肝功能檢驗(yàn)講訴

肝功能檢驗(yàn)講訴第1頁(yè)/共68頁(yè)第十三章肝功能檢驗(yàn)DepartmentofClinical＆LaboratoryBiochemistry

第2頁(yè)/共68頁(yè)本章內(nèi)容概要：本章教學(xué)要求：

掌握:黃疸的發(fā)生機(jī)理、類(lèi)型及實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷要點(diǎn)；肝功能實(shí)驗(yàn)生化檢查指標(biāo)的種類(lèi)和重點(diǎn)項(xiàng)目的測(cè)定方法及評(píng)價(jià)。熟悉:肝臟的生物化學(xué)功能，膽紅素代謝；各測(cè)定項(xiàng)目的臨床意義。

了解：肝臟的基本機(jī)構(gòu)；肝功能實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目選擇的原則。

第3頁(yè)/共68頁(yè)第一節(jié)概述肝臟結(jié)構(gòu)肝臟的生化功能肝臟疾病的生化改變第4頁(yè)/共68頁(yè)一、肝臟結(jié)構(gòu)（一）解剖學(xué)特點(diǎn)雙重血液供應(yīng)腹主動(dòng)脈的分技肝動(dòng)脈氧門(mén)靜脈

營(yíng)養(yǎng)雙重輸出管道肝靜脈代謝降解物

下腔靜脈膽道系統(tǒng)脂溶性物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物體外第5頁(yè)/共68頁(yè)（二）肝臟的顯微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)1、組織結(jié)構(gòu)2、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)（三）細(xì)胞的再生第6頁(yè)/共68頁(yè)二、肝臟的生物化學(xué)功能排泄功能物質(zhì)代謝功能生物轉(zhuǎn)化重要生化功能第7頁(yè)/共68頁(yè)（一）排泄功能主要排泄對(duì)象：膽汁酸、膽紅素、氨1、膽汁酸代謝膽汁功能膽汁的來(lái)源：肝膽汁膽囊膽汁十二指腸膽汁的成分：水/膽汁酸（鹽）、卵磷脂、蛋白質(zhì)、脂肪酸和膽固醇第8頁(yè)/共68頁(yè)（2）膽汁酸生成及種類(lèi)：初級(jí)膽汁酸（肝細(xì)胞）次級(jí)膽汁酸（腸道）初級(jí)游離膽汁酸初級(jí)結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/?；撬幔┐渭?jí)游離膽汁酸次級(jí)結(jié)合膽汁酸（甘氨酸/牛磺酸）第9頁(yè)/共68頁(yè)（3）膽汁酸肝腸循環(huán)：（4）膽汁酸的功能：①促進(jìn)脂類(lèi)消化②促進(jìn)脂類(lèi)吸收③抑制膽固醇從膽汁中析出沉淀游離型膽汁酸結(jié)合型膽汁酸第10頁(yè)/共68頁(yè)2、膽紅素代謝膽色素

尿膽素原

糞膽素原尿膽素糞膽素膽綠素膽紅素膽素原第12頁(yè)/共68頁(yè)3、血氨代謝藥物及體內(nèi)含氮物質(zhì)（如嘌呤、嘧啶等）來(lái)源去路相對(duì)平衡第13頁(yè)/共68頁(yè)部位——肝臟細(xì)胞鳥(niǎo)氨酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延胡索酸鳥(niǎo)氨酸精氨酸H2O尿素天門(mén)冬氨酸NH3CO2氨甲酰磷酸+H2O尿素循環(huán)第14頁(yè)/共68頁(yè)（二）物質(zhì)代謝功能1、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝(1)在蛋白質(zhì)代謝中的作用(2)在氨基酸代謝中的作用(3)在糖代謝中的作用(4)在脂代謝中的作用第15頁(yè)/共68頁(yè)2、激素及維生素代謝激素的滅活多種維生素的儲(chǔ)存與轉(zhuǎn)化

第16頁(yè)/共68頁(yè)（三）肝臟的生物轉(zhuǎn)化定義：

轉(zhuǎn)化對(duì)象：藥物、毒物、致癌物轉(zhuǎn)化過(guò)程：氧化、還原、水解、結(jié)合生理意義：第17頁(yè)/共68頁(yè)三、肝臟疾病的生化改變（一）膽紅素代謝障礙（黃疸）定義:黃疸分類(lèi):

黃疸?

