食品安全檢測中關(guān)于微生物快速檢測方法的淺析_第1頁
食品安全檢測中關(guān)于微生物快速檢測方法的淺析_第2頁
食品安全檢測中關(guān)于微生物快速檢測方法的淺析_第3頁
食品安全檢測中關(guān)于微生物快速檢測方法的淺析_第4頁
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食品平安檢測中關(guān)于微生物快速檢測方法的淺析隨著人們程度的進步,食品問題越來越受到人們的重視,其中微生物對食品的污染問題也相應(yīng)地備受關(guān)注,在食品消費、加工、儲存、運輸、銷售等各個環(huán)節(jié)中都有污染微生物的可能。一旦污染,微生物將大量繁殖而引起食品腐敗變質(zhì),或?qū)е率吃葱愿腥竞褪澄镏卸?。所以,討論食品平安檢測中微生物環(huán)節(jié)的快速檢測方法顯得尤為重要,我們對目前常用的食品微生物快速檢測方法從以下幾個方面淺析:食品微生物快速檢測采用生物化學(xué)技術(shù)手段的途徑,目前最成常用的是PCR技術(shù)。PCR技術(shù)的原理是采用體外酶促反響合成特異性DNa片段,再通過擴增產(chǎn)物來識細(xì)菌。由于PCR靈敏度高,理論上可以檢出一個細(xì)菌的拷貝基因,因此在細(xì)菌的檢測中只需短時間增菌甚至不增菌,即可通過PCR進展挑選,這樣做節(jié)約了大量時間,這也是目前食品微生物快速檢測所需要的優(yōu)點。但PCR技術(shù)也存在以下幾個缺點:1.1食物成分、增菌培養(yǎng)基成分和微生物DNA對Taq酶具有抑制作用,可能導(dǎo)致檢驗結(jié)果假陰性;1.2操作過程要求嚴(yán)格,微量的外源性DNA進入PCR后可以引起無限放大產(chǎn)生假陽性結(jié)果;1.3擴增過程中有一定的裝配誤差,也會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響?;蛱结樇夹g(shù)的原理是利用目的細(xì)胞具有同源性序列的核酸單鏈在適當(dāng)條件下互補形成穩(wěn)定的DNAORNA或DNADDNA鏈的原理,采用高度特異性基因片段制備基因探針來識別細(xì)菌?;蛱结樀膬?yōu)點是減少了基因片段長度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)。目前比較成熟的有基因探針檢測系統(tǒng),該系統(tǒng)對于別離到的單個菌落,可以30rain完成微生物確實證試驗。但是基因探針的缺點是不能鑒定目的菌以外的其他菌,所以適用領(lǐng)域相比照擬狹窄。微生物測試片作為食品微生物快速檢測手段的優(yōu)勢是可分別檢測菌落總數(shù)、大腸菌群計數(shù)、霉菌和酵母的計數(shù),目前國際先進的產(chǎn)品除上述工程外還有檢測乳桿菌、沙門菌、葡萄球菌的功能。這種微生物測試片方法與傳統(tǒng)檢測方法之間的相關(guān)性非常好。如用大腸菌群快檢紙片檢測餐具的外表,操作簡便、快速、省料,特異性和敏感性與發(fā)酵法符合率高,已經(jīng)被列為國標(biāo)方法。使用時只要正確掌握操作技術(shù)和判斷標(biāo)準(zhǔn),就可以到達理想的檢測效果,例如,霉菌快速檢驗紙片。應(yīng)用于食品檢驗中霉菌的檢測操作起來非常簡便,僅需36~C培養(yǎng),不需要低溫設(shè)備,大大節(jié)約了檢測時間,一般僅需2天就可觀察到結(jié)果,比方今的國家標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法縮短3到5天的時間,從而大大進步了工作效率。