HIV抗體檢測解讀

HIV抗體檢測解讀第一頁，共32頁。HIV簡介HIV是HIV感染及艾滋?。ˋIDS）的病原體，主要通過性接觸和體液傳播，HIV主要侵犯和破壞輔助性T淋巴細胞（CD4+T淋巴細胞），使機體細胞免疫功能受損，最后并發(fā)各種嚴重的機會性感染和腫瘤。HIV可分為HIV-1和HIV-2兩個型，均為單鏈RNA病毒。前者分布廣泛，后者主要局限于非洲某些國家和地區(qū)。第二頁，共32頁。HIV簡介人體感染HIV后，血液中最先出現(xiàn)HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出現(xiàn)。幾周后出現(xiàn)IgM抗體并很快消失，此后IgG抗體出現(xiàn)并一直存在。HIV感染的實驗室診斷以抗體檢測為主，病毒及相關(guān)抗原的檢測為輔，后者要求高，僅限于某些研究實驗室中進行。第三頁，共32頁。HIV簡介HIV-抗體檢測分為篩查試驗和確認試驗兩種，篩查試驗為陽性的血清必須進一步確認，確認為陽性的方可報告HIV感染陽性。篩查試驗的要求是敏感性高，理論上要求達到100%（97%--99%），盡可能避免漏掉可能陽性的對象，相對來說，對特異性（99%）要求不是太高，允許有少量假陽性，這些假陽性可以通過重復(fù)檢測和確認試驗排除。第四頁，共32頁。HIV抗體檢測適用范圍適用于各級各類醫(yī)療機構(gòu)、疾病預(yù)防控制機構(gòu)、檢驗檢疫機構(gòu)、采供血機構(gòu)及衛(wèi)生保健機構(gòu)。可作為對HIV感染者/AIDS病人的診斷、報告和處理的實驗室依據(jù)。第五頁，共32頁。

HIV抗體檢測實驗室

應(yīng)符合《全國艾滋病檢測工作規(guī)范（1997年版）》中對檢測實驗室人員、建筑設(shè)施和設(shè)備等條件的要求。應(yīng)符合《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2004）對II級生物安全實驗室（BSL-2）的各項要求。實驗室的質(zhì)量保證和實驗室安全防護按《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》規(guī)定執(zhí)行。第六頁，共32頁。HIV抗體檢測的目的HIV抗體檢測可用于監(jiān)測、診斷、血液篩查。以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢而進行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群和一般人群。以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀況而進行的檢測，包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術(shù)前檢測、根據(jù)特殊需要進行的體檢等。以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV而進行的檢測，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。第七頁，共32頁。HIV抗體檢測的要點篩查試驗陽性不能出陽性報告。嚴格遵守實驗室標準操作程序（SOP）。嚴格按照試劑盒說明書操作。注意防止樣品間交叉污染。第八頁，共32頁。常規(guī)HIV抗體檢測的方法

HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩和復(fù)檢）和確認試驗。HIV抗體檢測篩查試驗篩查試劑：必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、批批檢合格、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。篩查方法：常用的篩查方法是酶聯(lián)免疫試驗（ELISA）。目前國內(nèi)外主要使用第三代（雙抗原夾心法）試劑，第四代ELISAHIV抗原抗體聯(lián)合測定試劑已在有些國家和地區(qū)用于血源篩查，同時檢測抗原抗體，可將檢出時間提前4~9.1d，有利于降低血源篩查的殘余危險度。第九頁，共32頁。其他簡便快速的HIV檢測方法明膠顆粒凝集試驗（PA）：PA是HIV血清抗體檢測的一種簡便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（一般為室溫）。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結(jié)果。HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA試劑（AFDHIV-1/2PA），已經(jīng)我國食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）注冊批準。斑點EIA或稱斑點ELISA（dot-EIA）：以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。反應(yīng)時間在10min以內(nèi)，使用抗原量少。第十頁，共32頁。其他簡便快速的HIV檢測方法斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗：與斑點EIA相似，也是以硝酸纖維膜為載體。區(qū)別在于不用酶標記抗體，而代之以紅色的膠體金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。試劑穩(wěn)定，可室溫長期保存。試驗時不需任何設(shè)備，迅速、簡便、特異性較好，敏感性約相當(dāng)于中度敏感的ELISA，適用于應(yīng)急檢測、門診急診個體檢測。目前已有在國內(nèi)被SFDA批準注冊的國外進口試劑和國內(nèi)產(chǎn)品。一般可在1030min內(nèi)判讀結(jié)果。第十一頁，共32頁。其他簡便快速的HIV檢測方法艾滋病唾液檢測卡：在硝酸纖維膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時檢測含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗體，原理為酶免疫間接法。主要檢測唾液中的HIVIgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可避免靜脈穿刺。第十二頁，共32頁。幾種常規(guī)HIV抗體檢測方法的比較第三代ELISA第四代ELISAPA膠體硒WB檢測的是總抗體，第四代ELISA可同時檢測P24抗原主要包括IgM、IgG抗體IgG抗體P24抗原消失、抗體產(chǎn)生時敏感性高感染早期P24抗原出現(xiàn)時敏感性高操作方便易行，敏感性特異性均可敏感性低于第三代、第四代ELISA和PAIgG抗體出現(xiàn)時特異性高第十三頁，共32頁。幾種常規(guī)HIV抗體檢測方法的比較在感染早期，IgM抗體出現(xiàn)時第三代、第四代ELISA、PA、膠體硒方法優(yōu)于WB，而在方法學(xué)上，硒標的敏感性要低于第三代、第四代ELISA和PA。因此，當(dāng)兩種篩查試驗均陽性或一陰一陽而WB陰性時，不能輕易報告陰性，要同WB不確定反應(yīng)一樣，至少隨訪6個月，以防漏檢。建議將WB和膠體硒法檢測的“窗口期”至少定為6個月。第十四頁，共32頁。

樣品初篩檢測

篩查試劑

陽性反應(yīng)

陰性反應(yīng)

重復(fù)檢測

原有試劑加另外一種篩查試劑

一陰一陽

均陰性反應(yīng)均陽性反應(yīng)送確認實驗室確認

報告陰性

HIV抗體篩查檢測流程

第十五頁，共32頁。HIV抗體初篩試驗實驗準備：將試劑和樣品放置在室溫(20℃)平衡,按實驗室SOP做好試劑準備。實驗操作：按試劑盒說明書以及質(zhì)控和安全防護要求進行篩查檢測。實驗結(jié)果：NC、PC符合試劑盒實驗成立的條件，Cutoff值=陰性對照均值+C，小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性。報告：對呈陰性反應(yīng)的樣品，可由實施檢測的實驗室出具HIV抗體陰性報告；對呈陽性反應(yīng)的樣品，須進行復(fù)檢，不能出陽性報告。第十六頁，共32頁。HIV抗體復(fù)檢試驗對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認（蛋白印跡試驗）。對HIV抗體篩查試驗，呈陰性反應(yīng)者可出具“HIV抗體陰性”報告；對初篩試驗呈陽性反應(yīng)者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復(fù)查”報告。初篩試驗呈陽性反應(yīng)樣品轉(zhuǎn)送時需填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單”。對篩查陰性和陽性者，均需做好檢測后咨詢。第十七頁，共32頁。HIV抗體確認試驗結(jié)果報告HIV抗體陰性：無HIV抗體特異帶出現(xiàn)。排除因“窗口期”而出現(xiàn)的假陰性結(jié)果，建議高危行為后3個月時再做抗體檢測。也可進行HIV-1P24抗原或HIV核酸檢測，作為輔助診斷。HIV抗體不確定（±）：出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽性，在備注中應(yīng)注明“3個月后復(fù)檢”。隨訪復(fù)檢：每3個月隨訪復(fù)檢1次，連續(xù)2次，共6個月。如果檢測時暴露時間已超過3個月，則在3個月后隨訪1次即可。必要時可做HIV-1P24抗原或HIV核酸測定，但檢測結(jié)果只能作為輔助診斷依據(jù)，確認報告要依據(jù)血清學(xué)隨訪結(jié)果。第十八頁，共32頁。HIV陽性結(jié)果的判定HIV-1抗體陽性（+）：至少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現(xiàn),或至少1條env帶和p24帶同時出現(xiàn)。HIV-2抗體血清學(xué)陽性（+）：同時符合試劑盒提供的陽性判定標準和WHO陽性判定標準，即出現(xiàn)至少2條env帶(gp36和gp140/gp105)。第十九頁，共32頁。WB確認試驗中HIV抗體特異帶HIV-1抗體特異帶：env帶:gp160/gp120、gp41；gag帶:p55、p24、p17(或p18)；pol帶:p66(或p65)、p51、p31。HIV-2抗體特異帶：env帶:gp140/gp105、gp36（也可為gp125/gp80、gp36）；gag帶:p56、p26、p16；pol帶:p68、p53、p34。第二十頁，共32頁。HIV抗體檢測的替代策略

