維生素B片含量測的方法驗證專家講座

試驗原理維生素B1又稱鹽酸硫胺（thiaminehydrochloride），化學名稱為氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羥基乙基噻唑鎓鹽酸鹽

維生素B片含量測的方法驗證專家講座第1頁性質溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反應：紫外吸收特征：Amax=246nm與生物堿沉淀試劑反應氯化物特征：特征性判別含量測定氯化物檢驗維生素B片含量測的方法驗證專家講座第2頁原理特征性判別——硫色素反應

維生素B1在堿液中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，色素轉溶于正丁醇(或異丁醇、異戊醇)中，顯現(xiàn)于酸中消失藍色熒光。（見劉文英主編《藥品分析》第六版，P258）含量測定

維生素B1有紫外吸收，Amax=246nm，維生素B片含量測的方法驗證專家講座第3頁試驗方法判別反應

取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml使其溶解，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2min，放置使成兩液層，上層醇液即顯強烈藍色熒光，加酸使成酸性熒光即消失，再加堿使成堿性，則熒光復現(xiàn)。維生素B片含量測的方法驗證專家講座第4頁含量測定1.精密稱取片粉40.98mg(相當于維生素B125mg，標示量為每1g藥品中含有0.164g維生素B1)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）約70ml，搖勻15分鐘使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→干燥濾紙過濾→精密量取續(xù)濾液5.0ml，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（9→1000）定容至刻度，搖勻→得到供示品溶液。維生素B片含量測的方法驗證專家講座第5頁含量測定2.精密稱取維生素B1對照品25mg，置100ml量瓶中，鹽酸溶液（9→1000）定容至刻度，搖勻→得到對照品溶液。3.將2份溶液用紫外分光光度計在246nm處罰別測定吸光度，計算即得。維生素B片含量測的方法驗證專家講座第6頁試驗內容與要求判別試驗吸收波長選擇精密度試驗：用同一份樣品溶液測定6次，計算RSD%重復性試驗：引用其它組同學數(shù)據(jù)（稱樣量，吸光度）計算標示量%，計算RSD%穩(wěn)定性試驗：考查樣品溶液30min內穩(wěn)定性，計算RSD%加樣回收率試驗：依據(jù)重復性試驗結果，設計加樣回收率試驗含量測定：依據(jù)測定結果計算含量，標示量%。怎樣引用？維生素B片含量測的方法驗證專家講座第7頁

線性關系和范圍分析方法驗證1

精密度試驗2

重現(xiàn)性試驗3

加樣回收試驗4

穩(wěn)定性試驗5維生素B片含量測的方法驗證專家講座第8頁線性與范圍精密稱取片粉40.98mg(相當于維生素B125mg)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）少許，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→分別取上述溶液3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）至刻度，搖勻→將其置于紫外分光光度計中在246nm處測量→并用C做A回歸曲線。維生素B片含量測的方法驗證專家講座第9頁線性關系序號12345濃度（mg/ml）測定值維生素B片含量測的方法驗證專家講座第10頁穩(wěn)定性試驗精密稱取片粉40.98mg(相當于維生素B125mg)，置100ml量瓶中→加鹽酸溶液（9→1000）少許，使維生素B1溶解，并定容至刻度，搖勻→將其置于紫外分光光度計中在246nm處測量→在0、15、30、45、60min時間點分別測定樣品A246→在0、1、2、4、8、12h分別測定樣品峰面積.RSD<2.0%，則說明樣品溶液在多少時間內穩(wěn)定；RSD>2.0%，則需要重新選取時間點進行計算，直到RSD<2.0%，不然要盡快測定維生素B片含量測的方法驗證專家講座第11頁精密度試驗目標檢測儀器、試劑、操作人員、試驗條件等可信程度要求用對照品按樣品溶液制備方法制備對照品溶液，同濃度最少平行操作6份，濃度與信號值要在線性范圍內RSD<2.0%……儀器分析維生素B片含量測的方法驗證專家講座第12頁

同批、同法序號時間(min)信號值平均信號值RSD（%）RSD（%）1234567穩(wěn)定性試驗維生素B片含量測的方法驗證專家講座第13頁重現(xiàn)性試驗目標考查樣品溶液制備方法可靠程度要求同批樣品按相同方法制備樣品溶液，最少6份,濃度與信號值均要在線性范圍內RSD<2.0%

……儀器分析維生素B片含量測的方法驗證專家講座第14頁重現(xiàn)性試驗(示例)試驗序號稱樣量（g）測定值（mg）含量（mg/g）平均含量（mg/g）RSD（%）10.166622.04132.29134.530.3%<2.0%20.166724.82148.8930.166921.90131.2240.174223.54135.1350.166720.86125.136………維生素B片含量測的方法驗證專家講座第15頁精密度試驗（示例）試驗序號信號值平均值RSD10.5120.5100.2%(<2.0%)20.50830.51140.50950.51060.509維生素B片含量測的方法驗證專家講座第16頁加樣回收率試驗目標考查準確度，即用該方法測定結果與真實值或參考值靠近程度要求設計高、中、低三個濃度，每個濃度各分別制備三份供試品溶液進行測試，計算回收率RSD<2.0%維生素B片含量測的方法驗證專家講座第17頁加樣回收試驗序號稱樣量（g）待測組分含量（mg）對照品加入量（mg）測得量（mg）回收率（%）平均加樣回收率（%）RSD（%）10.1665.2820.250015.027.2100.130.251240.250953.0450.250015.029.898.660.250070.250442.8480.250015.033.1100.090.2510取含量測定時二分之一稱樣量，0.5g/298~102