蠟樣芽孢桿菌檢測(cè)

蠟樣芽孢桿菌檢測(cè)第1頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二蠟樣芽孢桿菌檢驗(yàn)劉曉川中心實(shí)驗(yàn)室---20121128第2頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二GB/T4789.14-2003GB4789.14-征求意見稿檢測(cè)程序錯(cuò)誤糾正及細(xì)節(jié)修改形態(tài)觀察生化試驗(yàn)主要修改如下：修改標(biāo)準(zhǔn)的中英文名稱增加第二法MPN法更改MYP培養(yǎng)條件增加根狀生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)增加溶菌酶實(shí)驗(yàn)增加附錄A、附錄B第3頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTDGB/T4789.14-2003檢驗(yàn)程序：與6.1操作步驟不一致，此處稀釋液培養(yǎng)不執(zhí)行。第4頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD菌數(shù)測(cè)定將原來5個(gè)稀釋度調(diào)整為2-3個(gè)稀釋度。第5頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTDGB4789.14-XXXX第6頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD附加試劑異常問題甘露醇卵黃多粘菌素（MYP）培養(yǎng)基異常正常

50%卵黃生產(chǎn)時(shí)污染微生物，平板培養(yǎng)后變黃，同時(shí)有異味。聯(lián)系廠家換貨。自行配置50%卵黃。（無菌操作，卵黃與等量滅菌生理鹽水混合）第7頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD標(biāo)準(zhǔn)菌株蠟樣芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC11778ATCC菌株不需要配置活化液，復(fù)溶后可直接涂抹平板。生長(zhǎng)溫度范圍為20-45℃，最適生長(zhǎng)溫度為30-37℃。第8頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD菌落形態(tài)ATCC11778產(chǎn)生卵磷脂酶不發(fā)酵甘露醇發(fā)酵甘露醇第9頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD蠟樣芽孢桿菌顯色培養(yǎng)基（海博）蠟樣芽孢桿菌呈現(xiàn)藍(lán)綠色，菌落較大。蘇云金芽孢桿菌呈現(xiàn)藍(lán)綠色。單增李斯特菌呈現(xiàn)深藍(lán)色。其他菌呈現(xiàn)黃色或無色。G-菌抑制。第10頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD形態(tài)觀察芽孢（隱藏的生命）營(yíng)養(yǎng)體條件合適第11頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD芽孢染色染液：孔雀綠+沙黃第12頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD芽孢在一定條件下，生長(zhǎng)發(fā)育后期細(xì)胞質(zhì)高度濃縮脫水所形成的一種抗逆性很強(qiáng)的球形或橢圓形的休眠體。芽孢所處的位置不同，有的在中部，有的在偏端，有的在頂端。芽孢一般呈圓形、橢圓形、圓柱形（前孢子）。有些細(xì)菌中，芽孢的直徑小于菌體直徑，稱芽孢桿菌。另一些細(xì)菌中，芽孢的直徑大于菌體直徑，使整個(gè)菌體呈梭形或鼓槌狀，這些細(xì)菌稱為梭狀芽孢桿菌，為厭氧菌。2，6-吡啶二羧酸（DPA）第13頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD培養(yǎng)特性第14頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD生化性狀第15頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD生化鑒定套裝可使用陸橋或海博生化鑒定套裝第16頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD生化試驗(yàn)(陸橋)檸（枸）動(dòng)硝VP木明葡（厭氧）甘

-++--++-明膠、硝酸鹽穿刺接種，其他滴加菌液第17頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD生化試驗(yàn)(海博)1.揭開蓋板2.撕開封口膜3.標(biāo)記4.制備菌液，加入試劑孔5.蓋上蓋板，培養(yǎng)后填寫結(jié)果表并報(bào)告。第18頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD明膠液化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：1.明膠觀察結(jié)果時(shí)，需放4℃,30min,而后觀察結(jié)果，呈液體狀態(tài)為陽性，固態(tài)為陰性。2.葡萄糖利用試驗(yàn)，需厭氧條件培養(yǎng)，變?yōu)辄S色為陽性。第19頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD過氧化氫酶實(shí)驗(yàn)3%過氧化氫溶液，臨用前配置，用水稀釋挑取單個(gè)菌落置于潔凈試管內(nèi)，滴加3%過氧化氫溶液2ml，觀察結(jié)果陽性半分鐘內(nèi)產(chǎn)生氣泡陰性不產(chǎn)生氣泡原理：過氧化氫水+氧氣載玻片接觸酶實(shí)驗(yàn)不建議將過氧化氫直接滴加于平皿上過氧化氫酶第20頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD溶血實(shí)驗(yàn)胰酪胨大豆養(yǎng)血（TSSB）瓊脂陸橋CM136（TSSB基礎(chǔ)）+P62（無菌脫纖維羊血）30±1℃培養(yǎng)24±2h，菌落淺灰色，不透明，似白色毛玻璃狀，有草綠色溶血環(huán)或完全溶血環(huán)。第21頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD根狀生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)間隔0.5cm左右距離劃平行直線于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，30±1℃培養(yǎng)24h±2h。蕈狀芽胞桿菌形成根狀生長(zhǎng)的特征。蠟樣芽胞桿菌菌株不具形成根狀生長(zhǎng)的特征。蠟樣芽胞桿菌蕈狀芽胞桿菌第22頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD酪蛋白酶實(shí)驗(yàn)酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基成分中酪蛋白不會(huì)溶解接種可以菌落，36±1℃培養(yǎng)48±2h陽性菌落周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)澄清透明區(qū)，表示產(chǎn)生酪蛋白酶。陰性反應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)72h觀察原理：蠟樣芽孢桿菌代謝產(chǎn)生堿性蛋白酶，可水解酪蛋白成為小分子肽段，使菌落周圍的培養(yǎng)基變透明。采用點(diǎn)種的方式接種，可以清晰的看到透明環(huán)。

第23頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)步驟：1.取室溫放置3d～4d的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)物少許涂于載玻片。2.自然干燥，微火固定，甲醇作用30s，火焰干燥.3.滴0.5％堿性復(fù)紅，火焰加熱（微見蒸氣，勿使染液沸騰)持續(xù)1min～2min，移去火焰。更換染色液加溫30s，水清洗、晾干后鏡檢。結(jié)果觀察：觀察有無游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結(jié)晶體（伴孢晶體）。芽孢蛋白結(jié)晶體第24頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD溶菌酶耐性試驗(yàn)用接種環(huán)取純菌懸液一環(huán)，接種于溶菌酶肉湯中，36℃±1℃培養(yǎng)24h。蠟樣芽胞桿菌在本培養(yǎng)基(含0.001％溶菌酶)中能生長(zhǎng)。如出現(xiàn)陰性反應(yīng)，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)24h。結(jié)果觀察：混濁現(xiàn)象培養(yǎng)基：溶菌酶肉湯基礎(chǔ)+溶菌酶溶液第25頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD蠟樣芽胞桿菌生化特征與其它芽胞桿菌的區(qū)別第26頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD生化分型（選作）根據(jù)對(duì)檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原、淀粉水解、V-P試驗(yàn)反應(yīng)、明膠液化試驗(yàn)，將蠟樣芽胞桿菌分成不同生化型別。第27頁，共29頁，2023年，2月20日，星期二內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATIONTITLE&DATE20.09.09INNERMONGLIAMENGNIUDAIRY(GROUP)CO.,LTD淀粉酶實(shí)驗(yàn)

培養(yǎng)基：