多功能酶標(biāo)儀基本操作規(guī)程

多功能酶標(biāo)儀基本操作規(guī)程一、可見(jiàn)與紫外光原始吸光值的直接測(cè)定方法1、首先打開(kāi)連接酶標(biāo)儀的電插板上的全部開(kāi)關(guān)。打開(kāi)酶標(biāo)儀主機(jī)背面電源線上端的開(kāi)關(guān)。2、再打開(kāi)電腦開(kāi)關(guān)。（注意，一定要先開(kāi)儀器，后開(kāi)電腦，以免儀器連接出現(xiàn)問(wèn)題。）3、在電腦主屏幕上選擇［Magellan6］。4、儀器自檢后，酶標(biāo)板托架自動(dòng)伸出（注意儀器前部不要放置物品，以免檔住托架的伸出）。將酶標(biāo)板按數(shù)字正確的方向（A1位于左上角）放在托架上。5、點(diǎn)擊儀器下部最右側(cè)的［moveplatein］圖標(biāo)，酶標(biāo)板將自動(dòng)進(jìn)入儀器中。（注意：千萬(wàn)不要用手將酶標(biāo)板推入儀器，造成儀器損壞）。6、在屏幕上選Startmeasurement。點(diǎn)擊綠色箭頭。7、在SelectaFile窗口左上角選ObtainRawDate然后點(diǎn)擊綠色箭頭。8、在plate欄中的platedefinition下拉條中，對(duì)板的類型進(jìn)行選擇。酶標(biāo)的吸光度測(cè)定，一般情況下選xxxxxxxFlatTransparent（x孑L，平底，透明板）。（注意測(cè)定紫外吸收時(shí)要使用可以透過(guò)紫外光的透明板）如果板要加蓋子，就要再選中Platewithcovero9、在Measurements欄內(nèi)雙擊Absorbance，出現(xiàn)Absorbance的對(duì)話框。10、在Absorbance的對(duì)話框中：⑴在Wavelength欄中Measurement項(xiàng)輸入測(cè)定波長(zhǎng)值；Reference項(xiàng)，在需要扣除背景波長(zhǎng)時(shí)選中并輸入背景波長(zhǎng)值。一般情況不選.⑵在Multiplereadperwell欄中對(duì)于吸光值的測(cè)定可不選⑶在Read欄中：Numberofflashes項(xiàng)一般選10；Settletime（使平靜時(shí)間）項(xiàng)對(duì)于96或384孔板一般選0;對(duì)于其他孔數(shù)的板可考慮輸入適當(dāng)?shù)闹担豢讛?shù)越少的板，Settletime設(shè)置時(shí)間要較長(zhǎng),以防止在測(cè)定過(guò)程中板移動(dòng)距離大，對(duì)液面平穩(wěn)的影響。⑷在Label欄中Name后輸入你為此塊板自定義的英文名；也可不設(shè)置。11、在Partofplate欄中，用鼠標(biāo)左鍵拉框，選擇要測(cè)定的樣品孔（使待測(cè)定的樣品孔變?yōu)辄S色），（注意：待測(cè)孔只可橫向或縱向連續(xù)選擇，不可以被間斷）。如果選擇錯(cuò)誤需要更改，不要做任何刪除，只要再直接重新選擇即可。點(diǎn)擊本欄中的Detail對(duì)所選的樣品孔進(jìn)行確認(rèn)后，點(diǎn)擊OK，（如果選孔有錯(cuò)誤，選擇Cancel返回上頁(yè)再重復(fù)以上操作。）12、點(diǎn)擊OK后，箭頭變綠，點(diǎn)擊綠色箭頭，在Measurement的workspace處輸入（日、月、年-自定義文件名wsp）再點(diǎn)擊Start，儀器開(kāi)始自動(dòng)測(cè)定。13、測(cè)定結(jié)束后，點(diǎn)擊File選擇print,直接打印測(cè)定參數(shù)與結(jié)果，或在最上方Edit選擇CopytoExcel，然后打開(kāi)下方出現(xiàn)的Excel表（顯示為板式數(shù)據(jù)）并打印結(jié)果。14、關(guān)機(jī)，退出當(dāng)前界面，點(diǎn)擊左下角ExitMegellan回到主屏幕。關(guān)電腦，關(guān)儀器電源和插板電源。二、熒光值的直接測(cè)定方法1、首先打開(kāi)連接酶標(biāo)儀的電插板上的全部開(kāi)關(guān)。打開(kāi)酶標(biāo)儀主機(jī)背面電源線上端的開(kāi)關(guān)。2、再打開(kāi)電腦開(kāi)關(guān)。（注意，一定要先開(kāi)儀器，后開(kāi)電腦，以免儀器連接出現(xiàn)問(wèn)題。）3、在電腦主屏幕上選擇［Magellan6］。4、儀器自檢后，酶標(biāo)板托架自動(dòng)伸出（注意儀器前部不要放置物品，以免檔住托架的伸出）。將酶標(biāo)板按數(shù)字正確的方向（A1位于左上角）放在托架上。