藥物分析第三章

第三章藥物的雜質檢查雜質指存在于藥物中的無治療作用或影響藥物的穩(wěn)定性和療效、甚至對人體健康有害的物質?？偨Y來說，雜質就是：1.有毒副作用的物質2.本身無毒副作用，但影響藥物的穩(wěn)定性和療效的物質

簡言之:任何影響藥品純度的物質。

第一頁，共一百五十六頁。第一節(jié)藥物中雜質的來源及其種類一、雜質的來源（一）藥物純度的概念藥物的純度即藥物的純凈程度，是反映藥品質量的一項重要指標。含有雜質是影響藥物純度的主要因素。因此純度檢查通常又稱為雜質檢查。第二頁，共一百五十六頁。注意：藥物純度與化學純度的區(qū)別化學試劑純度不考慮生理作用，雜質限量只是從可能引起化學變化對使用影響來限定。藥物純度從用藥安全、有效和藥物穩(wěn)定性的影響考慮。比如：BaSO4（可溶性鋇鹽檢項）第三頁，共一百五十六頁。藥物的純度考慮雜質的生理作用，藥品只有兩個等級：合格或不合格?；瘜W試劑有很多等級，如基準試劑、優(yōu)級純（GR）、分析純（AR）、化學純（CP）、色譜純、光譜純等。第四頁，共一百五十六頁。二、藥物雜質的來源1.生產(chǎn)過程中引入（1）原料、反應中間體及副產(chǎn)物

（2）試劑、溶劑、催化劑類

（3）生產(chǎn)中所用金屬器皿、裝置以及其他不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質第五頁，共一百五十六頁。葡萄糖制備過程中產(chǎn)生雜質

酸度：水解試劑帶入乙醇中不溶物：水解中間體(糊精)SO32-：產(chǎn)品用H2SO3漂白可溶性淀粉：水解不完全第六頁，共一百五十六頁。2.貯藏過程中產(chǎn)生

水解、氧化、分解、異構化、晶形轉變、聚合、潮解和發(fā)霉等易發(fā)生水解反應的結構：酯、內酯、酰胺、鹵代烴、苷類等易發(fā)生氧化反應的結構：醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等第七頁，共一百五十六頁。貯藏過程中產(chǎn)生

外界條件影響：日光、空氣、溫度、濕度、微生物等引起藥物產(chǎn)生例如：麻醉乙醚

醛及有毒的過氧化物第八頁，共一百五十六頁。

1、在藥物生產(chǎn)過程中引入雜質的途徑為（ABCD）

A.原料不純或部分未反應完全的原料造成

B.合成過程中產(chǎn)生的中間體或副產(chǎn)物分離不凈造成

C.需加入的各種試劑產(chǎn)生吸附，共沉淀生成混晶等造成

D.所用金屬器皿及裝置等引入雜質

E.由于操作不妥，日光曝曬而使產(chǎn)品發(fā)生分解引入的雜質

第九頁，共一百五十六頁。二、雜質的分類（一）、按性質分類1.影響藥物穩(wěn)定性的雜質如：金屬離子會催化氧化還原反應2.毒性雜質如藥物中含有重金屬和砷鹽的過量存在3.信號雜質本身一般無害，但其含量的多少可以反應出藥物的純度水平，因此稱其為“信號雜質”。如氯化物、硫酸鹽的等屬于信號雜質。第十頁，共一百五十六頁。（二）.按來源分類1.一般雜質一般雜質是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質，如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、砷鹽、重金屬等。2.特殊雜質是指在特定藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中引入的雜質。如：阿司匹林中的水楊酸、甲硝唑中的2-甲基-5-硝基咪唑等。第十一頁，共一百五十六頁。注意：藥典中各藥物品種項下規(guī)定的雜質檢查項目，是指正常生產(chǎn)和貯存中可能產(chǎn)生并需控制的雜質。藥典中未規(guī)定檢查的雜質，一般有以下幾種情況：—在正常生產(chǎn)和貯藏過程中不可能引入；—含量甚微或臨床限量允許較寬，對人體和藥物質量無不良影響；—有些藥物中可能含有某些雜質，對其認識尚不夠，有待積累資料，也可暫緩訂入檢查項下。

第十二頁，共一百五十六頁。凡藥典未規(guī)定檢查的雜質，一般不需要檢查，但遇特殊情況如檢驗某藥物時發(fā)現(xiàn)性狀和反應不正常，應根據(jù)需要進一步追蹤、檢查。若藥廠在生產(chǎn)上改變了原料或方法，也應根據(jù)實際情況檢查其他可能引入的雜質。第十三頁，共一百五十六頁。三、藥物的雜質檢查方法雜質的限量是指藥物中所含雜質的最大允許量稱為雜質限量。通常用百分之幾（%）或百萬分之幾（ppm10-6）來表示。

允許雜質存在的最大量雜質限量=—————————×100%

供試品量第十四頁，共一百五十六頁。（一）對照法當供試品（S）中所含雜質的量是通過與一定量雜質標準溶液進行比較來確定時，雜質的最大允許量可由雜質標準溶液的濃度（C）與體積（V）的乘積獲得，上式又可以表達為：標準溶液的濃度×標準溶液的體積雜質限量=—————————————×100%供試品量或C×V

L=————×100%S第十五頁，共一百五十六頁。該法應該注意平行原則，即供試溶液和對照溶液應在完全相同的條件下反應。如加入的試劑、反應的溫度、放置的時間均應相等，這樣的結果才有可比性。

注意①單位一致②稀釋倍數(shù)③表示方法（%，ppm）第十六頁，共一百五十六頁。應用示例一對乙酰氨基酚中氯化物檢查取對乙酰氨基酚2.0g，加水100ml時，加熱溶解后冷卻，濾過，取濾液25ml，依法檢查氯化物（中國藥典，附錄ⅤⅢA），所發(fā)生的渾濁與標準氯化鈉溶液5.0ml（10μg/mlCl）制成的對照液比較，不得更濃。問氯化物的限量是多少?

