生化藥物制造工藝酶類藥物課件

酶類藥物酶的分類酶類藥物的提取和純化

原料選擇生物材料的預(yù)處理☆提取濃縮☆純化結(jié)晶☆動(dòng)物材料的預(yù)處理：（1）機(jī)械法：有絞碎、刨碎、勻漿、研磨、超聲波、擠壓等方法，有些酶用機(jī)械法處理后仍不能有效的提取，可結(jié)合其他處理法。（2）凍融：冷到-10℃左右，再緩慢溶解至室溫，如此反復(fù)多次。由于細(xì)胞中冰晶的形成，及剩下液體中鹽濃度的增高，能使細(xì)胞中顆粒及整個(gè)細(xì)胞破碎，使酶釋放出來。（3）丙酮粉：組織經(jīng)丙酮迅速脫水干燥制成丙酮粉，不僅可以減少酶的變性，同時(shí)因細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分的破碎使蛋白質(zhì)與脂質(zhì)結(jié)合的某些化學(xué)鍵打開，促使某些結(jié)酶釋放到溶液中。材料的預(yù)處理

酶的濃縮（1）工業(yè)上：超濾、真空減壓濃縮、薄膜濃縮、冷凍濃縮（2）實(shí)驗(yàn)室：除上述方法外，對少量樣品可用下列方法

1.用G-15或G-25濃縮

2.用聚乙二醇濃縮酶的結(jié)晶☆特征：有序性，對稱排列，周期性的重復(fù)結(jié)構(gòu)

——為空間結(jié)構(gòu)研究提供x-衍射樣品1.酶的結(jié)晶方法

緩慢改變酶蛋白的溶解度，使其略處于過飽和狀態(tài)。（1）鹽析法（2）有機(jī)溶劑沉淀法（3）復(fù)合結(jié)晶法（4）透析平衡法（5）等電點(diǎn)法既是純化的結(jié)果又是純化的手段2.結(jié)晶的條件選擇酶的純度酶的濃度金屬離子pH溫度、時(shí)間晶種超氧化物歧化酶

（Superoxidedismutase,SOD）結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：金屬酶Fe-SOD:

Mw38000，2個(gè)亞基，每個(gè)亞基含1個(gè)Fe，存在于中

Cu、Zn-SOD:Mw32000，2個(gè)亞基，每個(gè)亞基含1個(gè)Cu，1個(gè)

Zn，存在于中Mn-SOD:原核細(xì)胞中，Mw40000,2個(gè)亞基，每個(gè)亞基1個(gè)Mn

真核細(xì)胞中，Mw80000，4個(gè)亞基，每個(gè)亞基1個(gè)Mn真核細(xì)胞原核細(xì)胞酶的性質(zhì)穩(wěn)定性對熱穩(wěn)定：天然牛血SOD可75℃加熱數(shù)分鐘，對熱穩(wěn)定性與溶液離子強(qiáng)度有關(guān)對pH的穩(wěn)定性：一般pH5.3~9.5較穩(wěn)定，豬血SOD在

pH7.6～9較穩(wěn)定金屬輔基與酶活性關(guān)系Cu、Zn-SOD：Zn與分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，與催化活性無關(guān)Cu與活性有關(guān)，對酶活力是必需的