微生物實(shí)驗(yàn)講稿

微生物實(shí)驗(yàn)講稿第1頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)一、培養(yǎng)基的制備技術(shù)

第2頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握培養(yǎng)基制備的基本過程。2.熟悉常用培養(yǎng)基的種類及用途。第3頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六器材和試劑1.試劑

營養(yǎng)瓊脂干粉、半固體培養(yǎng)基干粉營養(yǎng)肉湯干粉1mol/L氫氧化鈉、1mol/L鹽酸。2.器材

三角燒瓶、量筒、吸管、蒸餾水、精密PH試紙、試管（帶塞）、天平高壓滅菌器、酒精燈、無菌平皿等。第4頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六步驟和方法1.培養(yǎng)基制備的基本過程：1).調(diào)配成分：根據(jù)配制培養(yǎng)基的量，量取一定量的蒸餾水，先倒部分水于燒杯或三角燒瓶中,再按培養(yǎng)基說明稱取各成分置于容器內(nèi)，充分混勻，最后補(bǔ)足水分2).溶解→電爐加熱3).校正PH：7.2—7.64).澄清過濾5).分裝

★斜面和半固體：1/4～1/3試管量

★高層：2/3試管量

★瓊脂平板：3mm～4mm厚度第5頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六6).滅菌

◆高壓蒸汽滅菌→耐熱，121℃,20分鐘◆流通蒸汽滅菌→不耐熱◆血清凝固器滅菌→富含蛋白質(zhì)◆過濾除菌→不耐熱的營養(yǎng)豐富的液體

7).

質(zhì)量檢驗(yàn)：無菌試驗(yàn)和效果試驗(yàn)8).保存：普通冰箱冷藏第6頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六2.常用培養(yǎng)基

1）營養(yǎng)肉湯：適用于營養(yǎng)要求一般的細(xì)菌。2）營養(yǎng)瓊脂（普通瓊脂）：可制作平板和斜面。用途：作無糖基礎(chǔ)用。適用于營養(yǎng)要求一般的細(xì)菌。3）半固體培養(yǎng)基：用途：觀察動力和保存菌種。4）血瓊脂培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂中加入無菌脫纖維血液5%～8%，制成平板或斜面。用途：用于營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌培養(yǎng)。5)巧克力瓊脂平板：用途：主要用于苛養(yǎng)菌培養(yǎng)。6）麥康凱瓊脂平板第7頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六酒精燈火焰第8頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六平板傾注方法第9頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六3.注意事項(xiàng)

1)培養(yǎng)基的調(diào)配與溶解

2)水的加入過程

3)容器的選擇

4)培養(yǎng)基的澆注

★平皿的打開程度

★培養(yǎng)基的澆注溫度及環(huán)境第10頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.培養(yǎng)基制備的基本過程：1).調(diào)配成分：根據(jù)需配制培養(yǎng)基的量，量取一定量的蒸餾水，先倒部分水于燒杯或三角燒瓶中，再按培養(yǎng)基處方量稱取各成分置于容器內(nèi)，充分混勻，最后補(bǔ)足水分。2).溶解電爐加熱3).校正PH：7.2—7.64）分裝★營養(yǎng)肉湯：每管3ml→分裝后高壓滅菌★半固體：試管高度的1/4～1/3→分裝后高壓滅菌取出直立★斜面：試管高度的1/4～1/3→分裝后高壓滅菌，取出后擺成斜面★瓊脂平板：厚3mm～4mm→高壓滅菌后冷至50℃傾注平板5).滅菌：高壓蒸汽滅菌→121℃20分鐘。2.配制說明：

培養(yǎng)基以一個大組為單位進(jìn)行配制，每人保證一份，兩種固體培養(yǎng)基一塊配制，先分裝斜面，剩余高壓滅菌后傾注平板。第11頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)二、細(xì)菌培養(yǎng)與接種技術(shù)

第12頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握常用培養(yǎng)基的接種方法。2.掌握無菌操作的要領(lǐng)。3.熟悉接種工具的用途、使用方法和對接種環(huán)境的要求。第13頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

器材和試劑1.菌種：

金黃色葡萄球菌

肺炎克雷伯菌

大腸埃希菌銅綠假單胞菌

乙型溶血性鏈球菌

枯草芽孢桿菌2.培養(yǎng)基：營養(yǎng)肉湯、半固體培養(yǎng)基、瓊脂平板、瓊脂斜面血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板。3.其它：接種環(huán)、接種針、酒精燈等。第14頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