5、點(diǎn)擊儀器下部最右側(cè)的［moveplatein］圖標(biāo)，酶標(biāo)板將自動(dòng)進(jìn)入儀器中。（注意：千萬(wàn)不要用手將酶標(biāo)板推入儀器，造成儀器損壞）。6、在屏幕上選Startmeasurement。點(diǎn)擊綠色箭頭。7、在SelectaFile窗口左上角選ObtainRawDate然后點(diǎn)擊綠色箭頭。8、在plate欄中的platedefinition下拉條中，對(duì)板的類型進(jìn)行選擇。熒光酶標(biāo)的測(cè)定，一般情況下選xxxxxxxFlatblack（x孔，平底，黑板。6孔板測(cè)定時(shí)沒(méi)有黑板可選,可選擇6孔,平底，透明板）。（注意在選擇底部測(cè)定時(shí)模式時(shí)要選擇底部透明的黑板）如果板要加蓋子，就要再選中Platewithcovero9、在Measurements欄內(nèi)雙擊FluorescenceIntensity，出現(xiàn)FluorescenceIntensity的對(duì)話框。10、在FluorescenceIntensity的對(duì)話框中：⑴在Wavelength欄中:Excitation項(xiàng)輸入激發(fā)波長(zhǎng)值；Emission項(xiàng)輸入發(fā)射波長(zhǎng)值⑵在Mode欄：根據(jù)被測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)進(jìn)行適當(dāng)選擇。Top為頂部測(cè)定，適合于透明均勻的液體的熒光測(cè)定Bottom為底部測(cè)定，適合于貼壁細(xì)胞類的熒光測(cè)定⑶在Integration欄：Logtime（滯后時(shí)間）除在做時(shí)間分辨熒光測(cè)定時(shí)需要選擇，一般熒光測(cè)定時(shí)不選。Integrationtime（整體測(cè)定時(shí)間）一般在20?40ps范圍內(nèi)選擇⑷在Multiplereadperwell欄：對(duì)于透明均勻的液體的熒光測(cè)定可不選。對(duì)于貼壁細(xì)胞類的熒光測(cè)定要選擇。選擇形式，參看欄目中的圖形。⑸在Read欄中：Numberofflashes項(xiàng)一般可選3~5次；Settletime（使平靜時(shí)間）項(xiàng)對(duì)于96或384孔板一般選0；對(duì)于其他孔數(shù)的板可考慮輸入適當(dāng)?shù)闹?；孔?shù)越少的板，Settletime設(shè)置時(shí)間要較長(zhǎng)；以防止在測(cè)定過(guò)程中板移動(dòng)距離大，對(duì)液面平穩(wěn)的影響。⑹在Gain（增益）欄：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求的不同進(jìn)行選擇Manualgain（人工增益）項(xiàng)：要做多塊板之間的數(shù)據(jù)比較時(shí)選擇該項(xiàng);固定一個(gè)合適的增益值，選擇范圍在1?225之間.Optimal（自動(dòng)最佳）項(xiàng):儀器根據(jù)實(shí)時(shí)測(cè)定時(shí)該板上的最強(qiáng)熒光值,自動(dòng)給出合適的增益.一般在作單板內(nèi)的數(shù)據(jù)比較時(shí)選擇該項(xiàng)Calculatedformwell項(xiàng):以一個(gè)孔內(nèi)的陽(yáng)性物熒光值為比較時(shí)，選擇該項(xiàng).在Label欄中Name后可輸入你為此塊板自定義的英文名；也可不設(shè)置。11、在Partofplate欄中，用鼠標(biāo)左鍵拉框，選擇要測(cè)定的樣品孔（使待測(cè)定的樣品孔變?yōu)辄S色），（注意：待測(cè)孔只可橫向或縱向連續(xù)選擇，不可以被間斷）。如果選擇錯(cuò)誤需要更改，不要做任何刪除，只要再直接重新選擇即可。點(diǎn)擊本欄中的Detail對(duì)所選的樣品孔進(jìn)行確認(rèn)后，點(diǎn)擊OK，（如果選孔有錯(cuò)誤，選擇Cancel返回上頁(yè)再重復(fù)以上操作。）12、點(diǎn)擊OK后，箭頭變綠，點(diǎn)擊綠色箭頭，在Measurement的workspace處輸入（日、月、年-自定義文件名wsp）再點(diǎn)擊Start，儀器開(kāi)始自動(dòng)測(cè)定。13、測(cè)定結(jié)束后，點(diǎn)擊File選擇print，直接打印測(cè)定參數(shù)與結(jié)果，或在最上方Edit選擇CopytoExcel，然后打開(kāi)下方出現(xiàn)的Excel表（顯示為板式數(shù)據(jù)）并打印結(jié)果。