食品中脂肪酸的測定方法(食品安全國家標(biāo)準(zhǔn))

4食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中脂肪酸含量的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中脂肪酸含量的測定。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中總脂肪、飽和脂肪〔酸、不飽和脂肪〔酸〕含量的測定。第一法內(nèi)標(biāo)法原理參加內(nèi)標(biāo)物的樣品經(jīng)水解-酯，經(jīng)毛細(xì)管氣相色譜分析，內(nèi)標(biāo)法定量測定脂肪酸甲酯含量。依據(jù)各種脂肪酸甲酯含量和轉(zhuǎn)換系數(shù)計算出總脂肪、飽和脂肪〔酸、單不飽和脂肪〔酸、多不飽和脂肪〔酸〕含量。試劑和材料注：除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑3.1.13.1.23.1.33.1.43.1.53.1.63.1.73.1.8

鹽酸(HCl)。氨水(NH·HO)。3 2焦性沒食子酸(CHO)。6 6 3乙醚(CH O)。4 10石油醚：沸程30℃~60℃。乙醇(CHO)(95%)。2 6甲醇(CHOH)：色譜純。3氫氧化鈉NaO。3.1.9

正庚烷[CH(CH)CH]：色譜純。3 25 3三氟化硼甲醇溶液，濃度為15%。無水硫酸鈉(NaSO)。2 4氯化鈉(NaCl)。試劑配制鹽酸溶液8.3mol/250m鹽酸，用110m個月。乙醚石油醚混合液〔1:：取等體積的乙醚和石油醚，混勻備用。氫氧化鈉甲醇溶液22100m甲醇中，混勻。飽和氯化鈉溶液：稱取360g氯化鈉溶解于1.0L水中，攪拌溶解，澄清備用。標(biāo)準(zhǔn)品3.3.13.3.23.3.3

十一碳酸甘油三酯?；旌现舅峒柞?biāo)準(zhǔn)溶液〔37種。單個脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)：丁酸甲酯C4:0〔CH O〕CASNO.623-42-7；5 10 2己酸甲酯C6:0〔CH O〕CASNO.106-70-7；7 14 2辛酸甲酯C8:0〔CH O〕CASNO.111-11-5；9 18 2癸酸甲酯C10:0〔CH11

O〕CASNO.110-42-9；22 2十一烷酸甲酯C11:0〔C H O〕CASNO.1731-86-8；12 24 2月桂酸甲酯C12:0〔C H O〕CASNO.111-82-0；13 26 2十三烷酸甲酯C13:0〔C H O〕CASNO.1731-88-0；14 28 2肉豆蔻酸甲酯C14:0〔C H O〕CASNO.124-10-7；15 30 2肉豆蔻腦酸甲酯C14:1〔C H O〕CASNO.56219-06-8；15 28 2十五烷酸甲酯C15:0〔C H O〕CASNO.7132-64-1；16 32 2順-10-十五碳烯酸甲酯C15:1〔C H O〕CASNO.90176-52-6；16 30 2棕櫚酸甲酯C16:0〔C H O〕CASNO.112-39-0；17 34 2棕櫚油酸甲酯C16:1〔C H O〕CASNO.1120-25-8；17 32 2十七烷酸甲酯C17:0〔C H O〕CASNO.1731-92-6；18 36 2順-10-十七碳烯酸甲酯C17:1〔C H O〕CASNO.75190-82-8；18 34 2硬脂酸甲酯C18:0〔C H O〕CASNO.112-61-8；19 38 2反油酸甲酯C18:1n9t(C H O)CASNO.1937-62-8；19 36 2油酸甲酯C18:1〔C H O〕CASNO.112-62-9；19 36 2反亞油酸甲酯C18:2n6t〔C H O〕CASNO.2566-97-4；19 34 2亞油酸甲酯C18:2n6c〔C H O〕CASNO.112-63-0；19 34 2亞麻酸甲酯C18:3n6〔C H O〕CASNO.16326-32-2；19 32 2花生酸甲酯C20:0〔C H O〕CASNO.1120-28-1；21 42 2順-11-二十碳烯酸甲酯C20:1〔C H O〕CASNO.2390-09-2；20 38 2亞麻酸甲酯C18:3n3〔C H O〕CASNO.301-00-8；19 32 2山崳酸甲酯C22:0〔C H O〕CASNO.929-77-1；23 46 2二十一烷酸甲酯C21:0(C H O)CASNO.6064-90-0；22 44 2順-11,14-二十碳二烯酸甲酯C20:2(C H O)CASNO.2463-02-7；21 38 2順-8,11,14-二十碳三烯酸甲酯C20:3n6(C H O)CASNO.21061-10-9；21 36 2順芥子酸甲酯C22:1n9(C H O)CASNO.1120-34-9；23 44 2順-11,14,17-二十碳三烯酸甲酯C20:3n3(C H O)CASNO.55682-88-7；21 36 2花生四烯酸甲酯C20:4n6(C H 21 34