第十七頁，共一百五十六頁。解：C×V10×10-6×5.0

L=——×100%=——————×100%S2.0×25/100=0.01%第十八頁，共一百五十六頁。應用示例二磷酸可待因中嗎啡檢查取本品0.10g，加鹽酸溶液（9→1000）使溶解成5ml，加亞硝酸鈉試液2ml，放置15分鐘，加氨試液3ml，所顯顏色與嗎啡溶液[取無水嗎啡2.0mg加鹽酸溶液（9→1000）使溶解100ml]5.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深。問限量為多少?

第十九頁，共一百五十六頁。解：C×V2.0/100×5.0

L=——×100%=——————×100%S0.10×103=0.1%第二十頁，共一百五十六頁。應用示例三葡萄糖中重金屬檢查取葡萄糖4.0g，加水23ml溶解后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，依法檢查重金屬（中國藥典附錄ⅤⅢH），含重金屬不得過百萬分之五。取標準鉛溶液多少ml?（每1ml相當于10μg的Pb）

第二十一頁，共一百五十六頁。解：L×S5×10-6×4.0

V=————=——————=2.0mlC10×10-6

第二十二頁，共一百五十六頁。習題1：檢查某藥物中的砷鹽，取標準砷溶液2ml（每1ml相當于1g的As）制備標準砷斑，砷鹽限量為0.0001％，應取供試品的量為（B）

A.0.20gB.2.0gC．0.020gD.1.0gE.0.10g第二十三頁，共一百五十六頁。已知：c＝1g/ml＝1×106g/mlV＝2mlL＝0.0001%第二十四頁，共一百五十六頁。習題2：檢查維生素C中的重金屬時，若取樣量為1.0g，要求含重金屬不得過百萬分之十，問應吸取標準鉛溶液（每1ml＝0.01mg的Pb）多少ml？（D）0.2mlB.0.4mlC．2mlD.1mlE.20ml第二十五頁，共一百五十六頁。第二十六頁，共一百五十六頁。（二）靈敏度法在供試品溶液中加入試劑，在一定條件下反應，以不出現(xiàn)正反應為合格。如：純化水中檢查氯化物，是在50ml水中加入硝酸與硝酸銀試液，不得發(fā)生渾濁。特點：不需要對照品第二十七頁，共一百五十六頁。（三）比較法主要是含量測定，測定雜質的絕對含量，如測定吸收度，pH值等。使用此方法時，須注意平行原則。即供試品和標準溶液應在完全相同的條件下反應，所加入的試劑、反應的溫度、放置的時間等均應相同。只有這樣，反應的結果才有可比性。特點：準確測定雜質的含量。第二十八頁，共一百五十六頁。第二節(jié)一般雜質檢查法掌握：一般雜質檢查規(guī)則《藥品檢驗標準操作規(guī)范》規(guī)定：1.遵循平行的原則①儀器的配對性如納氏比色管應配對（如顏色、長度），刻度線高度相差不超過2mm；砷鹽檢查時導氣管長度及孔的大小要一致。②對照品和供試品要同步操作第二十九頁，共一百五十六頁。2.正確的取樣及供試品的稱量范圍≤1g時不得超過±2%，＞1g時不超過±1%。3.正確的比色、比濁法。4.檢查結果如果不符合規(guī)定或者在限度邊緣時應對供試品管和對照品管各再進行復檢二次。第三十頁，共一百五十六頁。1.氯化物的檢查（對照法）（1）原理利用氯化物在硝酸銀酸性溶液中與硝酸銀試液發(fā)生作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定量標準氯化銀渾濁液比較，渾濁的度不得更大。

HNO3

藥物：Cl-+AgNO3—→AgCl↓（白色混濁）HNO3

對照品：NaCl+AgNO3—→AgCl↓（白色混濁）第三十一頁，共一百五十六頁。供試品稀HNO310mlH2OAgNO31ml標準溶液稀HNO310mlH2OAgNO31ml

暗處放置5min(避免AgCl分解)第三十二頁，共一百五十六頁。（3）注意事項1.標準氯化鈉溶液應為臨用前配制，濃度為10ug/ml的Cl-，氯化物濃度以50ml中含50μg～80μg的Cl-（相當于標準氯化鈉溶液5.0ml～8.0ml）2.硝酸加入避免雜質干擾檢查，（除去CO2+3、SO2-4、C2O4-2、PO3-4的干擾），加速氯化銀的形成，以50ml中含有稀硝酸10ml為宜。第三十三頁，共一百五十六頁。（1）加速AgCl渾濁的形成（2）產(chǎn)生較好乳濁的形成（3）避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的形成第三十四頁，共一百五十六頁。3.供試液和對照液生成的是白色渾濁而不是白色沉淀。4.避光暗處放置5分鐘，因為氯化銀見光易分解。5.比濁的方法是置黑色背景下，自上而下觀察。第三十五頁，共一百五十六頁。6.溫度的影響：30～40℃產(chǎn)生濁度最大且恒定，但作為濁度檢查，供試品和對照品可在室溫下平行操作。7.供試品如帶顏色，通常采用消色法處理。（1）外消色法：如高錳酸鉀中氯化物的檢查，可先加乙醇適量，使其還原褪色后再依法檢查。（2）內消色法：倍量法第三十六頁，共一百五十六頁。8.其它干擾物質存在時，必須在檢查前除去（1）有機藥物的氯化物檢查：溶于水的，直接檢查；不溶于水的，多數(shù)采用加水振搖，使氯化物溶解，濾除不溶物或加熱溶解，放冷析出沉淀，濾過，取濾液檢查。（2）檢查有機氯，進行有機破壞，使有機氯轉變?yōu)闊o機氯化物后檢查。（3）檢查碘化物或溴化物中的氯化物時，選擇適當方法去除干擾后再檢查。第三十七頁，共一百五十六頁。習題1：藥物中氯化物雜質檢查，是使該雜質在酸性溶液中與硝酸銀作用生成氯化物渾濁，所用的稀酸是（B）A.硫酸B.硝酸C.鹽酸D.醋酸E.磷酸第三十八頁，共一百五十六頁。2.采用硝酸銀試液檢查氯化物時，加入硝酸使溶液酸化的目的是（ABCDE）A．加速生成氯化銀渾濁反應B．消除某些弱酸鹽的干擾C．消除碳酸鹽干擾D．消除磷酸鹽干擾E．避免氧化銀沉淀生成第三十九頁，共一百五十六頁。3.檢查氯化物雜質時，一般取用標準氯化鈉溶液（10μgCl－/ml）5～8ml的原因是（D）A.使檢查反應完全B.藥物中含氯化物的量均在此范圍C.加速反應D.所產(chǎn)生的濁度梯度明顯E.避免干擾第四十頁，共一百五十六頁。4.當采用比濁法檢查氯化物雜質時，若藥物本身有顏色而干擾檢查的話，應該選用的處理方法為（AB）A．內消色法B．外消色法C．比色法D．差示比濁法

