(31)-7.3滅菌與無菌操作講稿

7.2滅菌與無菌操作同學(xué)們好，我們開始學(xué)習(xí)滅菌與無菌操作部分學(xué)習(xí)要求：熟悉一些滅菌與無菌操作的相關(guān)概念。掌握滅菌與無菌操作的方法及分類。滅菌和無菌制劑主要應(yīng)用于注射或傷口，可直接注入人體血液循環(huán)或特定的組織器官，因此滅菌與無菌制劑對無菌無熱原的要求非常嚴(yán)格。比如說常用的注射劑、眼用制劑等都要求無菌。這些制劑要做到制備工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可靠，還應(yīng)該使產(chǎn)品在使用前始終處于無菌狀態(tài)，以保證藥物的安全使用。因此，滅菌和無菌操作技術(shù)在滅菌和無菌制劑質(zhì)量控制中非常重要，是必不可少的環(huán)節(jié)。在了解滅菌和無菌操作技術(shù)之前，我們先了解幾個相關(guān)概念。滅菌的概念：是用恰當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)等手段，殺滅或除去所有致病和非致病微生物繁殖體和芽孢的手段。無菌的概念：是指在指定的物體介質(zhì)或環(huán)境中，不得存在任何活的微生物。無菌講的是一個狀態(tài)，滅菌是一種手段。滅菌和無菌操作的主要目的是殺滅或除去微生物的繁殖體或芽孢，最大限度地提高藥物制劑的安全性，保證制劑的臨床療效。因此，研究選擇有效的滅菌方法對保證產(chǎn)品質(zhì)量有重要意義。滅菌和無菌操作的定義可概括為：用物理或化學(xué)方法殺滅或除去物體上或物品中活的微生物，包括繁殖體和芽孢，或利用與控制一定條件，避免被微生物污染的方法與技術(shù)。微生物的種類不同，滅菌方法也不同，滅菌效果也會有所差異。一些細(xì)菌的芽孢具有較強的抗熱能力，因此，滅菌效果常常以殺滅芽孢為準(zhǔn)。滅菌過程只是一個統(tǒng)計學(xué)意義的現(xiàn)象，保證絕對無菌狀態(tài)是非常困難的。在實際生產(chǎn)過程中，以最終無菌產(chǎn)品的微生物存活概率作為評價滅菌效果的一個指標(biāo)，稱為無菌保證水平，用SAL表示。實際過程中要求SAL小于等于10的負(fù)6次方，也就是一百萬件產(chǎn)品中可能出現(xiàn)活微生物的產(chǎn)品的幾率小于或等于一件。藥劑學(xué)中把滅菌方法分為三大類：有物理滅菌法、化學(xué)滅菌法和無菌操作技術(shù)。這個結(jié)構(gòu)圖囊括了藥劑學(xué)中常用的滅菌方法。其中，濕熱滅菌是需要重點掌握的內(nèi)容。物理滅菌法是采用物理手段，如加熱、射線或過濾等，殺滅或除去微生物的技術(shù)。干熱滅菌有火焰滅菌和干熱空氣滅菌，可進(jìn)行干熱滅菌的物品需耐熱：如金屬、玻璃和瓷器等，對溫度要求高，不適用于橡膠、塑料和大部分藥品。流通滅菌法是采用100攝氏度流通蒸汽加熱殺滅微生物的方法，不如熱壓滅菌可靠。滅菌時間通常為30到60分鐘，該法不能保證殺滅所有的芽孢，一般作為不耐熱無菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段。煮沸滅菌法是對注射器或針頭等進(jìn)行滅菌。低溫間歇滅菌是對熱敏感的制劑所采用的方法。此外，還可加入一些滅菌劑。熱壓滅菌法是最為常用和可靠的方法。