)CASNO.2566-89-4；2二十三碳酸甲酯C23:0(C H O)CASNO.2433-97-8；24 48 2順-13,16-二十二碳二烯酸甲酯C22:2(C H O)CASNO.61012-47-3；23 42 2木蠟酸甲酯C24:0(C H O)CASNO.2442-49-1；25 50 2順-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸甲酯C20:5(C H O)CASNO.2734-47-6；21 32 2神經(jīng)酸甲酯C24:1(C H O)CASNO.2733-88-2；25 48 2順-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯C22:6(C H O)CASNO.2566-90-7。23 34 2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制十一碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)溶液5.00mg/m2.5〔0.1m〕十一碳酸甘油三酯至燒杯中，參加甲醇溶解，移入500mL容量瓶后用甲醇定容，在冰箱中冷藏可保存一個月。單個脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液：將3.3.3中單個脂肪酸甲酯分別從安瓿瓶中取出轉(zhuǎn)移到10mL容量瓶中，〔37種10mL容量瓶中，A，參考保存時間參見附錄B。儀器設(shè)備氣相色譜儀：具有氫火焰離子檢測器FI。色譜柱：毛細(xì)管色譜柱100×0.25m，0.2。4.3恒溫水?。嚎販胤秶?0℃～100℃，控溫±1℃。分析天平：感量0.1mg。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。分析步驟試樣的制備在采樣和制備過程中，應(yīng)避開試樣污染。糧食、豆類去雜物后，磨碎，儲于塑料瓶中，保存?zhèn)溆?。儲于塑料瓶中，?zhǔn)時稱取測定。飲料、酒、醋、醬油、油脂等液體試樣，可直接取樣測定。試樣前處理樣品的稱取0.1g~5g〔0.1mg100mg~200mg〕250mL平底燒瓶中，2mL100mg2mL95%4mL水，混勻。依據(jù)樣品的類別選取相應(yīng)的水解方法。注：C11:0，C13:0，C19:0，C23:0C11:0內(nèi)標(biāo)為例進(jìn)展說明。樣品的水解酸水解法10mL70℃~8040min10min振蕩10mL95%乙醇，混勻。堿水解法乳制品：參加氨水(3.1.2)5mL，混勻。將燒瓶放入70℃~8020min。每隔5min振蕩10mL95%乙醇，混勻。酸堿水解法25%5mL，混勻。將燒瓶放入70℃~8020min10min振蕩10mL20min，每隔10min振蕩一下燒瓶，使黏附在燒瓶壁上的顆粒物混入溶液中。水解完成后，取出燒瓶冷卻至室溫。最終參加10mL95%乙醇，混勻。脂肪提取〔5.2.1.1.15.2.1.1.25.2.1.1.3〕50mL乙醚沖洗燒瓶，用乙醚石油醚混合液沖洗燒瓶塞子，沖洗液并入分液漏斗中，加蓋，振搖5min，靜置10min250mL250mL燒瓶中后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，殘留物為脂肪提取物。脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化250mL2%8mL80℃水浴上回7mL15%80℃水浴中連續(xù)回流2min；用去離子水沖洗回流冷凝器。停頓加熱，從水浴上取下燒瓶，快速冷卻至室溫，準(zhǔn)確參加10mL~30mL正庚烷，振搖2min，再參加飽和氯化鈉水溶液，靜置分層，吸取上層正庚烷提取溶液大約5mL，轉(zhuǎn)移30mL3g~5g1min5min，吸取上層溶液到進(jìn)樣瓶中待測定。食用油試樣不經(jīng)脂肪提取，參加內(nèi)標(biāo)后，直接進(jìn)展皂化和脂肪酸甲酯化。測定色譜測定：取脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和各單個脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液分別注入氣相色譜儀，對色譜峰進(jìn)展定性。參考脂肪酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)液氣相色譜圖，見附錄A。色譜參考條件色譜柱：毛細(xì)管色譜柱(聚二氰丙基硅氧烷強(qiáng)極性固定相)(100m×0.25mm，0.2μm)。進(jìn)樣器溫度：270℃。檢測器溫度：280℃。10013min；10℃/min180℃，保存6min；1℃/min20020min；4℃/min23010.5min，3min檢測完畢。載氣：氮?dú)?。分流比?00:1。進(jìn)樣體積：1.0μL。試樣測定試樣溶液的測定在上述色譜條件下將脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)測定液及試樣測定液分別注入氣相色譜儀，平行測定次數(shù)不少于兩次，以色譜峰峰面積定量。計算樣品中單個脂肪酸甲酯含量〔Xi〕以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)〔%〕表示，按公式〔1〕計算。CX F Ai Cii

