新顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用

新顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用第1頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．熟悉顯微鏡的結(jié)構(gòu)和主要功能。2．掌握低倍鏡和高倍鏡的使用方法。3．了解顯微鏡的維護(hù)方法。第2頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六顯微鏡的分類一、光學(xué)顯微鏡；二、電子顯微鏡。第3頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六顯微鏡的分類(一)普通光學(xué)顯微鏡(二)倒置顯微鏡(三)暗視野顯微鏡一、光學(xué)顯微鏡:(四)熒光顯微鏡(五)相差顯微鏡(六)共焦點(diǎn)激光掃描顯微鏡(七)電視顯微鏡第4頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六顯微鏡的分類(一)透射電子顯微鏡(transmissionelectronmicroscope，TEM)

二、電子顯微鏡

(二)掃描電子顯微鏡

(scanningelectronmicroscope,SEM)

(三)掃描隧道電子顯微鏡

（scanningtunnelingmicroscope,STM）

第5頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)內(nèi)容在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)教學(xué)、科研及臨床工作中使用的普通光學(xué)顯微鏡有直立式和傾斜式兩種類型,其結(jié)構(gòu)可分為機(jī)械、照明和光學(xué)三部分。第6頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

一、機(jī)械部分結(jié)

二、照明部分構(gòu)

三、光學(xué)部分第7頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六第8頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六機(jī)械部分（一）鏡座：鏡座是顯微鏡的基座，用以支持和穩(wěn)定鏡體。（二）鏡柱：鏡柱是與鏡座和鏡臂相連的垂直結(jié)構(gòu)。（三）調(diào)焦器：調(diào)焦器位于鏡柱上，呈同心圓式排列,有大小兩種螺旋。調(diào)焦器的功能是調(diào)節(jié)焦距，大螺旋為粗調(diào)焦器,可使鏡臺(tái)較快速度地升降,適于低倍鏡對(duì)焦；小螺旋為細(xì)調(diào)焦器,可使鏡臺(tái)緩慢升降,用作較精細(xì)的調(diào)節(jié)，適于高倍鏡和油鏡的調(diào)焦

第9頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六機(jī)械部分（四）鏡臂：鏡臂位于鏡柱上方，略呈弓形,便于握提的結(jié)構(gòu)。直立式顯微鏡在鏡臂和鏡柱之間有一可動(dòng)關(guān)節(jié)稱為傾斜關(guān)節(jié),使用時(shí)可適當(dāng)傾斜,但傾斜角度不應(yīng)超過(guò)45°,以免顯微鏡翻倒。第10頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六機(jī)械部分（五）鏡筒：鏡筒是位于鏡臂上方的圓筒,上端裝有目鏡,下端連接物鏡轉(zhuǎn)換器。分單筒式和雙筒式兩種。（六）物鏡轉(zhuǎn)換器：物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)盤)裝在鏡筒的下方,呈圓盤狀,下面有3～4個(gè)物鏡孔,可安裝不同放大倍數(shù)的物鏡。換用物鏡時(shí),可轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)盤,注意一定要將旋轉(zhuǎn)盤邊緣上的缺刻和基座上的“T”形卡相扣合,使物鏡與光軸合軸,否則無(wú)法觀察標(biāo)本。第11頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六機(jī)械部分（七）鏡臺(tái)(載物臺(tái))：是位于鏡臂前方的方形或圓形平臺(tái),用以放置玻片標(biāo)本。鏡臺(tái)中央有一通光孔,兩側(cè)有一對(duì)壓片夾,用以固定玻片標(biāo)本。有的顯微鏡裝有推片器,既可固定標(biāo)本,又可前后左右移動(dòng),推片器上有縱橫游標(biāo)尺,可利用游標(biāo)尺上的刻度作為標(biāo)記,以便尋找物像。第12頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六照明部分顯微鏡的照明裝置由光源、反光鏡、集光器和光圈等部分組成。第13頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六照明部分（一）光源:顯微鏡有不帶光源和帶光源的兩類。前者利用自然光源或人工光源照明；后者為電光源照明,電光源燈一般裝在鏡座里或鏡座后的燈殼中,可以使用鏡座側(cè)面的電壓調(diào)節(jié)器,調(diào)節(jié)光源強(qiáng)度。第14頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六照明部分（二）反光鏡:反光鏡(mirror)裝在鏡座上,位于鏡柱的前方,可向各個(gè)方向轉(zhuǎn)動(dòng),把光線反射入聚光鏡。反光鏡的一面是平面鏡，另一面是凹面鏡。平面鏡只有反光作用,一般用于較強(qiáng)光線和固定光源。凹面鏡既有反光作用，也有聚光作用,適用于較弱光和散射光。有時(shí)在使用平面鏡時(shí),視野內(nèi)會(huì)出現(xiàn)窗外景物或窗框等,可下降聚光鏡或使用凹面鏡以消除之。第15頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六照明部分（三）集光器:集光器(condenser)又名聚光器,位于鏡臺(tái)通光孔下方,由一組透鏡組成,可使反光鏡反射來(lái)的光線集中于標(biāo)本上。在鏡柱的左側(cè)面有一集光器升降螺旋,可使集光器升降。集光器上升時(shí)光線增強(qiáng),下降時(shí)光線減弱。第16頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六照明部分（四）光圈:光圈(diaphragm)又叫虹彩光圈或光闌,位于集光器下方,由許多金屬薄片組成。側(cè)面有一光闌小柄,撥動(dòng)小柄可使光圈擴(kuò)大或縮小,以調(diào)節(jié)進(jìn)光量。第17頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六光學(xué)部分光學(xué)部分分為：目鏡(ocular)

