動物細胞融合與單體克隆抗體

2.2.2

動物細胞融合與單克隆抗體目前一頁\總數(shù)三十三頁\編于四點本節(jié)要點一、動物細胞融合技術(shù)二、動物細胞融合基本原理三、誘導方式？與植物細胞雜交的不同的是？四、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較五、獲得抗體的傳統(tǒng)方法六、單克隆抗體的含義？如何制備？優(yōu)點？七、整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?目前二頁\總數(shù)三十三頁\編于四點一、動物細胞融合技術(shù)1.概念：

動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程。融合后形成的具有兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。目前三頁\總數(shù)三十三頁\編于四點二、動物細胞融合基本原理細胞膜的流動性三、誘導方式物理法：化學法：生物法：滅活的病毒電激、振動、離心聚乙二醇（PEG）如：仙臺病毒為什么要用滅活的病毒？仙臺病毒物理/化學方法喪失感染活性保留融合活性目前四頁\總數(shù)三十三頁\編于四點滅活的病毒滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞融合，形成雜種細胞目前五頁\總數(shù)三十三頁\編于四點四、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理細胞融合的方法誘導方法用途獲得雜種植株細胞膜的流動性細胞膜的流動性去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導細胞融合物理（離心、振蕩、電刺激）化學（聚乙二醇）物理、化學方法（同左）制備單克隆抗體滅活的病毒目前六頁\總數(shù)三十三頁\編于四點為什么“甲流”康復者或接種疫苗1月以上者的血漿會成為救治重癥“甲流”患者的妙藥？血漿中的抗體會與“甲流”病毒反應(yīng)，從而將病毒消滅。目前七頁\總數(shù)三十三頁\編于四點五、獲得抗體的傳統(tǒng)方法把某種抗原反復注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需的抗體。缺點：人們發(fā)現(xiàn)，B淋巴細胞盡管可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每一個B細胞只分泌一種特異性抗體。怎樣才能獲得大量的單一性抗體呢？產(chǎn)量低純度低特異性差目前八頁\總數(shù)三十三頁\編于四點抗原決定簇：抗原表面具有的某些特定的化學基團，能決定抗原特異性，是免疫細胞識別抗原的重要依據(jù)。各種抗原的決定簇數(shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。目前九頁\總數(shù)三十三頁\編于四點抗體與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合目前十頁\總數(shù)三十三頁\編于四點

抗體由何種細胞產(chǎn)生？主要分布在哪里?目前十一頁\總數(shù)三十三頁\編于四點怎樣才能獲得單一性抗體？大量克隆單一的B淋巴細胞其壽命僅有幾天，無法長期體外培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)骨髓瘤細胞無限增殖雜交瘤細胞產(chǎn)生抗體無限增殖細胞融合目前十二頁\總數(shù)三十三頁\編于四點G.Kohler

C.Milstein

英國科學家米爾斯坦和科勒于1975年設(shè)計和實踐了這個想法，并獲得成功。摘得1984年諾貝爾生理及醫(yī)學獎。目前十三頁\總數(shù)三十三頁\編于四點六、單克隆抗體的制備用抗原免疫小鼠骨髓瘤細胞的培養(yǎng)B淋巴細胞骨髓瘤細胞融合多種細胞目前十四頁\總數(shù)三十三頁\編于四點由于培養(yǎng)基中缺乏相應(yīng)的營養(yǎng)物，骨髓瘤細胞死亡B淋巴細胞培養(yǎng)幾天后死亡雜交瘤細胞置于選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)目前十五頁\總數(shù)三十三頁\編于四點細胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞誘導的手段？融合后細胞的類型？AB雜種細胞遺傳物質(zhì)有什么特點？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.2動物細胞融合過程原理？雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。目前十六頁\總數(shù)三十三頁\編于四點①細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。②人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。你想到篩選雜交瘤細胞的方案了么？

小資料：目前十七頁\總數(shù)三十三頁\編于四點在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細胞！加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞因為可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖。目前十八頁\總數(shù)三十三頁\編于四點通常采用有限稀釋克隆細胞的方法，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔細胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個，再由這些單細胞克隆生長，然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養(yǎng)。②再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞目前十九頁\總數(shù)三十三頁\編于四點陽性孔方法——抗原-抗體雜交法

在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。目前二十頁\總數(shù)三十三頁\編于四點多孔細胞培養(yǎng)板陽性克隆的篩選和克隆化培養(yǎng)用培養(yǎng)液稀釋目前二十一頁\總數(shù)三十三頁\編于四點注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)由單個雜交瘤細胞通過克隆，所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。單克隆抗體目前二十二頁\總數(shù)三十三頁\編于四點七、整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?第一次篩選：第二次篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出多種雜交瘤細胞篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。目前二十三頁\總數(shù)三十三頁\編于四點目前二十四頁\總數(shù)三十三頁\編于四點目前二十五頁\總數(shù)三十三頁\編于四點三、單克隆抗體的特點和應(yīng)用“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物診斷試劑用于治療疾病1、特點：特異性強，靈敏度高，產(chǎn)量高。2、應(yīng)用：用于運載藥物優(yōu)點：準確，高效，快速目前二十六頁\總數(shù)三十三頁\編于四點目前二十七頁\總數(shù)三十三頁\編于四點2.3單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。目前二十八頁\總數(shù)三十三頁\編于四點“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導向，藥物為彈頭治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”，準確殺傷癌變細胞。目前二十九頁\總數(shù)三十三頁\編于四點練習1、動物細胞融合技術(shù)最重要的用途是（）A.克服遠源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細胞B2、單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的（）

A.B淋巴細胞B.T淋巴細胞C.骨髓瘤細胞D.雜交瘤細胞D3、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（）①淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞A.②④B.①③⑤C.①②③④D.②③C目前三十頁\總數(shù)三十三頁\編于四點B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

4.下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實驗方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞。(1).該實驗方案的目的是：________________(2).該方案能達到預(yù)期效果嗎？為什么？(3).A是從小鼠的脾臟中取得__________該細胞能夠產(chǎn)生______。(4).圖中B為________________過程，常用_________________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。(5).C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括________培養(yǎng)和__________培養(yǎng)兩個階段。B淋巴細胞抗體細胞融合滅活的病毒雙親細胞分泌抗體無限增殖原代傳代目前三十一頁\總數(shù)三十三頁\編于四點BBBB瘤瘤瘤瘤