阻塞性黃疸

溶血性黃疸肝細(xì)胞性黃疸高膽紅素血癥?第19頁(yè)/共68頁(yè)（二）膽汁酸代謝障礙1、膽汁酸合成障礙2、膽汁酸向腸道排出障礙3．膽汁酸腸肝循環(huán)紊亂4．膽汁瘀積病變時(shí)膽汁酸代謝紊亂

第20頁(yè)/共68頁(yè)（三）血漿酶異常1．肝臟合成酶類(lèi):膽堿脂酶、凝血因子、銅藍(lán)蛋白；2.

肝細(xì)胞內(nèi)酶:

ALT、AST

3．肝臟阻塞性疾病酶活性改變：ALP、GGT4．肝硬化疾病酶活性改變：?jiǎn)伟费趸福∕AO）

（四）血漿蛋白異常第21頁(yè)/共68頁(yè)第二節(jié)肝功能試驗(yàn)血清（漿）蛋白測(cè)定血清酶測(cè)定血清膽紅素測(cè)定血清膽汁酸測(cè)定血氨測(cè)定第22頁(yè)/共68頁(yè)一、血清（漿）蛋白測(cè)定（一）總蛋白、白蛋白、及白蛋白/球蛋白（A/G）比值測(cè)定

1．總蛋白測(cè)定

化學(xué)法(雙縮脲法)、物理法、染料結(jié)合法、電泳法染料結(jié)合法(BCG、BCP）、沉淀法2.白蛋白測(cè)定

3．A/G比值

第23頁(yè)/共68頁(yè)【參考范圍】總蛋白60～80g/L白蛋白35～55g/L球蛋白：15～32g/LA/G比值:1.5～2.0/1【臨床意義】

血中白蛋白（總蛋白濃度）減少:

見(jiàn)于嚴(yán)重肝病(??）、腎?。??）

A/G比值減少與A/G比值倒置：表示肝功能損害嚴(yán)重。第24頁(yè)/共68頁(yè)（二）纖維蛋白原測(cè)定

（凝血因子Ⅰ）

測(cè)定方法：分為三大類(lèi)①根據(jù)纖維蛋白原的生物學(xué)特性測(cè)定方法②根據(jù)纖維蛋白原理化性質(zhì)而建立的測(cè)定方法。③根據(jù)纖維蛋白原免疫學(xué)特點(diǎn)而建立的測(cè)定方法?！緟⒖挤秶?/p>

2.22～4.22g/L(熱沉淀比濁法)【臨床意義】(1)纖維蛋白原增加：①感染；②無(wú)菌炎癥；③其它。(2)纖維蛋白原減少:①?lài)?yán)重的肝臟疾??；②其它疾病引起纖維蛋白原減少的疾病。第25頁(yè)/共68頁(yè)（三）甲胎蛋白（α1-fetoprotein，AFP）測(cè)定

測(cè)定方法：【參考范圍】成人10～30g/L、>400g/L作為肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)【臨床意義】

酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫分析法、斑點(diǎn)免疫結(jié)合法、火箭電泳放射自顯影法、酶聯(lián)火箭電泳法等

(1)原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的診斷標(biāo)：400g/L(400ng/ml)；(2)活動(dòng)性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的診斷．第26頁(yè)/共68頁(yè)（四）其它【臨床意義】

