00細(xì)胞培養(yǎng)試驗室環(huán)境設(shè)計

細(xì)胞培養(yǎng)實驗室環(huán)境設(shè)計1實驗室設(shè)計細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù),要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響.細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔,空氣清新,干燥和無煙塵.細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè),常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,而洗刷消毒在另一室.2常用設(shè)施及設(shè)備⑴超凈工作臺:也稱凈化工作臺,分為側(cè)流式,直流式和外流式三大類.⑵無菌操作間:一般由更衣間,緩沖間和操作間三部分組成.操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱，離心機，倒置顯微鏡等.緩沖間可放置電冰箱,冷藏器及消毒好的無菌物品等.⑶操作間:普通培養(yǎng)箱,離心機,水浴鍋,定時鐘,普通天平及日常分析處理物(4)洗刷消毒間:烤箱,消毒鍋,蒸餾水處理器及酸缸等.⑸分析間:顯微鏡,計算機及打印機等.3培養(yǎng)器皿常用細(xì)胞培養(yǎng)器皿有培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)板,培養(yǎng)皿等.常準(zhǔn)備量是使用量的三倍.器皿應(yīng)選擇透明度好，無毒,利于細(xì)胞粘附和生長的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品.常用的器皿有下面幾種.(1)液體儲存瓶:用于儲存各種配制好的培養(yǎng)液,血清等液體,常用規(guī)格有500ml,250ml,100ml等幾種.⑵培養(yǎng)瓶:根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細(xì)胞貼壁生長和觀察,瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm,允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位,規(guī)格有200ml,100ml,50ml,25ml,10ml等幾種.⑶培養(yǎng)皿:用于開放式培養(yǎng)及其它用途.分直徑30mm,60mm,120mm等幾種.(4)吸管:常用的有長吸管和短吸管兩類,長吸管也稱刻度吸管.其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管，刻度吸管用于移動液體.常用1ml和10ml兩種.短吸管也叫滴管,分彎頭和直頭兩種.⑸離心管:離心管是細(xì)胞培養(yǎng)中使用最廣泛的器皿,根據(jù)用途不同形態(tài)各樣,常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類.前者分別為50ml,30ml,15ml;后者則多為10ml和5ml.(6)其它:如三角燒瓶,燒杯,量筒,漏斗,注射器等.4細(xì)胞培養(yǎng)溫度維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度.不同種類的細(xì)胞對培養(yǎng)溫度要求也不同.人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞的正常代謝會受到影響,甚至死亡.培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強,溫度上升不超過39℃時,細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時,細(xì)胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時,細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞死亡,個別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時,細(xì)胞全部死亡.相反,溫度不低于0c時,對細(xì)胞代謝雖有影響,但并無傷害作用;把細(xì)胞放入25-35℃時,細(xì)胞仍能生存和生長，但速度減慢;放在4℃數(shù)小時后,再回到37℃培養(yǎng),細(xì)胞仍能繼續(xù)生長.