維生素C含量測方法綜述專家講座

摘要

當(dāng)前研究維生素C測定方法報道較多，如滴定法、光度分析法、高效液相色譜法等，各種方法各有特點。尤其是高效液相色譜法是近年來發(fā)展較快一個方法。本文對近年來相關(guān)維生素C測定方法進(jìn)行了綜述。維生素C含量測方法綜述專家講座第1頁關(guān)鍵詞

維生素C滴定法光度分析法高效液相色普法等

維生素C含量測方法綜述專家講座第2頁概述

維生素C是可溶于水無色結(jié)晶，是一個分子結(jié)構(gòu)最簡單維生素。維生素C有防治壞血病功效，所以在醫(yī)藥上常把它叫做抗壞血酸。維生素C能保持巰基酶活性和谷胱甘肽還原狀態(tài)，起解毒作用等。其廣泛存在于植物組織中，新鮮水果、蔬菜，尤其是棗、辣椒、苦瓜、柿子葉、獼猴桃、柑橘等食品中含量尤為豐富。準(zhǔn)確測定維生素C含量，對飲食健康、醫(yī)療保健都含有十分主要意義。近年來報道測定方法主要有滴定法、光度法、高效液相色譜法等。維生素C含量測方法綜述專家講座第3頁維生素C結(jié)構(gòu)式維生素C：六碳多羥基內(nèi)酯維生素C含量測方法綜述專家講座第4頁測定方法滴定法測定維生素C

分光光度測定維生素C

高效液相色譜法測定維生素C

維生素C含量測方法綜述專家講座第5頁1滴定法測定維生素C

1.12，6一二氯靛酚法

1.2微量滴定法維生素C含量測方法綜述專家講座第6頁2,6-二氯酚靛酚滴定法測定維生素C含量其能還原2,6-二氯酚靛酚染料。維生素C含有還原性烯二醇基，我們經(jīng)過氧化還原滴定來測定維生素C維生素C含量測方法綜述專家講座第7頁

——2，6-二氯靛酚法

原理2，6-二氯靛酚是一個染料，其氧化型在酸性介質(zhì)中為紅色，堿性介質(zhì)中為藍(lán)色，與Vc反應(yīng)后，生成無色還原型酚亞胺，所以，在酸性條件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液顯玫瑰紅色，即為終點；無需另加指示劑。維生素C含量測方法綜述專家講座第8頁

——2，6-二氯靛酚法

方法取本品適量（約相當(dāng)于Vc50mg），用適量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸試液20ml,再用水稀釋置刻度，搖勻；精密量取稀釋液適量（約相當(dāng)于Vc2mg）置50ml錐形瓶中,加偏磷酸-醋酸試液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液顯玫瑰紅色,并連續(xù)5s不褪；空白試驗：取偏磷酸-醋酸試液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。計算：(V-V0)×F×T×WW×標(biāo)示量

標(biāo)示量%=反應(yīng)摩爾比１﹕１×100％維生素C含量測方法綜述專家講座第9頁維生素C2,6-二氯酚靛酚維生素C2,6-二氯酚靛酚（還原型）（氧化型，粉紅色）（氧化型）（還原型）++====2,6-二氯酚靛酚染料鈉鹽在水溶液中顯藍(lán)色，在酸性溶液中呈紅色，被還原后紅色消失。維生素C含量測方法綜述專家講座第10頁碘量法原理：因為維生素C分子中烯二醇基有極強(qiáng)還原性，能被碘氧化，用碘滴定VCEC6H6O6/C6H8O6=0.18,EI2/I-=0.535終點：淀粉為指示劑，溶液出現(xiàn)穩(wěn)定藍(lán)色即為終點反應(yīng)式：

維生素C含量測方法綜述專家講座第11頁碘量法碘濃度由已知濃度Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定反應(yīng)式：計算式：Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%維生素C含量測方法綜述專家講座第12頁碘量法注意！測定時：加HAC使溶液呈弱酸性