步驟和方法1.接種工具2.接種環(huán)境3.接種方法→接種前首先檢查培養(yǎng)基的外觀，其次在培養(yǎng)基上進(jìn)行標(biāo)識。

①傾注法

②液體接種法③半固體接種法④斜面接種法⑤平板接種法a連續(xù)劃線法b分區(qū)劃線法c棋盤格劃線法d涂抹法e自動接種儀接種法

第15頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六4.細(xì)菌培養(yǎng)的方法

①需氧培養(yǎng)法②厭氧培養(yǎng)法③二氧化碳培養(yǎng)法

④微需氧培養(yǎng)法5.培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)基置于35℃培養(yǎng)箱中孵育18～24h，取出觀察并進(jìn)一步檢驗(yàn)。第16頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六接種環(huán)圖片

接種環(huán)（針）示意圖鉑絲→鎳絲第17頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

酒精燈使用方法第18頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

電子滅菌器第19頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六分區(qū)劃線分離法及培養(yǎng)后菌落分布示意圖第20頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六穿刺接種方法第21頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六斜面接種方法第22頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六液體培養(yǎng)基接種方法第23頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第24頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第25頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.菌種：

金黃色葡萄球菌肺炎克雷伯菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌乙型溶血性鏈球菌（A群鏈球菌）枯草芽孢桿菌2.接種方法

血平板→三分區(qū)劃線，接種金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌。營養(yǎng)瓊脂平板→三分區(qū)劃線，接種金葡和銅綠假單胞菌。

麥康凱平板→三分區(qū)劃線，接種大腸、銅綠、金葡和A鏈。

斜面→連續(xù)劃線（密而不重），接種銅綠假單胞菌。半固體→穿刺（需一次進(jìn)行），接種大腸埃希菌和肺克。液體培養(yǎng)基→接種金葡、A群鏈球菌和枯草芽孢桿菌。3.培養(yǎng)方法：需氧培養(yǎng)4.達(dá)到目的：掌握各種接種方法及無菌操作要領(lǐng)，

樹立和牢記無菌操作的意識。第26頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六實(shí)驗(yàn)三、細(xì)菌生長現(xiàn)象觀察與革蘭染色

第27頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握觀察及描述細(xì)菌菌落的方法。2、掌握細(xì)菌涂片的制作過程及革蘭染色的原理方法和細(xì)菌形態(tài)觀察。3、熟悉細(xì)菌在各種培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象及意義。第28頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六器材和試劑1.菌種：同實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基：同實(shí)驗(yàn)二

試劑：革蘭染液、無菌生理鹽水。4.其它：載玻片、顯微鏡、酒精燈等第29頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六步驟和方法1、細(xì)菌生長現(xiàn)象的觀察

1）固體培養(yǎng)基a平板培養(yǎng)基：菌落描述：顏色、大小、表面、邊緣、濕潤程度溶血現(xiàn)象、色素、特殊氣味等。b斜面培養(yǎng)基：觀察菌苔特征。

2)液體培養(yǎng)基：混濁生長、沉淀生長和表面生長。3)半固體培養(yǎng)基：觀察細(xì)菌是否有動力。第30頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六2、細(xì)菌涂片的制作過程涂片→→→干燥→→→固定3、革蘭染色的原理

1）細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)學(xué)說2）細(xì)菌等電點(diǎn)學(xué)說3）化學(xué)學(xué)說→→→核糖核酸鎂鹽4、革蘭染色的方法初染→→→媒染→→→脫色→→→復(fù)染

一紫二碘三酒精第四復(fù)紅皆水沖時間要看說明書陰性菌紅陽性紫5、染色結(jié)果的觀察：要求繪圖。6、影響染色結(jié)果的因素

1)操作因素2)染液因素3)細(xì)菌因素第31頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六菌落形態(tài)示意圖第32頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第33頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第34頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第35頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第36頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六沙雷菌色素第37頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六麥康凱上發(fā)酵乳糖第38頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六麥康凱上不發(fā)酵乳糖第39頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第40頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第41頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第42頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第43頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第44頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第45頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第46頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六第47頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六細(xì)菌動力結(jié)果第48頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長特征第49頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

革蘭染色過程第50頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

金葡和大腸埃希菌第51頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

金黃色葡萄球菌第52頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

鏈球菌第53頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

革蘭陰性桿菌第54頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

革蘭陽性桿菌第55頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六革蘭陰性雙球菌第56頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

大腸埃希菌（潰瘍性結(jié)腸炎）第57頁，共58頁，2023年，2月20日，星期六

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、細(xì)菌生長現(xiàn)象的觀察

1）固體培養(yǎng)基a平板培養(yǎng)基：對血平板和營養(yǎng)瓊脂平板和麥康凱平板上的菌落分別描述。菌落描述：顏色、大小、表面、邊緣、濕潤程度、溶血現(xiàn)象、特殊氣味、色素等。b斜面培養(yǎng)基：觀察菌苔特征并描述，