細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢.當(dāng)溫度降至冰點以下時,細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡.但是,如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油)，可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長期保存.5合適的氣體環(huán)境氣體是哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳.氧氣參與三竣酸循環(huán),產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分開放培養(yǎng)時一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中.二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,也是細(xì)胞生長繁殖所需成分，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值.大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4，偏離這一范圍對細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響.但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長.但有一些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長,如成纖維細(xì)胞最適合pH是7.4-7.6.每種細(xì)胞都有其最適pH值.前段時間，經(jīng)歷了幾個月的時間，為實驗室建了一個細(xì)胞培養(yǎng)間。目前這個細(xì)胞培養(yǎng)間運轉(zhuǎn)良好，培養(yǎng)的神經(jīng)元長了10來天，長勢不錯，已經(jīng)可以認(rèn)為細(xì)胞培養(yǎng)室建立成功。在建立細(xì)胞培養(yǎng)間的過程中，碰到了許多問題，逐一解決后，覺得大家如果要建立細(xì)胞培養(yǎng)間，肯定也會碰到許多相同的問題，所以將我碰到的問題整理出來。首先向大家推薦一本書，個人認(rèn)為是比較經(jīng)典的一一《動物細(xì)胞培養(yǎng)■基本技術(shù)指南》科學(xué)出版社，英，R.I.弗雷謝尼。內(nèi)容不多，但以下的資料大部分是書上找不到的。2005-4-30陸新江一、建細(xì)胞間的一些細(xì)節(jié)問題：1、甲醛薰蒸：資料（internet）：40%甲醛溶液（藥用規(guī)格、福建三明化工總廠出品），用量30ml/m3,室內(nèi)溫度21?24℃,相對濕度75%?85%,加熱薰蒸使蒸汽彌漫全室，關(guān)閉門窗1h。甲醛水溶液為無色，具有強烈刺激性氣味的液體，可殺滅多數(shù)微生物，價廉，熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37—40%的甲醛。其主要用法為：1.熏蒸消毒：對室內(nèi)消毒其用量為20—25%毫升/米，在加熱該溶液時最好同時煮沸一壺水，使室內(nèi)相對溫度保持在70-90%左右，室內(nèi)溫度最好在20攝氏度以上，作用時間12-24小時。如消毒皮毛服裝，甲醛水溶液的用量可加至125毫升/米,掛衣密度為每平方米3套為宜。熏蒸消毒時應(yīng)密閉門窗。消毒后一般多用自然通風(fēng)驅(qū)散甲醛氣體，其需時較長，急于排出氣體，可將25%氨水加熱蒸發(fā)中和。氨水用量為所用甲醛水溶液的一半，中和時間為30分鐘。2.自然揮發(fā)：將較大量的甲醛水溶液放入一敞開容器中，室內(nèi)溫度保持在18攝氏度以上，同時室內(nèi)噴水以保持相對濕度在70%以上，經(jīng)16小時可達(dá)到室內(nèi)消毒的目的。關(guān)于甲酸、甲醛和甲醇三者的毒性比較：甲酸的毒性比甲醇大6倍，甲醛的毒性比甲醇大30倍。所以吃進(jìn)4?10克甲醇，就能引起慢性中毒。它的毒性作用主要表現(xiàn)在損傷視力，使視力減退（不能矯正），視野縮小，以致雙目失明，直到死亡。實際操作：我的每個房間是7個平方，約20個立方。按書上的算要福爾馬林300ml,高鎰酸鉀100g。高鎰酸鉀放入甲醛液體中后，在開始的3秒鐘內(nèi)沒有反映，3秒鐘以后，會產(chǎn)生大量煙氣。所以一旦在甲醛中加了高鎰酸鉀請馬上離開滅菌室，并關(guān)上門。高鎰酸鉀放入甲醛液體中會使液體沸騰，所以反應(yīng)要在比較大的大口徑容器進(jìn)行，本人用的是臉盆。