14、關(guān)機(jī)，退出當(dāng)前界面，點(diǎn)擊左下角處ExitMegellan退回到電腦主屏幕。15、關(guān)電腦，關(guān)儀器電源和電插板電源。三、可見(jiàn)、紫外、熒光測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線法1、開(kāi)機(jī)：首先打開(kāi)電插板上的全部開(kāi)關(guān)。打開(kāi)酶標(biāo)儀主機(jī)背面電源線上端的開(kāi)關(guān)。打開(kāi)電腦開(kāi)關(guān)。（注意，一定要先開(kāi)儀器，后開(kāi)電腦，以免儀器連接出現(xiàn)問(wèn)題。）2、在電腦主屏幕上選擇［Magellan6］。3、放酶標(biāo)板：儀器自檢后，酶標(biāo)板托架自動(dòng)伸出（注意儀器前部不要放置物品，以免檔住托架的伸出）。將酶標(biāo)板按數(shù)字正確的方向（A1位于左上角）放在托架上。點(diǎn)擊儀器下部最右側(cè)的［moveplatein］圖標(biāo)，酶標(biāo)板將自動(dòng)進(jìn)入儀器中。（注意：千萬(wàn)不要用手將酶標(biāo)板推入儀器，造成儀器損壞）。4、創(chuàng)建方法：4.1在屏幕上選。Create/editamethod點(diǎn)擊綠色箭頭，4.2選New然后點(diǎn)擊綠色箭頭。4.3選板型：在plate欄中的platedefinition下拉條中，可見(jiàn)、紫外吸光度的酶標(biāo)測(cè)定，一般情況下選xxxxxxxFlatTransparent（x孑L,平底，透明板）。（注意測(cè)定紫外吸收時(shí)要使用可以透過(guò)紫外光的透明板）如果板要加蓋子，還要選中Platewithcovero熒光的酶標(biāo)測(cè)定，一般情況下選xxxxxxxFlatblack（x孔，平底，黑板。6孔板測(cè)定時(shí)沒(méi)有黑板可選,可選擇6孔,平底，透明板）。（注意在選擇底部測(cè)定模式時(shí)要選擇底部透明的黑板）如果板要加蓋子，就要再選中Platewithcover。5、測(cè)定方法和參數(shù)的選擇：在Measurements欄內(nèi)⑴選擇可見(jiàn)、紫外吸光度的酶標(biāo)測(cè)定：雙擊Absorbance出現(xiàn)Absorbance的對(duì)話框。在Absorbance的對(duì)話框中：①在Wavelength欄中Measurement項(xiàng)輸入測(cè)定波長(zhǎng)值；Reference項(xiàng)，在需要扣除背景波長(zhǎng)時(shí)選中并輸入背景波長(zhǎng)值。一般情況不選.②在Multiplereadperwell欄中對(duì)于吸光值的測(cè)定可不選在Read欄中：Numberofflashes項(xiàng)一般選10；Settletime（使平靜時(shí)間）項(xiàng)對(duì)于96或384孔板一般選0；對(duì)于其他孔數(shù)的板可考慮輸入適當(dāng)?shù)闹担豢讛?shù)越少的板，Settletime設(shè)置時(shí)間要較長(zhǎng),以防止在測(cè)定過(guò)程中板移動(dòng)距離大，對(duì)液面平穩(wěn)的影響。在Label欄中Name聲輸入你為此塊板自定義的英文名；也可不設(shè)置。⑵選擇熒光的酶標(biāo)測(cè)定：雙擊FluorescenceIntensity，出現(xiàn)FluorescenceIntensity的對(duì)話框。在FluorescenceIntensity的對(duì)話框中：在Wavelength欄中:Excitation項(xiàng)輸入激發(fā)波長(zhǎng)值；Emission項(xiàng)輸入發(fā)射波長(zhǎng)值在Mode欄：根據(jù)被測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)進(jìn)行適當(dāng)選擇。Top為頂部測(cè)定，適合于透明均勻的液體的熒光測(cè)定Bottom為底部測(cè)定，適合于貼壁細(xì)胞類的熒光測(cè)定在Integration欄：Logtime（滯后時(shí)間）除在做時(shí)間分辨熒光測(cè)定時(shí)需要選擇，一般熒光測(cè)定時(shí)不選。Integrationtime（整體測(cè)定時(shí)間）一般在20?40ps范圍內(nèi)選擇在Multiplereadperwell欄：對(duì)于透明均勻的液體的熒光測(cè)定可不選。對(duì)于貼壁細(xì)胞類的熒光測(cè)定要選擇。