原因:(1)Vc還原性很強(qiáng)，在空氣中很輕易被氧化，在堿性介質(zhì)中更甚(2)I2在堿性介質(zhì)中會發(fā)生歧化反應(yīng)加HAC可降低VC副反應(yīng)，防止試驗誤差維生素C含量測方法綜述專家講座第13頁電位滴定法原理：依據(jù)滴定過程中電池電動勢改變來確定反應(yīng)終點.Pt為指示電極，甘汞作參比電極E池＝E+-E-+E液接電位＝EI2/I-+k(常數(shù))維生素C含量測方法綜述專家講座第14頁電位滴定法原理(詳細(xì)來說:)伴隨滴定劑加入，因為發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，待測離子濃度將不停改變；從而指示電極電位發(fā)生對應(yīng)改變；造成電池電動勢發(fā)生對應(yīng)改變；計量點附近離子濃度發(fā)生突變；引發(fā)電位突變，所以由測量工作電池電動勢改變就能確定終點。維生素C含量測方法綜述專家講座第15頁電位滴定法右圖：電位滴定法基本儀器裝置計算式：(與碘量法相同)Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%優(yōu)點：處理了滴定分析中碰到有色或渾濁溶液時無法指示終點問題維生素C含量測方法綜述專家講座第16頁2分光光度測定維生素C2.12，4一二硝基苯肼分光光度法2.2鉬藍(lán)比色法2.3其它方法維生素C含量測方法綜述專家講座第17頁2，4一二硝基苯肼分光光度法

原理：維生素C在空氣中尤其在堿性介質(zhì)中極易被氧化成脫氫抗壞血酸反應(yīng)式：

維生素C含量測方法綜述專家講座第18頁2，4一二硝基苯肼分光光度法pH>5,脫氫抗壞血酸內(nèi)環(huán)開裂，形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸維生素C含量測方法綜述專家講座第19頁2,4一二硝基苯肼分光光度法脫氫抗壞血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸脎脎在500nm波長有最大吸收脎結(jié)構(gòu)：維生素C含量測方法綜述專家講座第20頁分光光度法樣品溶液與VC標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述方法一樣處理500nm處測吸光度下列圖：721型分光光度計維生素C含量測方法綜述專家講座第21頁鉬藍(lán)比色法

馬占玲等用鉬藍(lán)比色法測定青椒中還原型維生素C含量基本原理和方法。測定波長839nm，維生素C含量在0．004～0．024mg／mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，回收率為97．2％。該方法簡單、快速、準(zhǔn)確。

維生素C含量測方法綜述專家講座第22頁鉬藍(lán)比色法逯家輝等提出了一個測定維生素C新方法，它是基于FolinB試劑與抗壞血酸在pH=3三氯乙酸酸性介質(zhì)中反應(yīng)生成脫氫抗壞血酸，反應(yīng)產(chǎn)物在910nm波優(yōu)點有最大吸光度進(jìn)行定量分析。該方法線性范圍為0～50．0μg／mL，相關(guān)系數(shù)r=0．99986，回收率為98．12％～102．15％。維生素C含量測方法綜述專家講座第23頁

——差示旋光法原理方法結(jié)果維生素C片在不一樣PH值溶液中旋光度有顯著差異，而片劑輔料旋光度保持不變差示旋光法消除輔料影響，直接測出該制劑含量討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第24頁

——差示旋光法方法TEXT1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制準(zhǔn)確稱取維生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸鈉0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷卻蒸餾水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液。TEXT原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第25頁

——差示旋光法2）比旋光度與溶液pH值關(guān)系量取10.0mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)液于50mL量瓶中,用水稀釋至50mL。測定溶液pH及旋光度,然后逐次分批加入氫氧化鈉固體(每次約50mg),每次溶解后,測定一次溶液pH及其旋光度,得到維生素C溶液pH及旋光度關(guān)系原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第26頁——差示旋光法選定pH為2.2和6.2維生素C含量測方法綜述專家講座第27頁