肝豆?fàn)詈俗冃裕╓ilson?。┖瓦z傳性色素沉積癥．1.銅藍(lán)蛋白測(cè)定

【參考范圍】52.9～167.7IU/L【臨床意義】

遺傳性血色素沉積癥鐵沉積2．轉(zhuǎn)鐵蛋白【原理】

雙聯(lián)吡啶法【原理】

銅藍(lán)蛋白具有氧化酶活性

【參考范圍】

TIBC男50～77μmol/L女54～

77μmol/L,轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度為33.0%～35.0%

第27頁(yè)/共68頁(yè)

二、血清酶測(cè)定

（1）ALT的測(cè)定（賴(lài)氏法）原理：丙氨酸+α-酮戊二酸

谷氨酸+丙酮酸

37℃、pH7.4ALT丙酮酸+2，4-二硝基苯肼2，4-二硝基苯腙

第28頁(yè)/共68頁(yè)（2）方法評(píng)價(jià)①賴(lài)氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門(mén)分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；②NaOH的濃度對(duì)顯色有影響；③該法的重復(fù)性差。第29頁(yè)/共68頁(yè)

卡門(mén)氏單位：1.0ml血清在25℃，340nm，反應(yīng)體積3.0ml,光徑1.0cm時(shí)每分鐘測(cè)定吸光度下降0.001，即消耗4.8210-4μmolNADH為一個(gè)卡門(mén)氏單位第30頁(yè)/共68頁(yè)【參考范圍】5～25卡門(mén)氏單位

【臨床意義】(2)慢性活動(dòng)性肝炎或脂肪肝：(1)肝細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo):ALT輕度增高(100～200IU),或?qū)僬７秶?第31頁(yè)/共68頁(yè)ALT測(cè)定連續(xù)監(jiān)測(cè)法（速率法）原理：L-丙氨酸+α-酮戊二酸

L-谷氨酸+丙酮酸丙酮酸+NAD+

LDH乳酸+NADHALT第32頁(yè)/共68頁(yè)（２）方法評(píng)價(jià)：①存在著兩個(gè)副反應(yīng)，會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏高；A、血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。B、血清中谷氨酸脫氫酶(GLDH)增高時(shí)，在有氨存在條件下，亦能消耗NADH。

②雙試劑法，因溫育期長(zhǎng)，能有效地消除干擾反應(yīng)，測(cè)定準(zhǔn)確性高，是ALT測(cè)定的首選方法；③血清不宜反復(fù)冰凍保存，以免影響酶活性；避免使用溶血標(biāo)本。

第33頁(yè)/共68頁(yè)3.賴(lài)氏法測(cè)定AST

（１）原理與方法評(píng)價(jià)（類(lèi)似ALT測(cè)定）

【參考范圍】

8～28卡門(mén)氏單位

【臨床意義】增高見(jiàn)于：心肌梗死、肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎和各種肝病病人第34頁(yè)/共68頁(yè)4．連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定AST

（１）原理：

L-門(mén)冬氨酸+α-酮戊二酸草酰乙酸+L-谷氨酸

草酰乙酸+NADH

L-蘋(píng)果酸+NAD+

雙試劑法

:同ALT測(cè)定MDHAST第35頁(yè)/共68頁(yè)（２）方法評(píng)價(jià)

誤差來(lái)源內(nèi)源性干擾:主要來(lái)自血清中高濃度丙酮酸和L-谷氨酸脫氫酶(GLDH)。外源性:干擾來(lái)自試劑中污染的GLDH和AST。

【參考范圍】

5～40IU/L(連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定)

【臨床意義】

見(jiàn)賴(lài)氏法第36頁(yè)/共68頁(yè)(二)ALP測(cè)定化學(xué)法連續(xù)監(jiān)測(cè)法：鮑氏法金氏法皮氏法第37頁(yè)/共68頁(yè)１、金氏法測(cè)定ALP

