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文檔簡介

基本要求2.進行淀粉水解的測定。發(fā)展要求通過此實驗探討固定化酶的應(yīng)用價值。實驗原理固定化酶就是將水溶性的酶用物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。介質(zhì)本身是不溶于水。固定化酶的優(yōu)點管道化、連續(xù)化、自動化酶不溶解在催化反應(yīng)的溶液中，產(chǎn)物更易純化可反復(fù)使用可較長時間地貯存和使用吸附法物理吸附法酶蛋白分子吸附在惰性載體（不引起變性且能保持酶活力的載體）離子交換法利用蛋白質(zhì)分子上帶電荷基團（氨基、羧基）與離子交換劑形成離子鍵，再被交換結(jié)合至載體上優(yōu)點：適用的酶范圍廣，酶活性高缺點：酶與載體的結(jié)合力較弱，酶容易脫落偶聯(lián)法（載體偶聯(lián)法、共價偶聯(lián)法）酶蛋白上的一些基團（如羧基、巰基、咪唑基等）能在溫和條件下與載體共價結(jié)合，從而被固定化。結(jié)合部位必須不是酶的活性中心，也不是維持其空間結(jié)構(gòu)的必需基團。優(yōu)點：結(jié)合穩(wěn)定，適用范圍廣缺點：操作復(fù)雜，條件不夠溫和，酶活性較低交聯(lián)法交聯(lián)法是指通過雙功能試劑，將酶和酶聯(lián)結(jié)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的方法。結(jié)合部位也不是酶的活性中心，也不是維持其空間結(jié)構(gòu)的必需基團。優(yōu)缺點與偶聯(lián)法基本相同α-淀粉酶的固定化實驗載體：石英砂固定原理：吸附法（物理吸附法）淀粉：遇碘藍色（經(jīng)α-淀粉酶催化）糊精：遇碘紅色（經(jīng)β-淀粉酶催化）麥芽糖：遇碘不變色（棕黃色）（經(jīng)糖化淀粉酶、麥芽糖酶催化）葡萄糖Ps：碘液是KI-I2的溶液淀粉酶和石英砂混合后，攪拌30min。加入注射器后，用大于10倍體積的蒸餾水洗滌注射器以除去未吸附的游離淀粉酶。確定洗滌后收集到的液體中不再含有淀粉酶放盡剩余的蒸餾水后關(guān)

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