E．差示可見分光法第四十一頁，共一百五十六頁。5.下列哪些條件為藥物中氯化物檢查的必要條件（ABC）A.所用比色管需配套B.稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C.避光放置5分鐘D.用硝酸銀標準溶液做對照E.在白色背景下觀察第四十二頁，共一百五十六頁。二、硫酸鹽檢查法（對照品法）（1）原理硫酸鹽與氯化鋇在HCl酸性溶液中，生成硫酸鋇沉淀，與一定量的標準硫酸鉀溶液在同樣條件下生成的渾濁比較，濁度不得更大。HCl藥物：SO2-4+Ba2+—→BaSO4↓（白色渾濁）

HCl對照：K2SO4+BaCl2—→BaSO4↓（白色渾濁）

第四十三頁，共一百五十六頁。（2）測定條件1.標準硫酸鉀濃度為100ug/ml的SO2-4，適宜比濁的濃度范圍為每50ml溶液中含0.1mg～0.5mg的SO2-4。

2.反應應在酸性條件下進行，且以50ml供試液含稀鹽酸2ml為宜。3.供試液和對照液生成的是白色渾濁而不是白色沉淀。4.比濁的方法是置黑色背景下，自上而下觀察。第四十四頁，共一百五十六頁。（三）討論1.鹽酸的加入避免碳酸鋇、磷酸鋇沉淀生成，以50ml含鹽酸2ml，pH約為1為宜。

2.供試溶液不澄清，用含鹽酸的水洗滌濾紙中的硫酸鹽后，過濾，如供試品有色，處理方法同氯化物檢查法。

第四十五頁，共一百五十六頁。習題：藥物中硫酸鹽檢查時，所用的標準對照液是（D）A.標準氯化鋇B.標準醋酸鉛溶液C.標準硝酸銀溶液D.標準硫酸鉀溶液

E.以上都不對第四十六頁，共一百五十六頁。三、鐵鹽檢查法（一）原理硫氰酸鹽法（對照法）Fe3++[6SCN-]→Fe（SCN）3-6（紅色）利用鐵鹽在鹽酸酸性溶液中與硫氰酸鹽作用生成紅色可溶性的硫氰酸鐵絡合離子，與一定量的標準鐵溶液在同樣條件下生成紅色進行比較。第四十七頁，共一百五十六頁。（二）操作方法除另有規(guī)定外，取各藥品項下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml,移置于50ml納氏比色管，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，加水稀釋至約35ml后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量使成50ml，如顯色，立即與標準鐵溶液一定量按相同方法制成的對照溶液比較。第四十八頁，共一百五十六頁。（三）討論1.標準鐵溶液的要求。標準鐵溶液每1ml相當于10μg的Fe3+。比色時以50ml溶液中含10μg～50μgFe3+為宜。2.加入過量的硫氰酸銨的作用，為氧化劑，氧化供試品中的Fe2+為Fe3+，同時可以防止硫氰酸銨受光照還原或分解。3.檢查Fe2+和Fe3+.4.某些藥物（如葡萄糖、糊精和硫酸鎂等）在檢查過程中的處理。《中國藥典》附錄中都有詳細處理方法。第四十九頁，共一百五十六頁。5.某些酸根陰離子，如Cl-、PO4、SO4、枸櫞酸根離子等，能與Fe3+形成有色配位化合物而干擾檢查。6.某些有機藥物在實驗條件下不溶解或對檢查有干擾的，需經(jīng)熾灼破壞，使鐵鹽呈三氧化二鐵留于殘渣中，處理后檢查。7.若供試品管的色調與對照品管不一致時，進行提取后再比色。巰基醋酸法：靈敏度較高，試劑較貴。第五十頁，共一百五十六頁。習題1：中國藥典（二部）規(guī)定鐵鹽的檢查方法為（A）A.硫氰酸鹽法B.巰基醋酸法C.普魯士藍法D鄰二氮菲法E.水楊酸顯色法第五十一頁，共一百五十六頁。習題2.中國藥典（二部）規(guī)定，硫氰酸銨法檢查鐵鹽時，加入氧化劑過硫酸銨的目的是（AB）

A.使藥物中鐵鹽都轉變?yōu)镕e3+B.防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色

C.使產(chǎn)生的紅色產(chǎn)物顏色更深

D．防止干擾

E．便于觀察、比較第五十二頁，共一百五十六頁。習題3.中國藥典收載的鐵鹽檢查，主要是檢查（D）A.FeB.Fe2+C.Fe3+D.Fe2+和Fe3+E.以上都不對第五十三頁，共一百五十六頁。四、重金屬檢查法重金屬系指在實驗條件下能硫代乙酰胺或硫化鈉作用而顯色的金屬雜質，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等。在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機會較多，鉛在體內又易積蓄中毒，故檢查時以鉛為代表，作為限量檢查。