甲醛氣體毒性非常強，所以操作時一定要帶上防毒面具。2、關(guān)于紫外線：資料：紫外線的穿透能力非常弱的，主要靠電離產(chǎn)生氧自由基來消毒。細(xì)胞培養(yǎng)室里面一些不能照射紫外的物件可以用一般的材料蓋住。如：玻璃和有機玻璃都可以的。紫外有些人認(rèn)為大型精密的顯微鏡是不可以照紫外的，因為它們的鏡頭上涂的膜會被分解掉，但我特意問了我校光學(xué)系的老師，他們認(rèn)為是沒有關(guān)系的。紫外線在許多實驗室被認(rèn)為是起心理安慰作用的。我參觀過的一個細(xì)胞培養(yǎng)間他們的房間大約6平方米，但是只裝了30川的紫外燈，但前提是他們有一個層流系統(tǒng)。個人認(rèn)為，如果細(xì)胞培養(yǎng)間有層流系統(tǒng)，那紫外的作用是可以被忽略的，但如果沒有層流系統(tǒng)，那么紫外的作用還是相當(dāng)重要。止匕外，不要擔(dān)心紫外不能照射到的角落，因為紫外殺菌功能除了紫外本身以外，還可以由產(chǎn)生的臭氧來完成。臭氧過量吸入的作用應(yīng)該和雙氧水的作用是一樣的，個人認(rèn)為也許有一定的致癌性。所以紫外滅菌以后，最好過一個小時再進(jìn)去。3、關(guān)于新潔爾滅：資料：【藥品名稱】苯扎澳銨溶液（新潔而滅溶液）（乙類非處方藥【別名】BenzalkoniumBromideSolution【標(biāo)準(zhǔn)來源】《中華人民共和國藥典》2000年版?！拘誀睢繜o色或淡黃色的澄明液體;芳香;味極苦;強力振搖能發(fā)生多量泡沫，遇低溫可能發(fā)生渾濁或沉淀。【藥物組成】每毫升含苯扎澳銨0.05克（5%）?！咀饔妙悇e】皮膚科用藥品?！舅幚碜饔谩勘皆匿@為陽離子表面活性劑類廣譜殺菌劑。【臨床應(yīng)用】用于皮膚黏膜和傷口的消毒。【用法用量】 外用，使用前應(yīng)稀釋即配即用。皮膚消毒使用0.1%溶液；創(chuàng)面黏膜消毒用0.01%溶液；稀釋方法：0.1%溶液：取本品一份，加純化水或清水50份；0.01%溶液：取本品1份，加純化水或清水500份?！咀⒁馐马棥縧.本品為外用消毒防腐藥，不可內(nèi)服。2.不得用塑料或鋁制容器貯存。3.涂布部位如有灼燒感、瘙癢、紅腫等，應(yīng)停止用藥，洗凈。必要時向醫(yī)師咨詢。4.低溫時，可能出現(xiàn)混濁或沉淀，可置于溫水中加溫，振搖使溶解后使用。5.兒童必須在成人監(jiān)護(hù)下使用?！静涣挤磻?yīng)】偶見過敏反應(yīng)?！舅幬锵嗷プ饔谩?l.不得與肥皂或其他合成洗滌劑并用。2.局部消毒時勿與碘酊、高鎰酸鉀、雙氧水、磺胺粉等并用。3.如正在使用其他藥品，使用本品前請咨詢醫(yī)師或藥師?！疽?guī) 格】500毫升：25克；100毫升：5克（5%）?！举A藏】避光，密封保存。評論：在甲醛滅菌前，先用新潔爾來擦洗整個墻面，此外，平時地板滅菌也可以用它。新潔爾滅和酒精相比，最大的優(yōu)點是便宜，因為新潔爾滅500ml只需5元，而且可以稀釋50倍用，而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。二、培養(yǎng)準(zhǔn)備時的一些問題：1、多聚賴氨酸：資料：多聚賴氨酸溶液（Poly-L-LysineSolution）Conc.:0.1%w/v,inwaterStorage:18-26℃Thimerosal,0.01%,addedaspreservative多聚賴氨酸溶液是廣泛應(yīng)用的組織切片與玻片黏合劑，該多聚陽離子分子與組織切片上的陰離子相互作用會產(chǎn)生較強的黏合力。適用組織學(xué)，免疫組織化學(xué)，冰凍切片，細(xì)胞涂片，原位雜交等使用的玻片的防脫片處理，以防實驗操作過程中組織掉片。也可用于細(xì)胞培養(yǎng)，增加細(xì)胞貼壁能力。［使用說明］免疫學(xué)操作步驟（可直接在玻片上涂布）1.滅菌的ddH2O1:10稀釋該多聚賴氨酸溶液。2.用之前將稀釋的多聚賴氨酸溶液放在室內(nèi)，使其溫度到室溫18-26℃3.將玻片浸在稀釋的多聚賴氨酸溶液5分鐘。注意增加時間不會提高包被效果。4.在60℃烘箱1小時干燥，或室溫18-26℃過夜干燥待用。［注意］.每100mL已稀釋的多聚賴氨酸溶液要包被的玻片40-90張，超過90張片子將影響其黏合力。.用之前的玻片必須保持清潔。必要時用含1%HCl的70%乙醇溶液來清洗。.不要在用過的稀釋液中加新的溶液。.釋過的多聚賴氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3個月內(nèi)是穩(wěn)定的。.用過的稀釋液要過濾，若出現(xiàn)渾濁或長菌要丟棄。2、洗液的一些問題：資料：重銘酸鉀硫酸洗液通常稱為洗潔液或洗液，其成分主要為重銘酸鉀與硫酸是強氧化劑。