、物鏡(objective)。

第18頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六光學(xué)部分（一）目鏡(ocular):為短筒狀，插入鏡筒的上端。目鏡上面刻有10×或15×等符號(hào),表示其放大倍數(shù)。有的目鏡筒內(nèi)有一指針,用以指明視野中觀察物像的部位,以利示范和提問(wèn)。第19頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六光學(xué)部分（二）物鏡(objective):裝在物鏡轉(zhuǎn)換器下方,依放大倍數(shù)不同分為：低倍鏡、高倍鏡和油鏡。低倍鏡短細(xì),鏡孔直徑最大,放大倍數(shù)一般為10×；高倍鏡較長(zhǎng),鏡孔直徑較小,放大倍數(shù)為40×、45×或60×；油鏡最長(zhǎng)，但鏡孔直徑最小,放大倍數(shù)為100×。第20頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六光學(xué)部分通常在物鏡上刻有相應(yīng)的標(biāo)記，如在10倍的物鏡上刻有：10/0.25和160/0.17。10為物鏡放大倍數(shù)；0.25為鏡口率(或N.A.)*；160為鏡筒長(zhǎng)度，0.17為蓋玻片厚度,二者的單位均為毫米。鏡口率又稱數(shù)值孔徑(numerialaperture,簡(jiǎn)寫(xiě)為N.A.)，可以反映物鏡分辨力的大小,數(shù)字越大,表示分辨力越高,一般1O×物鏡的N.A.為0.25；4O×物鏡的N.A.為0.65,100×物鏡的N.A.為1.25等。顯微鏡的總放大倍數(shù)等于目鏡和物鏡放大倍數(shù)的乘積。如:目鏡10×、物鏡100×,其放大倍數(shù)為1O×100=1000倍。第21頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六顯微鏡的使用