第五十四頁，共一百五十六頁。（二）操作方法《中國藥典》現(xiàn)行版共收載有4種方法★第一法：（硫代乙酰胺法）第二法：（熾灼法）是將供試品在500～600℃熾灼破壞后，再按第一法測定第三法：（硫化鈉法）是檢查能溶于堿溶液而不能溶于酸溶液的藥物，在堿性條件下用硫化鈉做顯色劑。第四法：（微孔濾膜法）比較供試品和標準品砷斑的顏色，判定供試品重金屬是否超標。第五十五頁，共一百五十六頁。第一法：硫代乙酰胺法適用對象：溶于水、稀酸和乙醇的藥物原理：藥物：Pb2++醋酸鹽緩沖液（pH3.5）+硫代乙酰胺（CH3CSNH2）PbS（黃色-棕黑）對照：PbNO3+醋酸鹽緩沖液（pH3.5）+硫代乙酰胺（CH3CSNH2）PbS(黃色-棕黑)第五十六頁，共一百五十六頁。

2.測定條件（1）用硝酸鉛配制標準鉛貯備液（加硝酸防止Pb2+水解），標準鉛溶液臨用前稀釋而成，標準硝酸鉛溶液10gPb2+/ml，適宜比色范圍為27ml溶液中含10～20g的Pb2+。

第五十七頁，共一百五十六頁。（2）本法用2mlpH3.5的醋酸鹽緩沖液控制溶液pH值為3～3.5。

（3）顯色劑：從ChP（1990）開始改用硫代乙酰胺做顯色劑。第五十八頁，共一百五十六頁。（1）供試品如有色，需經(jīng)處理后方可檢查。外消色法：在對照管中加稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液。B.內消色法C.改用第四法，微孔濾膜過濾法3.干擾及排除第五十九頁，共一百五十六頁。（2）若供試品中有微量Fe3+存在，會氧化硫化氫生成單質硫，干擾比色，加入抗壞血酸或鹽酸羥胺（0.5～1.0g）還原Fe3+為Fe2+，可消除干擾第六十頁，共一百五十六頁。（3）若藥物本身能生成不溶性硫化物時，可加入掩蔽劑消除干擾。如ZnSO4中重金屬的檢查，要在堿性下加KCN掩蔽Zn2+后，依第三法檢查第六十一頁，共一百五十六頁。（二）第二法熾灼殘渣法適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機藥物。1.原理對照法

500～600℃熾灼后的殘渣，經(jīng)處理后，依一法檢查。第六十二頁，共一百五十六頁。（三）第三法硫化鈉法適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類。1.原理：對照法第六十三頁，共一百五十六頁。2.測定條件（1）NaOH堿性條件下（2）顯色劑：硫化鈉

第六十四頁，共一百五十六頁。第四法微孔濾膜法適用于含2～5g重金屬雜質及有色供試液的檢查。依一法檢查，結果微孔濾膜過濾后比較色斑。

第六十五頁，共一百五十六頁。習題1．重金屬檢查中，加入硫代乙酰胺時溶液控制最佳的pH值是（B

）A.1.5B.3.5C．7.5D.9.5E.11.5第六十六頁，共一百五十六頁。2．微孔濾膜法是用來檢查（C）A.氯化物B.砷鹽C.重金屬D.硫化物E.氰化物第六十七頁，共一百五十六頁。3.下面哪些方法為《中國藥典》收載的重金屬檢查方法（ACD

）

A.500～600℃熾灼殘渣后,按一法操作

B.pH3～3.5條件下，加入硫化氫試液

C.堿性下，加入硫化鈉試液

D.按一法操作，結果用微孔濾膜過濾后觀察色斑

E.以上都對第六十八頁，共一百五十六頁。五、砷鹽檢查法（一）古蔡氏法1.檢查原理金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷鹽反應生成具揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與一定量標準砷溶液所生成的砷斑比較，顏色不得更深。優(yōu)點：靈敏度高1ugAs可檢出第六十九頁，共一百五十六頁。2.操作方法（1）標準砷斑用2ml標準砷溶液制備（2）供試品如需經(jīng)有機破壞，標準砷溶液應平行操作。操作：精密量取標準砷溶液2ml，置錐形瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10min后，加鋅粒2g，立即將裝妥的導氣管c密塞于A瓶上，并將A瓶置25℃～40℃水浴中，反應45min，取出溴化汞試紙，即得。另取規(guī)定量的供試品，加鹽酸5ml與水23ml溶解后，照標準砷斑制備，依法操作。將生成的砷斑與標準砷斑比較，不得更深。第七十頁，共一百五十六頁。第七十一頁，共一百五十六頁。3.測定條件

測定條件：（1）標準砷溶液臨用新配，1gAs/ml（2）酸為反應物，酸量應足夠，所以加濃鹽酸5ml。（3）酸性氯化亞錫及碘化鉀的作用是:A.還原As5+為As3+，加快反應速度；B.碘化鉀被氧化生成的I2又可被氯化亞錫還原為I-，I-與反應中生成的Zn2+能形成穩(wěn)定的配位離子，有利于生成砷化氫的反應不斷進行；第七十二頁，共一百五十六頁。C.氯化亞錫與鋅作用，在鋅表面形成鋅錫齊，使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生；D.可抑制微量Sb的干擾，在實驗條件下，100gSb存在不干擾。

第七十三頁，共一百五十六頁。（4）醋酸鉛棉花的作用是消除鋅粒及供試品中少量硫化物的干擾，醋酸鉛棉花60mg裝管高度60～80mm。（5）鋅粒應無砷（6）砷斑不穩(wěn)定，應立即觀察第七十四頁，共一百五十六頁。4.干擾及排除（1）供試品若為硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽時，加HNO3，△，使氧化成硫酸鹽，以除去干擾，如硫代硫酸鈉中砷鹽的檢查。

第七十五頁，共一百五十六頁。（2）供試品若為鐵鹽，需先加酸性氯化亞錫試液，將Fe3+還原為Fe2+。如枸櫞酸鐵銨中砷鹽的檢查。（3）具環(huán)狀結構的有機藥物，要先行有機破壞后再進行檢查。