K2Cr2O7+4H2SO4 K2SO4+Cr2（SO4）3+3［O］+因其有很強的氧化力，一般有機物如血、尿、油脂等類污遺跡可被氧化而除凈。事先將溶液稍微加熱，則效力更強。新鮮銘酸洗液為棕紅色，若使用的次數(shù)過多，重銘酸鉀就被還原為綠色的鉻酸鹽，效力減小，此時可加熱濃縮或補加重鉻酸鉀，仍可繼續(xù)使用。配方：稀洗液 重銘酸鉀 10g粗濃硫200ml水100ml濃洗液 重銘酸鉀 20g粗濃硫酸 350ml水40ml配法：先取粗制重銘酸鉀20g,放于大燒杯內(nèi)，加普通水100ml使重銘酸鉀溶解（必要時可加熱溶解）。再將粗制濃硫酸（200ml）緩緩沿邊緣加入上述重銘酸鉀溶液中即成。加濃硫酸時須用玻璃棒不斷攪拌，并注意防止液體外溢。若用瓷桶大量配制，注意瓷桶內(nèi)面必須沒有掉瓷，以免強酸燒壞瓷桶。配時切記，不能把水加于硫酸內(nèi)（將因硫酸遇水瞬間產(chǎn)生大量的熱量使水沸騰，體積膨脹而發(fā)生爆濺）。使用時先將玻皿用肥皂水洗刷1?2次,再用清水沖凈倒干,然后放入洗液中浸泡約2小時,有時還需加熱,提高清潔效率。經(jīng)洗液浸泡的玻皿，可先用自來水沖洗多次，然后再用蒸餾水沖洗1?2次即可。附有蛋白質(zhì)類或血液較多的玻皿，切勿用洗液，因易使其凝固，更不可對有如酒精、乙醚的容器用洗液洗滌。洗液對皮膚、衣物等均有腐蝕作用，故應(yīng)妥善保存。使用時帶保護(hù)手套。為防止吸收空氣中的水分而變質(zhì)，洗液貯存時應(yīng)加蓋。注意：洗液具有強烈的腐蝕性，接觸皮膚后會，皮膚會變黃，2天后會脫一層皮。3、氟尿嘧啶：別名：5氟尿嘧啶英文名：Fluorouracil（5FU）。作用與用途：本品為嘧啶類的氟化物，屬于抗代謝抗腫瘤藥，能抑制胸腺嘧啶核甘酸合成酶，阻斷脫氧嘧啶核甘酸轉(zhuǎn)換成胸腺嘧啶核甘核，干擾DNA合成。對RNA的合成也有一定的抑制作用。操作：在神經(jīng)元培養(yǎng)時可以用來抑制膠質(zhì)的生長。4、L-谷氨酰氨：資料：氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位.不同種類的細(xì)胞對氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成,必須依靠培養(yǎng)液提供,這幾種氨基酸稱為必需氨基酸其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸在缺少谷氨酰胺時,細(xì)胞生長不良而死亡.因此,各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi).已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲存2周以上時,還應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺.三、海馬神經(jīng)元培養(yǎng)的方法：操作步驟：取2ml左右的L-多聚賴氨酸（0.1mg/ml）包被培養(yǎng)板或coverlip；將出生小于24h的乳鼠6-8個用70%乙醇消毒，逐個斷頭，取腦，放入冰浴的解剖液中；用彎頭鑷鑷取海馬和皮層，去除腦膜和血管，分別放入干凈的平皿中，用手術(shù)刀片分別將海馬和皮層切細(xì)。將組織塊置于15ml解剖液配制的0.25%胰蛋白酶中，37°C,靜置20min,取出時，勿搖晃。吸棄去上層胰酶液，下層組織沉淀約2ml,加3ml種植液沖洗一遍。靜置約3分鐘。吸棄去上層液體，下層組織沉淀約2ml,加3ml種植液沖洗一遍。離心800rpmX1min吸棄去上層液體，加2ml種植液用一根吸管，頭燒細(xì)，冷卻，輕輕吹打約15-20次，制成細(xì)胞懸液。取50ul細(xì)胞懸液稀釋到1ml,計數(shù)4大格。細(xì)胞濃度=4大格細(xì)胞數(shù)/4X稀釋倍數(shù)X104/ml例如120/4X20X104/ml=6X106/ml按照0.6--2X106/ml的密度接種神經(jīng)元。24h后全量換液成飼養(yǎng)液每三天用Neuronbasal使用液半量換液。接種后3-5天，加阿糖胞昔至終濃度10uM作用48小時，抑制膠質(zhì)細(xì)胞的過度生長。注意事項1用L-多聚賴氨酸(0.1mg/ml)包被培養(yǎng)板后，要待其干后才能接種，因為其對神經(jīng)元有毒性。L-多聚賴氨酸(0.1mg/ml)能回收再利用。2取腦組織時動作盡量要快，并且盡量低溫操作。3分離皮層和海馬時，要盡量分離腦膜和血管，否則有大量的成纖維細(xì)胞。4用吸管輕輕吹打細(xì)胞時，盡量不起泡沫，以免損傷神經(jīng)元。5接種細(xì)胞的過程，動作要快，以免細(xì)胞聚集。6接種細(xì)胞后，24h勿移動，以免影響細(xì)胞貼壁。四結(jié)果：大多數(shù)神經(jīng)元在接種1h內(nèi)貼壁，3-5h開始變平，并長出1-2個突起。