選擇形式，參看欄目中的圖形。在Read欄中：Numberofflashes項(xiàng)一般可選3~5次；Settletime（使平靜時(shí)間）項(xiàng)對(duì)于96或384孔板一般選0；對(duì)于其他孔數(shù)的板可考慮輸入適當(dāng)?shù)闹担豢讛?shù)越少的板，Settletime設(shè)置時(shí)間要較長(zhǎng)；以防止在測(cè)定過(guò)程中板移動(dòng)距離大，對(duì)液面平穩(wěn)的影響。在Gain（增益）欄：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求的不同進(jìn)行選擇Manualgain（人工增益）項(xiàng)：要做多塊板之間的數(shù)據(jù)比較時(shí)選擇該項(xiàng);固定一個(gè)合適的增益值選擇范圍在1?225之間.Optimal（自動(dòng)最佳）項(xiàng):儀器根據(jù)實(shí)時(shí)測(cè)定時(shí)該板上的最強(qiáng)熒光值,自動(dòng)給出合適的增益.一般在作單板內(nèi)的數(shù)據(jù)比較時(shí)選擇該項(xiàng)Calculatedformwell項(xiàng):以一個(gè)孔內(nèi)的陽(yáng)性物熒光值為比較時(shí)，選擇該項(xiàng).在Label欄中Name后可輸入你為此塊板自定義的英文名；也可不設(shè)置。6、酶標(biāo)板的樣本布局①在WellAssign對(duì)話框中各個(gè)符號(hào)所表示的意義：SM（Sample）樣品BL（Blank）空白ST（Standard）標(biāo)準(zhǔn)PC（Positivecontrol）陽(yáng)性對(duì)照

NC(Negativecontrol)陰性對(duì)照LPC(LowPositivecontrol)弱陽(yáng)性對(duì)照HPC(HighPositivecontrol)強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照BF(Polarizationreferencebuffer)偏振參照緩沖液RF(Polarizationreference)偏振參照CL(Calibrator)校正因子②在Partofplate欄中，首先用鼠標(biāo)左鍵拉框，選擇要測(cè)定的不同物質(zhì)預(yù)備放置的孔（使待放置的孔變?yōu)辄S色），確認(rèn)Expgroup號(hào)（同一類型的實(shí)驗(yàn)或一個(gè)系列的標(biāo)曲為一組）和Fixnumbe-復(fù)孔數(shù)，然后單擊以上相應(yīng)的表達(dá)符號(hào)，鼠標(biāo)右鍵選Fillselection使該孔加上相應(yīng)的標(biāo)記。（例：某些孔準(zhǔn)備放置標(biāo)準(zhǔn)品，在選孔后，單擊WellAssign對(duì)話框中ST，標(biāo)右鍵選Fillselection這些孔就被加上了ST的標(biāo)記）孔中的符號(hào)表示：STx-y1../zST：標(biāo)準(zhǔn)X:第n個(gè)實(shí)驗(yàn)組（Expgroup號(hào)）Y:第n個(gè)實(shí)驗(yàn)組的第幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（ID-num）Z:重復(fù)數(shù)，1/z:重復(fù)數(shù)的第一個(gè)（Fixnumbe）準(zhǔn)孔濃度的輸入7、標(biāo)在platelayout欄中點(diǎn)擊Conc，隨后，在跳出的對(duì)話框中依次輸入相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度值和單位。STx-y1../z準(zhǔn)孔濃度的輸入8、標(biāo)準(zhǔn)曲線類型的確認(rèn)在concentration欄中點(diǎn)擊standardcurve，點(diǎn)擊analysistype，在該項(xiàng)下選擇曲線的類型Pointtopoint（點(diǎn)對(duì)點(diǎn)）（最少需要兩個(gè)鄰近基本點(diǎn)）LinearRegression（線性回歸）Non-linearregression（非線性回歸）CubicSpline（樣條函數(shù)）Polynomial（多項(xiàng)式）AkimaFourParameters（四參數(shù)）FourParameters-Marquardt（四參數(shù)Marquardt算法）FiveParameters-Marquardt（五參數(shù)Marquardt算法）Lo