常用的有機破壞方法：堿破壞法：石灰法、無水碳酸鈉堿融法酸破壞法：如葡萄糖中砷鹽的檢查第七十六頁，共一百五十六頁。（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法）[Ag-DDC法]不僅可用于砷鹽的限量檢查，也可用作微量砷鹽的含量測定。1.原理金屬鋅與酸作用，產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與微量砷鹽反應，生成具有揮發(fā)性的砷化氫；砷化氫遇二乙基二硫代氨基甲酸銀，使其還原產(chǎn)生紅色的膠態(tài)銀。用目視比色法或在510nm波長處測定吸收度，再與一定量標準砷溶液用同法處理后得到的有色溶液進行比較。

第七十七頁，共一百五十六頁。習題1.在藥物的雜質檢查中，其限量一般不超過百萬分之十的是（D）A.氯化物B.硫酸鹽C.醋酸鹽D.砷鹽E.淀粉第七十八頁，共一百五十六頁。2.古蔡氏法中，SnC12的作用有（ACD）A.使As5+→As3+

B.除去H2SC.除去I2

D.組成鋅錫齊E.除去其它雜質第七十九頁，共一百五十六頁。3.Ag—DDC法檢查砷鹽的原理為：砷化氫與Ag—DDC吡啶作用，生成的物質是（E）A.砷斑B.銻斑C.膠態(tài)砷D.三氧化二砷E.膠態(tài)銀第八十頁，共一百五十六頁。4.中國藥典收載的古蔡法檢查砷鹽的基本原理是（BE）

A.與鋅、酸作用生成H2S氣體

B.與鋅、酸作用生成AsH3氣體

C.產(chǎn)生的氣體遇氯化汞試紙產(chǎn)生砷斑

D.比較供試品砷斑與標準品砷斑的面積大小

E.比較供試品砷斑與標準品砷斑的顏色強度第八十一頁，共一百五十六頁。例10.古蔡氏法檢砷，藥典規(guī)定制備標準砷斑時，應取標準砷溶液（C）A.1mlB.5mlC.2mlD.依限量大小決定E.以上都不對第八十二頁，共一百五十六頁。六、干燥失重測定法干燥失重系指藥品在規(guī)定的條件下，經(jīng)干燥后所減失的量，以百分率表示。干燥失重的量應恒重。由干燥至恒重的第二次及以后各次稱重均應在規(guī)定的條件下繼續(xù)干燥1h后進行。干燥失重的內容物主要指水分，也包括其它揮發(fā)性物質，如殘留的揮發(fā)性有機溶劑等。第八十三頁，共一百五十六頁。干燥失重測定方法主要有下列四種：（一）常壓干燥法本法適用于受熱較穩(wěn)定的藥物，中國藥典收載的藥物有重酒石酸間羥胺、膽茶堿、度米芬、洋地黃毒苷、鹽酸乙胺丁醇、格列吡嗪、核黃素磷酸鈉、磺胺嘧啶銀、磷酸二氫鈉等40余種采用本法測定。第八十四頁，共一百五十六頁。方法：將供試品置于相同條件下已干燥至恒重的扁形稱量瓶中，在烘箱內于規(guī)定溫度下干燥至恒重，由減失的重量和取樣量即可計算供試品的干燥失重。干燥溫度一般為105℃第八十五頁，共一百五十六頁。（二）干燥劑干燥法本法適用于受熱分解、或易于揮發(fā)的供試品，中國藥典收載的藥物如鹽酸丁丙諾啡、鹽酸米托蒽醌、鹽酸洛貝林、氯化銨、苯佐卡因、硝酸異山梨酯、馬來酸麥角新堿等采用本法測定。方法將供試品置干燥器中，利用干燥器內的干燥劑吸收水分，干燥至恒重。注意事項藥典中常用的干燥劑有硅膠、硫酸和五氧化二磷等。第八十六頁，共一百五十六頁。（三）減壓干燥法本法適用于熔點低、受熱不穩(wěn)定或難趕除水分的藥物。中國藥典收載的藥物有鹽酸阿糖胞苷、鹽酸去甲萬古霉素、山梨醇、乙酰半胱氨酸、洛莫司汀癸氟奮乃靜、絨促性素、鹽酸丁丙諾啡等多種。原理相對于常壓，減壓條件下干燥溫度降低、干燥時間縮短。方法在一定溫度下，采用減壓干燥器或恒溫減壓干燥箱干燥，壓力應控制在2.67kPa（20mmHg）以下。第八十七頁，共一百五十六頁。干燥失重的計算供試品干燥至恒重后減失的重量干燥失重=——————————×100%供試品取樣量第八十八頁，共一百五十六頁。（四）熱分析法在程序控制溫度的情況下，測定物質的物理、化學變化與溫度關系的一類儀器分析方法稱為熱分析法。該方法具有樣品用量少，靈敏、快速等優(yōu)點，在藥物分析中廣泛用于物質的熔點、多晶型、純度、溶劑化物、水分及熱解產(chǎn)物的測定。第八十九頁，共一百五十六頁。習題1.干燥失重測定的方法有（BCDE）A．熾灼（500～600℃）法B．常壓恒溫干澡法C．減壓干燥法D．干燥劑干燥法E．減壓干燥劑干燥法第九十頁，共一百五十六頁。2.干燥失重測定中應注意哪幾個方面（ABCD）

A.供試品平鋪在稱量瓶中的厚度一般不超過5mmB.干燥溫度一般為105℃C.可用干燥劑干燥

D.主要指水分和揮發(fā)性物質

E.測定時間不超過3小時第九十一頁，共一百五十六頁。七、水分測定法《中國藥典》現(xiàn)行版采用費休氏法、甲苯法測定藥物中的水分，主要用費休氏法，該法又叫卡爾費休氏水分滴定法。（一）測定原理1.屬于非水溶液中的氧化還原滴定。2.費休氏標準滴定液稱費休氏試液，由碘、二氧化硫、吡啶和甲醇按一定比例組成。第九十二頁，共一百五十六頁。3.費休氏水分測定法是利用碘在吡啶和甲醇溶液中氧化二氧化硫時需要定量的水參加反應的原理來測定樣品中的水分含量，本法可適用任何可溶解于費休氏試液但不與費休氏試液起化學反應的藥品的水分測定。4.滴定終點的方法有①自身作指示劑，利用碘的顏色指示終點；②永停滴定法：依法操作，終點時電流計指針突然偏轉，并持續(xù)數(shù)分鐘不退回。第九十三頁，共一百五十六頁。（二）操作方法①采用水分測定儀直接標定費休氏試液②采用滴定方法；③用永停滴定法指示終點并做空白試驗，按下式計算費休試劑的滴定度（F）：第九十四頁，共一百五十六頁。第九十五頁，共一百五十六頁。