——差示旋光法2）差示旋光度與溶液濃度關(guān)系吸收2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)液各兩份,分別置于50mL容量瓶,一份用pH2.2鹽酸鹽緩沖液定容；一份用pH6.2磷酸鹽緩沖液定容，靜置3min后,用220mm測定管，以前者為空白，測定后者差示旋光度(△a)。文件結(jié)果：線性方程為△a=0205*C+0．05，r=0．9964原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第28頁——差示旋光法3）輔料干擾試驗取混合輔料20mg(淀粉、硬脂酸鎂、EDTA、糊精等按處方百分比混勻)兩份分別置于50mL容量瓶,一份用pH2.2鹽酸鹽緩沖液定容,一份用pH6.2磷酸鹽緩沖液定容,濾去不溶物,濾液在兩種pH值測定差示旋光度。文件結(jié)果：輔料差示旋光度為零，說明輔料對維生素C含量測定不干擾。原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第29頁

——差示旋光法4）穩(wěn)定性試驗同一測試樣品，在120min內(nèi)，每隔3min測定一次差示旋光度。文件結(jié)果：差示旋光度基本不變原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第30頁

——差示旋光法5）回收率試驗精密稱取維生素C精制品500.0mg兩份，分別置于50mL容量瓶中，各加入20mg輔料，分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液，測定差示旋光度。文件結(jié)果：平均回收率為97.8％，變異系數(shù)cv為1.03％原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第31頁

——差示旋光法方法TEXT6）樣品測定取維生素C片劑10片，稱重研碎后分別用鹽酸鹽緩沖液及磷酸鹽緩沖液配制成50mL溶液(相當(dāng)于含Vc20mg/mL)，濾去不溶物，測定濾液差示旋光度，依據(jù)回歸方程計算其含量。TEXT原理討論方法結(jié)果與維生素C含量測方法綜述專家講座第32頁——差示旋光法方法TEXT1）維生素易被氧化,空氣及水中氧均可使其氧化分解，配制溶液時使用新沸冷卻水,同時加人EDTA作為穩(wěn)定劑；2）樣品測定時，片劑部分物質(zhì)不能完全溶解，必須過濾除去，然后測定濾液差示旋光度。TEXT原理討論方法結(jié)果與維生素C含量測方法綜述專家講座第33頁3高效液相色譜法測定維生素C3.1HYPERSIL—C8色譜柱法3.2VenusilXBP—C18柱法3.3其它方法維生素C含量測方法綜述專家講座第34頁HYPERSIL—C8色譜柱法

采取HYPERSIL—C8色譜柱，用0．1％低濃度草酸作流動相，陳昌云等采取0．05mol／L磷酸二氫鉀緩沖液：甲醇=80：20(v／v)作流動相。流速為1．0mL／min，二極管陣列檢測器，檢測波長為254nm。維生素C含量測方法綜述專家講座第35頁3.2VenusilXBP—C18柱法

系統(tǒng)采取VenusilXBP—C18柱(4．6x250mm，5μg)，用0．2％偏磷酸水溶液作為流動相，流速1ml／min，檢測波長240nm；維生素C濃度在0．1-1．0mg／mL范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。該方法回收率99．89％，標(biāo)準(zhǔn)偏差0．91，操作簡便、靈敏、可靠

維生素C含量測方法綜述專家講座第36頁薄層掃描法原理

維生素C含有較強(qiáng)還原性，可使藍(lán)色染料2，6-二氯靛酚鈉定量地還原成無色酚亞胺，而本身被氧化成去氫抗壞血酸，利用此特征進(jìn)行薄層掃描法測定含量。

維生素C含量測方法綜述專家講座第37頁薄層掃描法操作方法與結(jié)果（1）試紙制備2,6-二氯靛酚鈉(DCP-Na)溶于無水乙醇配成0.05%DCP-Na乙醇溶液，濾紙在盛有DCP-Na乙醇溶液展開缸中浸漬3min，邊浸邊搖展開缸，使濾紙均勻著色，充分被染料溶液所飽和。取出懸掛于暗處，晾干后，馬上放入干燥器中避光保留，備用。維生素C含量測方法綜述專家講座第38頁薄層掃描法（2）緩沖溶液配制