（１）原理：

磷酸苯二鈉酚+磷酸酚+4－AA-P紅色醌

ALPOH-K3Fe(CN)6第38頁(yè)/共68頁(yè)(2)方法評(píng)價(jià)：磷酸苯二鈉比色法與更早的β-甘油磷酸鈉法相比具有較大的優(yōu)點(diǎn)，如水解速度快，保溫時(shí)間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、不需去蛋白、操作簡(jiǎn)單、快速。但與磷酸對(duì)硝基酚連續(xù)監(jiān)測(cè)法相比，準(zhǔn)確度、精密度較低；操作比較繁瑣,，靈敏度低。第39頁(yè)/共68頁(yè)【參考范圍成人：3～13單位,兒童：5～28單位

ALP金氏單位定義是100ml血清，37℃與底物保溫15分鐘，產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)金氏單位。ALP主要用于診斷肝膽和骨骼疾病

【臨床意義】

第40頁(yè)/共68頁(yè)2.連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定ALP（１）原理：

4-NPP+AMP對(duì)硝基酚(黃色）

（１）方法評(píng)價(jià)：

線性范圍可達(dá)500U/L，批內(nèi)CV為2.06%～2.36%，批間CV為2.74%。ALPOH-第41頁(yè)/共68頁(yè)【參考范圍】

男性：1～12歲<500U/L,女性：1～12歲<500U/L

12～15歲<750U/L，

>15歲40～150U/L，>25歲40～150U/L?！九R床意義】

見(jiàn)金氏法第42頁(yè)/共68頁(yè)(三)GGT測(cè)定法化學(xué)法（重氮反應(yīng)比色法）和連續(xù)監(jiān)測(cè)法。

1.重氮反應(yīng)比色法測(cè)定GGT原理：

【參考范圍】男性3～17U/L；女性2～13U/L

(2)方法評(píng)價(jià)：重氮比色法活性單位：100ml血清在37℃下反應(yīng)1hr,生成0.5μmol的α-苯胺為1個(gè)GGT活性單位。第43頁(yè)/共68頁(yè)(1)原理：

(2)方法評(píng)價(jià)：【參考范圍】男性：11～50U/L；(以γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物)女性：7～32U/L男性：≤40U/L；女性：≤30U/L(以γ-谷氨酰-4-硝基苯胺為底物)第44頁(yè)/共68頁(yè)(四)MAO測(cè)定

原理

MAO主要作用于CH2-NH2基團(tuán)，在氧參與下，氧化脫氨生成相應(yīng)的卞醛、氨及過(guò)氧化氫。以芐氨偶氮-β-萘酚為底物,在O2和H20參與下，MAO催化生成芐醛偶氮-β-萘酚、氨及過(guò)氧化氫，用環(huán)己烷抽提后進(jìn)行比色測(cè)定。第45頁(yè)/共68頁(yè)(2)方法評(píng)價(jià)【單位定義】：

1ml血清與底物在37℃孵育60分鐘，催化單胺氧化產(chǎn)生1nmol芐醛偶氮-β-萘酚為1個(gè)MAO單位。【參考范圍】12～40U/ml【臨床意義】：肝硬化時(shí)，肝纖維化現(xiàn)象十分活躍，

MAO活性明顯升高。

第46頁(yè)/共68頁(yè)三、血清膽紅素測(cè)定重氮鹽法膽紅素氧化酶(bilirubinoxidase,BOD)法高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)、導(dǎo)數(shù)分光光度法直接分光光度計(jì)法測(cè)定方法第47頁(yè)/共68頁(yè)1．重氮鹽改良J-G法(1)原理:

結(jié)合膽紅素+重氮鹽偶氮膽紅素

游離膽紅素+重氮鹽偶氮膽紅素偶氮膽紅素+堿性酒石酸鉀鈉藍(lán)色溶液，

加速劑第48頁(yè)/共68頁(yè)(2)方法評(píng)價(jià)1、推薦的常規(guī)方法2、線性范圍較寬3、較好的準(zhǔn)確性和精確性，高濃度時(shí)準(zhǔn)確性和精確性降低。因此，建議濃度過(guò)高時(shí)減少血樣用量測(cè)定。