c VCC11 CC

100 ……〔1〕式中：

i A m11X樣品中脂肪酸甲酯i含量，克每百克Fi——i的響應(yīng)因子；Ai——i的峰面積；A ——樣品中參加的內(nèi)標(biāo)物十一碳酸甲酯峰面積；C11c 十一碳酸甘油三酯濃度，毫克每毫升mg/m；C11V 樣品中參加十一碳酸甘油三酯體積，毫升m；C111.0067——十一碳酸甘油三酯轉(zhuǎn)化成十一碳酸甲酯的轉(zhuǎn)換系數(shù)；m樣品的質(zhì)量，毫克m。iiF按式〔2〕計算。i式中：

FcA A csi11

Asi 11

……………〔2〕Fi——i的響應(yīng)因子；Sic混標(biāo)中各脂肪酸甲酯i的濃度，毫克每毫升mg/m；SiA ——十一碳酸甲酯峰面積；11Asi——i的峰面積；c 混標(biāo)中十一碳酸甲酯濃度，毫克每毫升mg/m。11樣品中總脂肪含量〔包括全部順式和反式脂肪酸構(gòu)型〕樣品中總脂肪含量〔X

〕以g/100g表示，等于各種脂肪酸甘油三酯含量的總和，各種脂肪酸甘TotalFat油三酯含量等于脂肪酸甲酯含量與脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成甘油三酯系數(shù)的乘積〔3〕計算。XTotalFat

Xi

FiTGi

…………..………〔3〕式中：X ——樣品中總脂肪含量，g/100g；TotalFatXi——i含量，g/100g；FFAMEi-TGi——i轉(zhuǎn)化成甘油三酯的系數(shù)。各種脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成甘油三酯的系數(shù)參見附錄C。脂肪酸甲酯i轉(zhuǎn)化成為脂肪酸甘油三酯的系數(shù)按式〔4〕計算。F

M

1/3

…………〔4〕FAMETG Mi iFAMEi式中：F ——i轉(zhuǎn)化成為脂肪酸甘油三酯的系數(shù)；FAMEi-TGiM ——i的分子質(zhì)量；TGiM ——i的分子質(zhì)量。FAMEi樣品中飽和脂肪〔酸〕含量樣品中飽和脂肪〔酸〕含量〔X 〕以g/100g表示，等于各種單飽和脂肪酸含量總和。各種SaturatedFat單飽和脂肪酸含量等于單個飽和脂肪酸甲酯含量與脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)乘積。樣品中飽和脂肪〔酸〕含量按公式〔5〕計算。X SaturatedFat

XSFAi

…………….(5)XSFAi

XFAME

Fii FAMEiSFAi

…………………(6)式中：XSFAi——各種單飽和脂肪酸含量，g/100g；X——單個飽和脂肪酸甲酯含量，g/100g；XFAMEiF——脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)。FFAMEi-FAiFFAMEi-FAiCi轉(zhuǎn)化成為脂肪酸的系數(shù)依據(jù)公式〔7〕計算。FMFFAiFAMEFA M