第二十一頁，共32頁。

送檢樣品

用兩種不同原理或不同廠家的試劑復(fù)測（其中包括進口第三代ELISA試劑

進口第三代ELISA試劑復(fù)測S/CO比值≥6.0

進口第三代ELISA試劑復(fù)測S/CO比值1.0－5.9

確認試驗

判定陽性，上報疫情

兩種均陽性

兩種均陰性

一陰一陽

陽性反應(yīng)

陰性反應(yīng)

選用篩查試劑

陽性

陰性不確定，隨訪

判定陰性替代策略Ⅰ（HIV感染疫情報告檢測策略）檢測流程

第二十二頁，共32頁。替代策略Ⅱ（高危人群VCT檢測策略）檢測流程第二十三頁，共32頁。替代策略Ⅲ（一般人群VCT策略）的檢測及結(jié)果報告流程圖第二十四頁，共32頁。HIV抗體檢測情況季報流程

艾滋病篩查中心實驗室艾滋病確認中心實驗室省衛(wèi)生行政部門同級衛(wèi)生行政部門未設(shè)置艾滋病篩查中心實驗室的地區(qū)艾滋病篩查實驗室和艾滋病檢測點

每季首月5日前報告上季檢測情況

每季首月10日前報告上季檢測情況

每季首月5日前報告上季檢測情況

艾滋病確認實驗室每季首月15日前報告上季檢測情況每季首月10日前報告上季檢測情況

中國CDC性艾中心艾滋病參比實驗室

第二十五頁，共32頁。HIV核酸定性檢測

規(guī)定了核酸檢測、核酸序列測定的實驗室條件、檢測方法及結(jié)果判定標準

結(jié)果報告：HIV核酸檢測陰性:只可報告本次實驗結(jié)果陰性。HIV核酸檢測陽性:可作為診斷HIV感染的輔助指標，不單獨用于HIV感染的診斷。嚴格的實驗室管理制度（分區(qū)、儀器和材料的專用、單向流向、廢棄物處理）

第二十六頁，共32頁。HIVRNA定量測定（病毒載量測定）

實驗室條件

實驗室功能分區(qū)（試劑準備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)）人員(具有艾滋病實驗室上崗資格并接受省級以上艾滋病實驗室安全及實驗操作技術(shù)培訓(xùn))設(shè)施和設(shè)備（區(qū)域性專用）方法常用的HIVRNA定量測定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗（RT-PCR）、核酸序列擴增試驗（NASBA）、分支DNA雜交試驗（bDNA）。

第二十七頁，共32頁。不同病毒載量檢測方法的比較第二十八頁，共32頁。HIV核酸定量檢測的意義輔助診斷：當(dāng)RNA測定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽性結(jié)果時（>3，000c/ml），感染發(fā)生的可能性非常大。應(yīng)綜合其它檢測數(shù)據(jù)和樣品背景情況進行綜合判斷。

早期診斷：HIV感染孕婦所生嬰兒、↓殘余危險度

病程監(jiān)控：確定疾病發(fā)展的階段，以確定相應(yīng)的治療方案。

指導(dǎo)治療方案及療效判定：通常在治療前后病毒水平降低0.5log以上才被認為臨床有效。

預(yù)測疾病進程

第二十九頁，共32頁。適用范圍：★HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷；★HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷；★第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性反應(yīng)，但HIV-1抗體確認陰性者的輔助診斷；★監(jiān)測病程進展和抗病毒治療效果。檢測方法：通常是采用EL