標定應取3份以上，3次連續(xù)標定結果應在±1%以內，以平均值作為費休氏試液的強度。

A——供試品消耗的Fisher試液的體積B——空白消耗的Fisher試液的體積F——每1mlFisher試劑相當于水的重量(mg)W——供試品的重量第九十六頁，共一百五十六頁。八、熾灼殘渣檢查法

熾灼殘渣檢查法是檢查有機藥物中混入的各種無機雜質(金屬氧化物或無機鹽類)。原理樣品炭化后+H2SO4濕潤→700～800℃熾灼至恒重→熾灼殘渣（硫酸灰分）限量一般為0.1%～0.2%

第九十七頁，共一百五十六頁。殘渣及坩堝重—坩堝重熾灼殘渣％＝—————————100%供試品取樣量第九十八頁，共一百五十六頁。恒重系指供試品連續(xù)兩次干燥或灼燒后的重量差異在0.3mg以下的重量.干燥至恒重的第二次級以后各次稱重均應在規(guī)定條件下干燥1h后進行干燥熾灼至恒重的第二次稱重應在繼續(xù)熾灼30min后進行.第九十九頁，共一百五十六頁。注意事項1.供試品的取用量應根據(jù)熾灼殘渣限量和稱量誤差決定。樣品量過多，炭化和灰化時間太長；樣品量過少，稱量誤差增大。一般應使熾灼殘渣量為1～2mg，殘渣限量一般為0.1％～0.2％。當限量為0.1％，取樣量約1g；限量為0.05％，取樣約2g；限量為1％以上者，取樣可在1g以下。第一百頁，共一百五十六頁。2.恒重系指供試品連續(xù)兩次熾灼或干燥后的重量差異在0.3mg以下。熾灼至恒重的第二次稱重應在繼續(xù)熾灼30min后進行。3.如果殘渣需做重金屬檢查，熾灼溫度在500～600℃至恒重，否則重金屬檢查結果偏低。4.加硫酸處理是使雜質轉化為較為穩(wěn)定的硫酸鹽，并幫助有機物炭化。第一百零一頁，共一百五十六頁。習題1.熾灼殘渣檢查法一般加熱恒重的溫度為（C）A.500～600℃B.600～700℃C.700～800℃D.800～1000℃E.1000～1200℃第一百零二頁，共一百五十六頁。2.熾灼殘渣的限量一般為（E）A.1％B.0.5％～1％C.0.4％～0.5％D.0.2％～0.3％E.0.1％～0.2％第一百零三頁，共一百五十六頁。3.熾灼殘渣檢查后，將殘渣留作重金屬檢查時，熾灼溫度應為（A）A.500～600℃B.600～700℃C.700～800℃D.800～1000℃E.1000～1200℃第一百零四頁，共一百五十六頁。九、易炭化物檢查法

易炭化物檢查法是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質。

方法：這類雜質多數(shù)結構未知，常采用標準比色液比色的方法進行檢查。

第一百零五頁，共一百五十六頁。習題1、易炭化物是指（B）

A、藥物中存在的有色雜質

B、藥物中遇H2SO4易炭化或易氧化而呈色的微量有機雜質

C、藥物中遇H2SO4易炭化或易氧化而呈色的微量無機雜質

D、有機氧化物E、有色絡合物第一百零六頁，共一百五十六頁。十、溶液顏色檢查法藥物溶液的顏色及其與規(guī)定顏色的差異能在一定程度上反映藥物的純度。對溶液顏色進行檢查，可控制藥物中有色雜質的含量。中國藥典采用的檢查方法有三種。（一）目視比色法標準比色液（二）分光光度法分光光度儀（三）色差計法色差計第一百零七頁，共一百五十六頁。目視比色法即與標準比色液比較的方法，全波長范圍定性觀察。觀察方法：平視：顏色較深時從上向下：顏色較淺時第一百零八頁，共一百五十六頁。第二法分光光度法單一波長定量第三法色差計法全波長范圍定量

本法是通過色差計直接測定溶液的透視三刺激值，對其顏色進行定量表述和分析的方法。測色儀器一般為光電積分型色差計

第一百零九頁，共一百五十六頁。標準比色液由三種有色金屬鹽重鉻酸鉀、硫酸銅、氯化鈷按不同比例配制而成。標準比色液的配制

第一百一十頁，共一百五十六頁。十一、澄清度檢查法1.原理檢查藥物中微量的不溶性雜質，常采用與濁度標準液比濁的方法進行比較。2.濁度標準液的配制中國藥典規(guī)定用濁度標準液作為澄清度檢查的標準。反應原理：烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛，甲醛與肼縮合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色渾濁。注意：在冷藏條件下使用2個月，使用前必須搖勻

第一百一十一頁，共一百五十六頁。1.00%硫酸肼溶液與10.00%烏洛托品稀釋溶液等量混合配制濁度標準貯備液----→濁稀釋度標準原液----→濁度標準液（5個級號）第一百一十二頁，共一百五十六頁。濁度標準液配制：表3-1不同級號濁度標準液