原理是以穿透力最強的高壓飽和水蒸汽為熱源，以較大的蒸汽潛熱和較強的穿透力，使蛋白質(zhì)變性或凝固。特點是：滅菌可靠，能殺滅所有細(xì)菌繁殖體和芽孢。適用范圍較廣，可對耐高溫和耐高壓蒸汽的藥物制劑、玻璃、金屬容器、瓷器、橡膠塞和濾膜過濾器等進(jìn)行滅菌。影響熱壓滅菌的因素主要有，1.微生物的種類與數(shù)量：微生物種類不同，發(fā)育階段不同，耐熱和耐壓能力也不同。在不同的繁殖期，耐熱耐壓順序一般為：芽孢大于繁殖體，大于衰老體。2.蒸汽性質(zhì)影響：蒸汽有飽和蒸汽、濕飽和蒸汽和過熱蒸汽，飽和蒸汽含熱量最高、穿透力強、滅菌效力最高。濕飽和蒸汽由于含有水分，熱含量較低，穿透力弱，滅菌效率稍微差一些。3.滅菌溫度與時間：一般而言，滅菌溫度越高，滅菌時間越長，藥物被破壞的可能性越大。因此，在設(shè)計滅菌溫度和時間的時候，必須考慮藥品的穩(wěn)定性，在達(dá)到滅菌的前提下，盡可能降低滅菌溫度，縮短滅菌時間，這也是我們滅菌的原則。4.液體介質(zhì)的性質(zhì)：一般在中性環(huán)境中，微生物耐熱能力最強，在堿性環(huán)境下次之，在酸性環(huán)境下不利于微生物的生長發(fā)育。5.營養(yǎng)程度：在營養(yǎng)程度豐富的介質(zhì)中，微生物的抗熱能力增強，應(yīng)該適當(dāng)提高滅菌溫度和延長滅菌時間。在使用熱壓滅菌時應(yīng)注意：必須使用飽和蒸汽；必須排盡滅菌柜內(nèi)的空氣；以全部藥液溫度達(dá)到所要求溫度時開始計時；滅菌完成后，應(yīng)先停止加熱，溫度降至安全范圍后，逐漸減壓使柜內(nèi)壓力與大氣壓相等，再稍稍打開滅菌柜，10～15min后方可全部打開。過濾除菌也稱為機械除菌，生產(chǎn)過程中采用的微孔濾膜的孔徑一般為0.22微米，因為菌體的直徑約大于1微米，芽孢小于0.5微米，熱原直徑約1-5納米。因此在滅菌過程中，過濾除菌可截留菌體，但不能截留芽孢和熱原。此方法并不是最可靠的方法，一般只對熱不穩(wěn)定的藥物溶液、氣體和水等進(jìn)行滅菌。射線滅菌法是采用紫外線、微波或輻射滅菌的方法：紫外線穿透能力較差，紫外滅菌法只能對空氣或?qū)ξ锲繁砻孢M(jìn)行滅菌，常用的紫外線波長為245納米。微波滅菌常用頻率在300兆赫茲到300G赫茲之間，主要是對液體或固體物料進(jìn)行滅菌，可有效延長保質(zhì)期。輻射滅菌法采用伽馬射線，可對不耐熱的生物大分子、多肽或蛋白類藥物進(jìn)行滅菌?；瘜W(xué)滅菌的目的是盡量減少微生物的數(shù)目，控制在一定的無菌狀態(tài)，不如熱壓滅菌法可靠。氣體滅菌法可對環(huán)境、不耐熱的器具設(shè)備以及粉末注射劑進(jìn)行滅菌，常用的滅菌氣體有環(huán)氧乙烷、甲醛和臭氧等。藥液滅菌主要采用殺菌劑進(jìn)行滅菌，可應(yīng)用于皮膚、無菌器具等，常用的滅菌劑有0.1%～0.2％苯扎溴胺和75酒精等。當(dāng)藥物制劑無法用以上方法進(jìn)行滅菌的時候，我們還可以采用無菌操作法進(jìn)行生產(chǎn)。無菌操作法是在無菌控制條件下制備無菌制劑的方法，它不是一個滅菌過程，而是保持環(huán)境或物品的無菌度，是控制在無菌條件下的操作。適用于不耐熱藥物的注射劑、眼用制劑和創(chuàng)傷制劑等。無菌操作室、層流潔凈工作臺和無菌操作柜是無菌操作的主要場所。無菌操