實際效果上,紙片法與國標(biāo)法在霉菌檢出率上差異無顯著性,且菌落典型,易斷定。還有一種紙片熒光法是利用細(xì)菌產(chǎn)生的某些代謝酶或代謝產(chǎn)物的特點而建立的一種快速斷定方法,操作起來只需檢測食品中大腸菌群、大腸桿菌的有關(guān)酶的活性就能很快得出該類菌群是否超標(biāo)的信息。免疫學(xué)技術(shù)的原理是通過抗原和抗體的特異性結(jié)合反響,再輔以免疫放大技術(shù)來鑒別細(xì)菌。免疫方法的優(yōu)點是樣品在進展選擇性增菌后,不需別離,即可采用免疫技術(shù)進展挑選。由于免疫法有較高的靈敏度,樣品經(jīng)增菌后可在較短的時間內(nèi)到達檢出度,抗原和抗體的結(jié)合反響可在很短時間內(nèi)完成。如采用免疫磁珠法可有效地搜集、濃縮神奈川現(xiàn)象陽性的副溶血性弧菌,可顯著進步環(huán)境樣品及食品中病原性副溶血性弧菌的檢出率。還有一種膠體金免疫層析法能快速、靈敏的檢測出食品中的金黃色葡萄球菌、沙門氏茵,操作起來簡便快速,無需特殊儀器設(shè)備,適宜現(xiàn)場檢測之用。目前比較常用的ATP生物發(fā)光法就是利用免疫學(xué)技術(shù)原理的最好案例,也是近年開展較快的一種用于食品消費加工設(shè)備干凈度檢測的快速檢測方法。用ATP生物發(fā)光分析技術(shù)檢測肉類食品細(xì)菌污染狀況或食品器具的現(xiàn)場衛(wèi)生學(xué)檢測,都可以到達快速適時的目的。主要原理是利用流式細(xì)胞儀(英文floweytometry,簡稱為FCu)和固相細(xì)胞計數(shù)(英文solidphasecytometry,簡稱sPC)來進展細(xì)菌的測定。FCM通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號根本上反映了細(xì)胞體積的大?。粺晒庑盘柕膹姸饶敲创砹怂鶞y細(xì)胞膜外表抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度,由此可通過儀器檢測散射光信號和熒光信號來估計微生物的大小、形狀和數(shù)量。流式細(xì)胞計數(shù)具有高度的敏感性,可同時對目的菌進展定性和定量。目前已經(jīng)建立了細(xì)菌總數(shù)、致病性沙門菌、大腸埃希氏菌等的FCM檢驗方法。固相細(xì)胞計數(shù)可以在單個細(xì)胞程度對細(xì)菌進展快速檢測。濾過樣品后,存留的微生物在濾膜上進展熒光標(biāo)記,采用激光掃描設(shè)備自動計數(shù)。每個熒光點可直觀地由通過計算機驅(qū)動的流動臺連接到熒光顯微鏡來檢測。這種方法尤其對于生長緩慢的微生物,檢測迅速快捷,明顯優(yōu)于傳統(tǒng)平板計數(shù)法。AMS是一種由傳統(tǒng)生化反響及微生物檢測技術(shù)與現(xiàn)代計算機技術(shù)相結(jié)合。運用概率最大近似值模型法進展自動微生物檢測的技術(shù),可鑒定由環(huán)境、原料及產(chǎn)品中別離的微生物。AMS僅需4b一1sb即可報告結(jié)果,以常規(guī)法鑒定細(xì)菌,只能得到是或不是某種菌,要想知到是哪種菌還要做大量、煩瑣的生化試驗,而AMS那么可以直接報告是菌。目前國際上最為先進、自動化程度最高的AMS細(xì)菌鑒定儀器,對細(xì)菌的鑒定是以每種細(xì)菌的微量生化反響為根底,可鑒定405種細(xì)菌。用AMS明顯縮短腸道菌生化鑒定的時間,如鑒定沙門菌屬只需4小時,鑒定志賀氏菌屬只需6小時,鑒定霍亂弧菌等致病性弧菌亦只需4一13個小時的

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