第49頁(yè)/共68頁(yè)【臨床意義】

【參考范圍】

黃疸的鑒別診斷

總膽紅素:5.1～19.0μmol/L

直接膽紅素:1.71～6.8μmol/L第50頁(yè)/共68頁(yè)膽紅素BOD測(cè)定法原理：

膽紅素膽綠素BODpH8.0測(cè)總膽紅素pH4.5直接膽紅素第51頁(yè)/共68頁(yè)【參考范圍】血清總膽紅素：10.26±4.10μmol/L血清結(jié)合膽紅素：2.57±2.56μmol/L【臨床意義】見(jiàn)重氮比色法第52頁(yè)/共68頁(yè)四、血清膽汁酸測(cè)定高效液相色譜法放射免疫分析法酶免疫分析法比色分析測(cè)定法

測(cè)定方法第53頁(yè)/共68頁(yè)(1)酶比色法測(cè)定原理

3α-HSDNADH+NBT甲jie（藍(lán)色化合物)3-氧-5β類(lèi)固醇+NAD+3-氧-5β類(lèi)固醇+NADH黃遞酶△4-DH酶比色法

膽汁酸+NAD+3-氧-5β類(lèi)固醇+NADH

第54頁(yè)/共68頁(yè)酶循環(huán)法測(cè)定原理為：NAD+Thio-NADThio-NADH膽汁酸3-氧代膽汁酸NADH3α-HSD第55頁(yè)/共68頁(yè)(2)酶比色測(cè)定法評(píng)價(jià)：

優(yōu)點(diǎn):

快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠和適用

缺點(diǎn):試劑價(jià)貴、不易保存。對(duì)酶量的要求嚴(yán)格，易產(chǎn)生誤差。此外，標(biāo)準(zhǔn)品的制備非常重要。常采用甘氨膽酸溶入小牛血清中制成凍干品。

第56頁(yè)/共68頁(yè)【參考范圍】

1～7μmol/L

(成人空腹)【臨床意義】

1、

任何引起肝細(xì)胞損傷的病理過(guò)程都可能引起血中膽汁酸升高.2、各種類(lèi)型的肝病、肝硬化、脂肪肝，及急慢性膽道阻塞。

3、空腹膽汁酸測(cè)定:敏感、特異性強(qiáng);

最敏感的肝功能試驗(yàn)之一。特別適用于可疑有肝病但其它生化試驗(yàn)正?；蜉p度異常的病人的診斷。第57頁(yè)/共68頁(yè)五、血氨測(cè)定為一步法，也叫直接測(cè)定即不需從全血中分離出氨即可直接測(cè)定兩步法，即先從全血中分離出氨,而后再進(jìn)行測(cè)定；微量擴(kuò)散法、離子交換法酶法和氨電極法

第58頁(yè)/共68頁(yè)原理：

NH3＋α-酮戊二酸＋NADPH

谷氨酸＋NADP+＋H2O谷氨酸脫氫酶速率法：谷氨酸脫氫酶第59頁(yè)/共68頁(yè)【參考范圍】

血氨測(cè)定在診斷治療肝性腦病中占有重要作用?！九R床意義】18～72μmol/L

(酶法)第60頁(yè)/共68頁(yè)二、肝功能試驗(yàn)的分類(lèi)第三節(jié)肝功能試驗(yàn)選擇原則一、肝功能試驗(yàn)選擇原則第61頁(yè)/共68頁(yè)謝謝?。ㄒ唬┠懠t素的類(lèi)型未結(jié)合膽紅素又稱(chēng)“間接反應(yīng)膽紅素”或“間接膽紅素”。結(jié)合膽紅素又稱(chēng)“直接反應(yīng)膽紅素”或“直接膽紅素”。#11δ-膽紅素與重氮反應(yīng)呈直接陽(yáng)性

第63頁(yè)/共68頁(yè)

兩類(lèi)膽紅素的比較