3天后，許多細(xì)胞從胞體長出數(shù)個突起。神經(jīng)元在7-10天開始成熟，胞體逐漸長至30-40um,暈光明顯，胞核和核仁清晰可見，突起變粗，變長并且有分支，邊緣清楚，發(fā)亮，形成明顯的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。神經(jīng)元可存活1-2月。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)置和無菌操作【實驗原理】細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實驗室工作的主要區(qū)別在于要求保持無菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。一般標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)室應(yīng)包括配液室、準(zhǔn)備室和培養(yǎng)室。三室既相互連接又相對獨立，各自完成培養(yǎng)過程中的不同操作?！緦嶒?zāi)康摹竣倭私馀囵B(yǎng)室的設(shè)置和設(shè)備。②學(xué)習(xí)無菌概念和無菌操作要領(lǐng)?！静僮鞑襟E】.實驗室設(shè)置(1)配液室(2)準(zhǔn)備室(3)培養(yǎng)室培養(yǎng)室內(nèi)要完全密閉，保持恒定的溫度，在設(shè)計上要注意以下幾點：①培養(yǎng)室的位置最好設(shè)在陰面，陽光不能直接照射的地方，防止室內(nèi)溫度增高。②天花板的高度不要超過2米，以保證紫外燈的有效殺菌效應(yīng)，③門一般用拉門，以防止空氣流動。④天花板、地板和四周墻壁要光滑無死角，要鑲瓷磚或涂油漆，這樣設(shè)計，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墻角堆積灰塵。.實驗室常用設(shè)備(1)準(zhǔn)備室的設(shè)備①雙蒸餾水蒸餾器：制備雙蒸水。②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。③烤箱：洗滌完的玻璃器皿用烤箱烘干。④高壓鍋：玻璃器皿、解剖用具、部分液體、塑料器具等滅菌。不同物品其有效滅菌壓力和時間不同。⑤儲品柜1：放置未消毒物品。⑥儲品柜2：放置已消毒物品。⑦包裝臺：滅菌前的包裝用。準(zhǔn)備室注意事項：①預(yù)防蒸餾器被烤干。②放置水池中的水滲出。③勿將酸液濺到衣物或地面。④勿將高壓鍋排氣閥和安全閥堵塞。⑤已消毒物品應(yīng)與未消毒物品分柜存放。（2）配液室的設(shè)備①天平（扭力天平和電子天平）：稱量用②pH計：③磁力攪拌器：（3）細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)備①超凈工作臺：超凈工作臺的種類很多，有單面單人、單面雙人、雙面雙人或雙面四人等，其工作原理是利用鼓風(fēng)機，使通過高效濾氣的空氣，徐徐通過臺面，這樣使工作環(huán)境中具無菌而均勻的空氣。根據(jù)層流方式的不同，超凈工作臺主要分為水平層流式和垂直層流式兩種，基本原理大致相同，都是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過濾器初濾，由離心風(fēng)機壓入靜壓箱，再經(jīng)高效空氣過濾器，由此送出的潔凈氣流從一定的均勻的斷面風(fēng)速通過無菌，從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環(huán)境。但兩種凈化臺的氣流方向不同。使用超凈工作臺應(yīng)注意的幾點問題：A.凈化工作臺最好安裝在無塵的房間內(nèi)，最好為隔離好的無菌間內(nèi)，以免塵土過多易使濾器阻塞，降低凈化效果，縮短使用壽命。B.新安裝的或長期未使用的工用臺，工作前必須對工作臺和周圍環(huán)境用真空吸塵器或不產(chǎn)生纖維的工具進(jìn)行清潔工作，再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌法進(jìn)行滅菌處理。C.每次使用工作臺時，應(yīng)先用75%酒精擦洗臺面，并提前以30~50min紫外線滅菌燈處理凈化工作區(qū)內(nèi)積累的微生物。在關(guān)閉紫外燈后應(yīng)啟動送風(fēng)機使之運轉(zhuǎn)兩分鐘后再進(jìn)行培養(yǎng)操作。D.凈化工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品，以保持潔凈氣流型不受干擾。E.一般情況下，高效過濾器三年更換一次。更換高效濾器應(yīng)請專業(yè)人員操作，以保持密封良好。要定