位點特異性重組課件

第六章位點特異性重組和DNA轉(zhuǎn)座Introduction保守性位點特異性重組（conservativesite-specificrecombination,CSSR）轉(zhuǎn)座重組（transpositionalrecombination）1.保守性位點特異性重組（CSSR）1.1重組位點Duringλintergration,recombinationalwaysoccursatexactlythesamenucleotidesequenceswithinthetworecombinationsites,oneonthephageDNAandtheotheronthebacterialDNA.1.保守性位點特異性重組（CSSR）1.1重組位點①重組酶識別序列對稱分布②交換區(qū)（crossoverregion）重組位點重組位點①①①①②②1.保守性位點特異性重組（CSSR）1.2重組結(jié)果①DNA片段的插入1.保守性位點特異性重組（CSSR）1.2重組結(jié)果③DNA片段的到位1.保守性位點特異性重組（CSSR）1.2重組結(jié)果①DNA片段的插入②DNA片段的缺失③DNA片段的到位1.保守性位點特異性重組（CSSR）1.3重組酶1.3.1絲氨酸重組酶1.3.2酪氨酸重組酶1.3.1絲氨酸重組酶1.3.1.2功能①重組酶絲氨酸殘基的-OH攻擊交換區(qū)特定磷酸二酯鍵，重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連②另外一個斷裂DNA的-OH攻擊重組酶與DNA磷酸二酯鍵，重新形成DNA的磷酸二酯鍵，絲氨酸重組酶釋放DNA1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點重組功能①絲氨酸重組酶的4個亞基分別切斷2個DNA分子的4條鏈，并且重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點重組功能②重組酶二聚體亞基旋轉(zhuǎn)進行DNA片段交換1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點重組功能③DNA鏈上-OH攻擊重組酶-DNA磷酸二酯鍵，重新形成DNA磷酸二酯，釋放重組酶，完成重組1.3.1.3絲氨酸重組酶特異位點重組功能①絲氨酸重組酶的4個亞基分別切斷2個DNA分子的4條鏈，并且重組酶通過磷酸二酯鍵與DNA斷裂端相連②重組酶二聚體亞基旋轉(zhuǎn)進行DNA片段交換③DNA鏈上-OH攻擊重組酶-DNA磷酸二酯鍵，重新形成DNA磷酸二酯，釋放重組酶，完成重組總結(jié)重組位點重組結(jié)果絲氨酸重組酶2.轉(zhuǎn)座2.1轉(zhuǎn)座因子（transposableelement）或轉(zhuǎn)座子（transposon）從DNA上的一個地方移位到另外一個地方的遺傳因子。2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1DNA轉(zhuǎn)座子2.2.2LTR(longterminalrepeat)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1DNA轉(zhuǎn)座子

2.2.1.1自主轉(zhuǎn)座子（autonomoustransposon）2.2.1.2非自主轉(zhuǎn)座子（nonautonomoustransposon）2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1.2DNA非自主轉(zhuǎn)座子

①反向重復序列（具有轉(zhuǎn)座酶識別序列）2.2轉(zhuǎn)座因子的類型

2.2.1DNA轉(zhuǎn)座子

2.2.1.1自主轉(zhuǎn)座子①反向重復序列（具有轉(zhuǎn)座酶識別序列）②轉(zhuǎn)座酶基因2.2.1.2非自主轉(zhuǎn)座子①反向重復序列（具有轉(zhuǎn)座酶識別序列）2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機制

①轉(zhuǎn)座酶識別并聚集轉(zhuǎn)座子兩端的反向重復序列，形成轉(zhuǎn)座體

②將DNA轉(zhuǎn)座子從原始位置切除

③DNA單鏈交換，即轉(zhuǎn)座子的3′-OH與靶DNA的5′-P相連④DNA聚合酶和DNA連接酶修復缺口2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機制

①轉(zhuǎn)座酶識別并聚集轉(zhuǎn)座子兩端的反向重復序列，形成轉(zhuǎn)座體2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機制

②將DNA轉(zhuǎn)座子從原始位置切除2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機制

③DNA單鏈交換，即轉(zhuǎn)座子的3′-OH與靶DNA的5′-P相連2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機制④DNA聚合酶和DNA連接酶修復缺口2.3DNA轉(zhuǎn)座的剪切-粘貼機制

①轉(zhuǎn)座酶識別并聚集轉(zhuǎn)座子兩端的反向重復序列，形成轉(zhuǎn)座體

②將DNA轉(zhuǎn)座子從原始位置切除

③DNA單鏈交換，即轉(zhuǎn)座子的3′-OH與靶DNA的5′-P相連