級號0.51234濁度標準原液(mL)2.55.010.030.050.0水(mL)97.595.090.070.050.0中國藥典規(guī)定：供試品溶液的澄清度與所用溶劑相同或未超過級號為0.5號濁度標準液時，為澄清。超過0.5濁度標準液時，則不澄清。第一百一十三頁，共一百五十六頁。判斷：中國藥典規(guī)定：供試品溶液的澄清度與所用溶劑相同或未超過0.5號濁度標準液時，為澄清；供試品溶液的乳色比0.5號明顯，而不及1級時，稱為濁度0.5號；其余依此類推。。供制備注射用的原料藥物往往既要檢查溶液澄清度又要檢查溶液顏色：第一百一十四頁，共一百五十六頁。如華法林鈉的檢查：取本品0.20g，加丙酮l0ml溶解后．溶液應澄清無色；如顯渾濁與1號濁度標準液比較，不得更濃；如顯色，置4cm吸收池中，采用分光光度法檢查,在460nm波長處測定的吸收度，不得超過0.12。第一百一十五頁，共一百五十六頁。十二、酸堿度檢查法（一）酸堿滴定法：采用滴定的方法，以消耗酸或堿滴定液的毫升數(shù)作為限度指標。例：NaCl的酸堿度樣品5.0g→水50ml溶解→溴麝香草酚藍(pH6.0-7.6,黃-藍)指示液2滴，→若顯黃色（酸性）,加0.02mol/LNaOH滴定液0.1ml，應變蘭色→若顯藍色或綠色（堿性）加0.02mol/LHCl滴定液0.1ml，應變黃色第一百一十六頁，共一百五十六頁。（二）指示劑法：利用規(guī)定的指示劑的變色pH范圍來控制供試液中酸堿性雜質限量。例：純化水的酸堿度樣品10ml→甲基紅(pH4.2-6.3,紅-黃)指示液2滴，不得顯紅色。（酸度）→溴麝香草酚藍指示液5滴，不得顯藍色。（堿度）蒸餾水的pH范圍4.2-7.6第一百一十七頁，共一百五十六頁。（三）pH測定法：采用pH酸度計測定溶液的pH，準確度最高。例：注射用水的pH值應為5.0-7.0第一百一十八頁，共一百五十六頁。習題、《中國藥典》現(xiàn)行版對藥物的酸堿度檢查，采用的方法有（ABE）A、酸堿滴定法B、指示劑法C、旋光法D、折光法E、pH測定法第一百一十九頁，共一百五十六頁。十三、殘留溶劑測定法主要檢查在合成原料藥、輔料或制劑生產(chǎn)過程中使用的，但在工藝生產(chǎn)中未能完全除去的有機溶劑，如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲烷、環(huán)氧乙烷等等。

第一百二十頁，共一百五十六頁。（一）測定方法《中國藥典》采用氣相色譜法測定。1.色譜條件：固定相：直徑為0.25～0.18mm的二乙烯苯－乙基乙烯苯型高分子多孔小球2.測定的方法有三種：第一法溶液直接進樣測定法。第二法頂空進樣法，適用于揮發(fā)性大組分的分析第三法頂空進樣程序升溫法。第一百二十一頁，共一百五十六頁。3.測定前進行系統(tǒng)適用性試驗

（1）理論板數(shù)N（應大于1000）

（2）分離度R（應大于1.5）

（3）標準偏差（RSD：內標法應不大于5%、外標法應不大于10%）第一百二十二頁，共一百五十六頁。殘留有機溶劑測定的方法和限量有機溶劑柱溫（℃）內標物測定方法限量（%）

二氧六環(huán)170吡啶1法0.038吡啶170二氧六環(huán)1法0.02苯170甲苯1法或2法0.0002甲苯170苯1法或2法0.089氯方140二氯甲烷1法或2法0.006二氯甲烷1401法或2法0.06環(huán)氧乙烷802法0.001第一百二十三頁，共一百五十六頁。十四灰分測定法【總灰分測定法】測定用的供試品須粉碎，使能通過二號篩，混合均勻后，取供試品2～3g（如須測定酸不溶性灰分，可取供試品3～5g），置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準確至0.01g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中含總灰分的百分數(shù)。如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2ml,使殘渣濕潤，然后置水浴上蒸干，殘渣照前法熾灼，至坩堝內容物完全灰化。

第一百二十四頁，共一百五十六頁?！舅岵蝗苄曰曳譁y定法】取上項所得的灰分，在坩堝中小心加入稀鹽酸約10ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10min，表面皿用熱水5ml沖洗，洗液并入坩堝中，用無灰濾紙濾過，坩堝內的殘渣用水洗于濾紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應為止，濾渣連同濾紙移至同一坩堝中，干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中酸不溶性灰分的含量（%）。第一百二十五頁，共一百五十六頁。十五農(nóng)藥殘留檢查法