稱取檸檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M氫氧化鈉420ml，并用蒸餾水稀釋至刻度，此溶液pH應(yīng)為3.5。不然，用酸或堿調(diào)整pH值，保留于冰箱中。

維生素C含量測方法綜述專家講座第39頁

薄層掃描法3）掃描條件確定在制備染料試紙上定量點上維生素C對照品進(jìn)行掃描，維生素C在290nm處有最大吸收，420nm處無吸收，故選擇1=290nm，2=420nm．雙波長反射式鋸齒掃描。原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第40頁薄層掃描法4）線性試驗4.1）對照品溶液配制精密稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)品100mg，用緩沖溶液配成lmg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液1、2、3、4、5ml，分別置于10ml容量瓶中，用緩沖溶液稀釋至刻度。4.2）測定用5l定量毛細(xì)管，分別吸收上述溶液各5l，點于試紙上。點樣后晾干，并將試紙固定在20cm×20cm玻璃板上，放入薄層掃描儀。測定△A積分值(峰面積)作為縱坐標(biāo)Y，點樣量為橫坐標(biāo)X，得一直線方程Y=15692X+130225，r=0．9991

原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第41頁

薄層掃描法方法TEXT5）樣品含量測定取維生素C片10片，研細(xì)，精密稱取平均片重一片粉末，放入100ml容量瓶中，加入緩沖液至刻度，振搖，使維生素C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml移至10ml容量瓶中，用緩沖液稀釋至刻度。用5l定量毛細(xì)管點樣品溶液與不一樣濃度標(biāo)準(zhǔn)液于同一試紙上，然后掃描測定峰面積，由工作曲線法計算維生素C片中維生素C含量。TEXT原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第42頁薄層掃描法6）回收率試驗

精密稱取維生素C對照品20mg，其它原輔料適量，置10ml容量瓶中，加緩沖液稀釋至刻度，振搖，濾過，棄初濾液。分別吸收續(xù)濾液與對照品維生素C液各5l點于同一試紙上，按上述條件進(jìn)行掃描測定。維生素C含量測方法綜述專家講座第43頁

薄層掃描法點樣時各點間距應(yīng)大于10mm，掃描測不定時波長可做少許變動，但每次測定必須固定同一測定波長點樣量在3～8l之間線性關(guān)系很好，當(dāng)點樣量為10l，線性關(guān)系較差。

原理方法結(jié)果討論與維生素C含量測方法綜述專家講座第44頁結(jié)束語總之，維生素C測定方法很多，各種方法各有特點，慣用滴定法方法簡單，但在滴定有色物質(zhì)終點不易判斷，分光光度法操作費(fèi)時，高效液相色譜法是當(dāng)前發(fā)展較快一個方法，方法靈敏，選擇性好，有很好發(fā)展前景。毛細(xì)管電泳n51是近幾年新興分析方法，含有效率高、分析時間短、樣品處理簡單等特點，但有待于深入完善。維生素C含量測方法綜述專家講座第45頁參考文件[1]吳春艷．水果中維生素C含量測定及比較[J]．武漢理工大學(xué)學(xué)報，2oo7，29(3)：90—91．[2]王元秀，莊海燕．微量滴定法測定獼猴桃中維生素C含量[J1．濟(jì)南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版，，15(4)：374，[3]張穎，等．不一樣產(chǎn)地枸杞子中維生素C含量測定[J]．中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，，24(8)：500—501．[4]袁葉飛，甄漢深，歐賢紅．分光光度法測定大棗中維生素C含量[J]．安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，，25(2)：40--41．[5]馬占玲，等．青椒中還原型維生素C含量測定[J]．渤海大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，，27(2)：111-113．維生素C含量測方法綜述專家講座第46頁參考文件[6]逯家輝，等．F0linB分光光度法測定蔬菜中維生素C含量[J]．分析檢測，2oo5，26(8)：171—172．[7]王艷穎，等．高效液