胞目前四十四頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)（一）傳統(tǒng)疫苗1、滅活疫苗（死疫苗）：是選用免疫原性強(qiáng)的病原微生物，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法滅活后制成。常用的死疫苗有乙型腦炎疫苗、狂犬疫苗、霍亂疫苗等。2、減毒活疫苗：用減毒或無(wú)毒力的活病原微生物制成的稱(chēng)為活疫苗，又稱(chēng)為減毒活疫苗。常用的活疫苗有卡介苗、麻疹疫苗、風(fēng)疹疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗等。

目前四十五頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)2、合成肽疫苗：根據(jù)有效免疫原的氨基酸序列設(shè)計(jì)合成的免疫原性多肽交聯(lián)載體疫苗。3、結(jié)合疫苗將莢膜多糖的水解物連接于白喉類(lèi)毒素而制備的疫苗。目前已獲準(zhǔn)的結(jié)合疫苗有流感桿菌、腦膜炎萘瑟菌、肺炎鏈球菌疫苗等。４、重組抗原疫苗是利用DNA重組技術(shù)制備的只含保護(hù)性抗原的純化疫苗。不含活的病原體及病毒核酸。安全有效，目前獲準(zhǔn)生產(chǎn)的有乙肝疫苗、口蹄疫疫苗和萊姆病疫苗。目前四十六頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)５、重組載體疫苗：將編碼病原體有效免疫原的基因插入減毒的病毒載體基因中，接種后，隨疫苗株在體內(nèi)增殖，而表達(dá)相應(yīng)抗原。６、DNA疫苗：用編碼病原體有效免疫原基因的重組體直接接種，在體內(nèi)可表達(dá)保護(hù)性抗原，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫，此為DNA疫苗。７、轉(zhuǎn)基因植物疫苗：用轉(zhuǎn)基因方法將編碼有效免疫原的基因?qū)肟墒秤弥参锛?xì)胞的基因組中，免疫原即可在植物的可食用部分穩(wěn)定表達(dá)和積累，人和動(dòng)物通過(guò)攝食達(dá)到免疫接種的目的。常用植物有番茄、馬鈴薯、香蕉等。目前四十七頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)二、人工被動(dòng)免疫是給機(jī)體輸入抗體，使機(jī)體獲得特異性免疫力。輸入抗體后立即獲得免疫力，但維持時(shí)間短，一般為2-3周，臨床上主要用于治療或緊急預(yù)防。1、抗毒素：

抗毒素主要用于某些細(xì)菌外毒素所致疾病的治療和緊急預(yù)防。常用的有白喉抗毒素、破傷風(fēng)抗毒素等。應(yīng)用時(shí)要做皮試，且要早期、足量才能發(fā)揮應(yīng)有效果。目前四十八頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)2、人免疫球蛋白制劑

從正常人血漿或健康產(chǎn)婦胎盤(pán)血中提取制成。由于多數(shù)成人已隱性或顯性感染過(guò)麻疹、脊髓灰質(zhì)炎和甲型肝炎等傳染病，血清中含有一定量相應(yīng)的抗體。因此，這兩種丙種球蛋白可用于上述疾病的治療或緊急預(yù)防，有防止發(fā)病、減輕癥狀、縮短病程的效果。還可用于丙種球蛋白缺乏癥的治療。目前四十九頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)三、計(jì)劃免疫

是根據(jù)特定傳染病的疫情監(jiān)測(cè)和人群免疫狀況分析，按照規(guī)定的免疫程序有計(jì)劃地進(jìn)行人群預(yù)防接種，從而提高人君的免疫水平，達(dá)到控制以至最終消滅相應(yīng)傳染病的目的而采取的重要措施。目前五十頁(yè)\總數(shù)五十七頁(yè)\編于十六點(diǎn)

我國(guó)推薦的兒童免疫程序年齡疫苗名稱(chēng)出生時(shí)卡介苗、乙型肝炎疫苗11個(gè)月乙型肝炎疫苗22個(gè)月三價(jià)脊髓灰質(zhì)炎活疫苗13個(gè)月三價(jià)脊髓灰質(zhì)炎活疫苗2、百白破14個(gè)月三價(jià)脊髓灰質(zhì)炎活疫苗3、百白破25個(gè)月百白破36個(gè)月乙型肝炎疫苗38個(gè)月麻疹疫苗1.5－2歲百白破44歲