中藥材在歷史上是世界各國醫(yī)療的主要藥物，在中國有著2000多年的歷史，然而中藥材的質量分析的標準確實最近一個世紀才得到各方面的重視。近幾年來，隨著中國出口的中藥材、中成藥中農(nóng)藥殘留量超標，中醫(yī)藥在的聲譽受到了一定的影響，農(nóng)藥殘留的要求標準的制定即測量方法的規(guī)定也迫在眉睫。第一百二十六頁，共一百五十六頁。一般所謂的農(nóng)藥殘留，是農(nóng)藥使用后一個時期內沒有被分解而殘留于生物體、收獲物、土壤、水體、大氣中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質的總稱。目前所使用的農(nóng)藥，有些在較短時間內可以通過生物降解而生成無害物質，但是有些例如有機氯和有機磷類農(nóng)藥卻是殘留性強的農(nóng)藥。而我們一般的意義上的農(nóng)藥殘留監(jiān)測基本上是監(jiān)測有機磷和有機氯的農(nóng)藥殘留。有機磷農(nóng)藥是我國目前生產(chǎn)最多、使用最廣的一類農(nóng)藥,它是一種神經(jīng)性毒物，在人體內長期蓄積滯留會引發(fā)慢性中毒，導致人體神經(jīng)功能紊亂，發(fā)生出汗、遲鈍、神經(jīng)失常和語言失常等癥狀。有機氯農(nóng)藥是一類廣譜殺蟲劑，其化學性質穩(wěn)定，脂溶性大，易在體內蓄積，嚴重危害人體健康，目前個別樣品仍能在藥材中檢出。藥材生長周期較長，因此容易含有殘留農(nóng)藥的污染。第一百二十七頁，共一百五十六頁。隨著對藥材農(nóng)藥殘留的報道日益增多，人們對農(nóng)藥殘留危害的認識也越來越深入，藥典對其制定檢測方法也越來越全面，越來越科學?！吨袊幍洹?000年版首次規(guī)定了9種有機氯農(nóng)藥殘留的檢測方法，2005年版，除甘草、黃芪等藥材外，對其余藥材均未提出限量要求，我國最近的第2010版《中國藥典》中不僅規(guī)定了9種有機氯農(nóng)藥殘留的檢測方法，而且規(guī)定了12種有機磷類的檢測方法，還規(guī)定了3種擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留量的檢測方法，然而在限量標準方面僅規(guī)定了甘草和黃芪兩種藥物的六六六、滴滴涕、五氯硝基苯的限量標準，其它中藥材尚未涉及。第一百二十八頁，共一百五十六頁。第三節(jié)特殊雜質檢查法概念：不同的藥物，由于其合成工藝、原料和結構性能等不同，在生產(chǎn)和貯藏過程中可能引入的中間體，分解產(chǎn)物及副產(chǎn)物等特有的雜質，即特殊雜質。藥物中特殊雜質的檢查，主要是根據(jù)藥物和雜質在物理和化學性質上的差異來進行的，方法的專屬性十分關鍵。第一百二十九頁，共一百五十六頁。一、利用藥物和雜質在物理性質上的差異（一）臭味及揮發(fā)性質的差異例如：黃凡士林中異性有機物檢查：本品2.0g,直火加熱無辛味。濃過氧化氫中不揮發(fā)性雜質檢查：10ml水浴蒸干殘渣＜15mg（二）顏色差異例如：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的檢查：取本品2.0g，加NaOH試液10ml，加水25ml，與黃色3號比色液比，不得更深。第一百三十頁，共一百五十六頁。（三）溶解行為的差異：如葡萄糖中檢查糊精，葡萄糖在乙醇中加熱溶解，糊精則不溶，規(guī)定應澄明，這是檢查樣品的澄清度。（四）旋光性質的差異1)藥物有旋光度而雜質無例:黃體酮在乙醇中的比旋度為+186～+198°2)雜質有旋光度而藥物無例:硫酸阿托品(50mg/ml)中莨菪堿的檢查,規(guī)定旋光度不得過-0.40°第一百三十一頁，共一百五十六頁。

（五）對光吸收性質的差異1.紫外分光光度法：利用藥物和待檢雜質對光選擇吸收性質的差異進行。第一百三十二頁，共一百五十六頁。220260300nm腎上腺酮及腎上腺素的紫外吸收曲線λmax310nm第一百三十三頁，共一百五十六頁。2.原子吸收分光光度法：是通過測定藥物中所含待測元素原子蒸氣，吸收發(fā)自光源的該元素特定波長的程度，以求出藥物中待測元素的含量。第一百三十四頁，共一百五十六頁。2.紅外分光光度法：主要用于藥物中無效或低效晶型檢查，如甲苯咪唑中A晶型檢查第一百三十五頁，共一百五十六頁。二、利用藥物和雜質在化學性質上的差異1.酸堿度的差異:若有雜質，可用如下方法檢查：①規(guī)定消耗液的體積例如己酸羥孕酮中正己酐、對甲苯磺酸檢查：(NaOH0.02mol/L)取本品0.20g+中性乙醇+溴麝香草酚藍微藍色＜0.50ml

第一百三十六頁，共一百五十六頁。②pH測定法例如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸檢查：0.01g/mlpH3.0～4.5.③指示劑法例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲檢查：其水溶液不得使甲基橙顯紅色。第一百三十七頁，共一百五十六頁。2.氧化還原性的差異：利用藥物與雜質氧化還原電位的差異進行的檢查。鹽酸嗎啡中阿樸嗎啡的檢查：后者可被碘氧化生成水溶性綠色化合物。因此ChP規(guī)定：本品50mg+4mlH2O+1滴I2

（1mol/L）+5ml乙醚乙醚層不得顯紅色；水層不得顯綠色。第一百三十八頁，共一百五十六頁。3.雜質與一定試劑反應產(chǎn)生沉淀如生物堿中其它生物堿的檢查，多采用此方法。硝酸毛果蕓香堿中其他生物的檢查：后者+氨水+K2Cr2O7——生成沉淀

ChP規(guī)定：本品0.2g+20mlH2O兩份；I份+數(shù)滴氨試液；另1份+數(shù)滴K2Cr2O7試液，均不得發(fā)生混濁。第一百三十九頁，共一百五十六頁。4.雜質與一定的試劑反應產(chǎn)生顏色：利用藥物中的雜質與某些試劑發(fā)生氧化、絡合、耦合等顯色反應，進行藥物中的雜質檢查。例一、鹽酸普萘洛爾中游離α-萘酚檢查：利用后者可與重氮鹽發(fā)生重氮化-偶合反應，生成偶氮染料。ChP規(guī)定：供試品20mg+乙醇與10%NaOH液各2ml+重氮苯磺酸試液1ml,放置3min；如顯色，與0.3mlα-萘酚對照液（20μg/ml)比較不得更深。例二、碘他拉酸中氨基化合物的檢查：利用重氮化-偶合反應ChP規(guī)定：供試品2.5mg/ml經(jīng)重氮化-偶合反應后，在波長485nm測得A＜0.25第一百四十頁，共一百五十六頁。三、利用藥物和雜質在色譜行為上的差異★1）薄層色譜法：利用藥物和雜質對吸附劑的吸附或展開劑的解析能力的不同，加以分析和檢查。①雜質對照法：利用待測雜質的純品（或可能存在的雜質純品）作為對照液，與供試品液點于同一薄層板上，展開和定位后檢查。第一百四十一頁，共一百五十六頁。

例如：鹽酸左旋咪唑中2，3-二氫-6-苯基咪唑[2，1-b]噻唑鹽酸鹽的檢查方法：板：硅膠G