在使用顯微鏡時(shí)，應(yīng)右手握鏡臂,左手托鏡座,從鏡盒中取出顯微鏡，輕放在自己座位左前方的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,距離實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣5～6cm處為宜。直立式顯微鏡可使用傾斜關(guān)節(jié),讓鏡筒略向自己傾斜(但不能超過(guò)45°),以便觀察。第22頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一、低倍鏡的使用包括對(duì)光、放片、調(diào)焦。第23頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一、低倍鏡的使用（一）對(duì)光先轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦器,使鏡筒略升高,再旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器,使低倍鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔(可聽(tīng)到輕微的碰撞聲)。然后打開(kāi)光圈,上升集光器,雙眼睜開(kāi),用左眼對(duì)準(zhǔn)目鏡觀察,反復(fù)轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡,直到視野內(nèi)光線明亮均勻?yàn)橹?。?4頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一、低倍鏡的使用（二）放片取一張玻片標(biāo)本,認(rèn)清標(biāo)本的正反面,將正面朝上,用壓片夾或推片器固定。然后調(diào)節(jié)玻片,將要觀察的標(biāo)本對(duì)準(zhǔn)通光孔的中央。第25頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六一、低倍鏡的使用（三）調(diào)焦先從側(cè)面注視低倍鏡,轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦器,使低倍鏡距玻片標(biāo)本約0.5cm。然后用左眼觀察視野,向相反的方向緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦器,使低倍鏡慢慢上升,當(dāng)視野中出現(xiàn)物像時(shí),再用細(xì)調(diào)焦器調(diào)節(jié),直到物像清晰為止。如果在調(diào)節(jié)焦距時(shí),物鏡與標(biāo)本之間的距離已超過(guò)工作距離(指顯微鏡物像調(diào)節(jié)清晰時(shí),物鏡最下面透鏡的表面與蓋玻片上表面的距離)仍未見(jiàn)到物像,則應(yīng)該嚴(yán)格按上述步驟重新操作。如果物像不在視野中央,可前后左右移動(dòng)標(biāo)本,注意玻片移動(dòng)的方向與物像移動(dòng)的方向相反。如果光線太強(qiáng)或太弱,可慢慢地縮小或擴(kuò)大光圈；也可下降或上升集光器,找到最合適的光亮度。你會(huì)發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的光線不一定是最合適的。第26頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二、高倍鏡的使用（一）在低倍鏡下找到物像后,將要放大觀察的部分移至視野正中央,并調(diào)節(jié)清晰。（二）從側(cè)面注視,移走低倍鏡轉(zhuǎn)換高倍鏡。（三）從目鏡中觀察,可見(jiàn)視野中有不太清晰的物像,此時(shí)慢慢地轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦器,即可見(jiàn)到清晰的物像。注意使用高倍鏡時(shí),不要隨意轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦器,以免鏡筒下降幅度大而損壞標(biāo)本或鏡頭。第27頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六二、高倍鏡的使用如果按上述操作看不到物像,應(yīng)該檢查可能的原因：①目的物不在視野中,是否由于低倍鏡下沒(méi)有將其移至視野正中；②低倍鏡的焦距是否調(diào)好,玻片標(biāo)本是否放反；③物鏡是否松動(dòng)或有污物等。第28頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六三、油鏡的使用（一）一定要在高倍鏡下,將擬用油鏡觀察的目的物移至視野正中央。（二）光圈開(kāi)大,集光器上升到最高位置。（三）旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器,使高倍鏡轉(zhuǎn)開(kāi),眼睛注視側(cè)面,在欲觀察玻片標(biāo)本的部位上滴一滴香柏油，轉(zhuǎn)換油鏡，使油鏡頭與香柏油接觸。第29頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六三、油鏡的使用（四）從目鏡觀察,同時(shí)慢慢上下轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦器,直至出現(xiàn)清晰的物像。油鏡用完后,必須把鏡頭和標(biāo)本片上的香柏油擦干凈。先用拭鏡紙蘸少許擦鏡油將香柏油擦去后,再用干凈拭鏡紙擦凈。無(wú)蓋片的標(biāo)本不能擦,以免損壞標(biāo)本。臨時(shí)制片因有水分,不宜用油鏡觀察。第30頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六標(biāo)本的觀察與操作練習(xí)取家兔肌肉、肝臟、脾臟及腎組織切片,按照上述顯微鏡的正確使用方法,反復(fù)練習(xí)低倍鏡和高倍鏡的使用,以便較熟練地掌握顯微鏡的正確使用方法,為以后的實(shí)驗(yàn)打好基礎(chǔ)。第31頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六使用顯微鏡的注意事項(xiàng)1．取放顯微鏡時(shí),一定要一手握鏡臂,一手托鏡座,切勿單手斜提,以免碰壞顯微鏡或造成零部件脫落。2．顯微鏡不可放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣,以防碰翻落地。3．使用前要檢查,如發(fā)現(xiàn)缺損,或使用時(shí)損壞,應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師。第32頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六使用顯微鏡的注意事項(xiàng)4．放置玻片標(biāo)本時(shí),應(yīng)將有蓋片的一面向上,否則使用高倍鏡和油鏡時(shí)，將找不到物像,同時(shí)又易損壞玻片標(biāo)本和鏡頭；臨時(shí)制片要加蓋片,由于含有水分,易于流動(dòng),鏡臺(tái)須平放。觀察永久玻片標(biāo)本時(shí),傾斜關(guān)節(jié)不得超過(guò)45°，若因事需離開(kāi)座位,必須將傾斜關(guān)節(jié)復(fù)原。5．不得隨意取出目鏡或拆卸零部件,以防灰塵落入或丟失損壞等。第33頁(yè)，共35頁(yè)，2023年，2月20日，星期六使用顯微鏡的注意事項(xiàng)6．使用顯微鏡時(shí),應(yīng)該養(yǎng)成正規(guī)操作