……….…….…….(7)式中：

i iFAMEiF——脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的轉(zhuǎn)換系數(shù)；FFAMEi-FAiM ——i的分子質(zhì)量；FAiM M FAMEi樣品中單不飽和脂肪〔酸〕含量樣品中單不飽和脂肪〔酸〕含量XMono-UnsaturatedFat〕以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)〕表示，等于每個單不飽和脂肪酸含量總和，單不飽和脂肪酸含量等于樣品中每種單不飽和脂肪酸甲酯每百克含量與脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)換為脂肪酸的系數(shù)乘積。樣品中單不飽和脂肪〔酸〕含量按公式〔8〕和公式〔9〕計算。XMonoUnsaturatedFat

X

MUFAi

….…….(8)X X

……………….(9)MUFAi

FAMEi

FAMEiFAiX——樣品中每種單不飽和脂肪酸含量，g/100g；XMUFAiX——單不飽和脂肪酸甲酯含量，g/100g；XFAMEiF F FAMEi-FAiFFAMEi-FAi參見附錄C。樣品中多不飽和脂肪〔酸〕含量X樣品中多不飽和脂肪〔酸〕含量〔 〕以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)〔%〕表示，多不飽和脂肪〔酸〕XPoly-UnsaturatedFat含量等于每個多不飽和脂肪酸含量總和，單個多不飽和脂肪酸含量等于多不飽和脂肪酸甲酯含量與脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)換為脂肪酸的系數(shù)。樣品中多不飽和脂肪〔酸〕含量按公式〔10〕和公式〔11〕計算。X

X

PUFAi

……………〔10〕XPUFAi

XFAMEi

FFAMEiFAi

.…….………〔11〕式中：X——樣品中每種多不飽和脂肪酸含量，g/100g；XPUFAiX——多不飽和脂肪酸甲酯含量，g/100g；XFAMEF——脂肪酸甲酯轉(zhuǎn)化成脂肪酸的系數(shù)。FFAMEi-FAiFFAMEi-FAi參見附錄C。其次法外標(biāo)法原理水解提取法：樣品經(jīng)水解乙醚溶液提取其中的脂肪后，在堿性條件下皂化和甲酯化，生成脂肪轉(zhuǎn)換系數(shù)計算出總脂肪、飽和脂肪〔酸、單不飽和脂肪〔酸、多不飽和脂肪〔酸〕含量。乙酰氯甲醇法：乙酰氯與甲醇反響得到的鹽酸-甲醇使試樣中的脂肪和游離脂肪酸甲酯化，用甲脂肪、飽和脂肪〔酸、單不飽和脂肪〔酸、多不飽和脂肪〔酸〕含量。試劑和材料注：除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑7.1.17.1.27.1.37.1.47.1.57.1.67.1.77.1.8

鹽酸(HCl)。氨水(NH·HO)。3 2焦性沒食子酸(CHO)。6 6 3乙醚(CH O)。4 10石油醚：沸程30℃~60℃。乙醇(CHO)(95%)。2 6甲醇(CHOH)：色譜純。3氫氧化鈉NaO。7.1.9

正庚烷[CH(CH)CH]：色譜純。3 25 3三氟化硼甲醇溶液，濃度為15%。無水硫酸鈉(NaSO)。2 4氯化鈉(NaCl)。無水碳酸鈉(NaCO)。2 3甲苯(C?H?)：色譜純。乙酰氯(CHClO)。2 3試劑配制7.2.1 鹽酸溶液8.3mol/3.2.。乙醚石油醚混合液〔1:3.2.。氫氧化鈉甲醇溶液23.2.。飽和氯化鈉溶液：同3.2.4。乙酰氯甲醇溶液〔1040m甲醇于100m5.0mL乙酰氯逐滴緩慢參加，不斷攪拌，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移并定容至50mL枯燥的容量瓶中。臨用前配制。注：乙酰氯為刺激性試劑，配制乙酰氯甲醇溶液時應(yīng)不斷攪拌防止噴濺，留意防護(hù)。中。

碳酸鈉溶液：稱取6g無水碳酸鈉于100mL燒杯中，加水溶解，轉(zhuǎn)移并用水定容至100mL容量瓶標(biāo)準(zhǔn)品混合脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液〔37種。單個脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)：同3.3.3。脂肪酸甘油三酯