第十五章分支桿菌

第十五章分支桿菌第1頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二分枝桿菌屬—含分支菌酸結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌副結(jié)核分枝桿菌棒狀桿菌屬—含分支菌酸奴卡菌屬—含分支菌酸紅球菌屬—含分支菌酸放線菌屬—不含分支菌酸牛放線菌主要包括G+第2頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二分枝桿菌屬(Mycobacterium)分枝桿菌

結(jié)核分支桿菌牛分支桿菌禽分支桿菌副結(jié)核分枝桿菌第3頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

第4頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二世界上第一次發(fā)明了細(xì)菌照相法；世界上第一次發(fā)現(xiàn)了炭疽熱的病原細(xì)菌——炭疽桿菌；世界上第一次證明了一種特定的微生物引起一種特定疾病的原因；世界上第一次分離出傷寒桿菌；世界上第一次發(fā)明了蒸汽殺菌法；世界上第一次分離出結(jié)核病細(xì)菌；世界上第一次發(fā)明了預(yù)防炭疽病的接種方法；世界上第一次發(fā)現(xiàn)了霍亂弧菌；世界上第一次提出了霍亂預(yù)防法；世界上第一次發(fā)現(xiàn)了鼠蚤傳播鼠疫的秘密；世界上第一次發(fā)現(xiàn)了睡眠癥是由采采蠅傳播的；制定科赫法則；創(chuàng)立了固體培養(yǎng)基劃線分離純種法。

諾貝爾生理學(xué)及醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)第5頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二一類細(xì)長(zhǎng)彎曲的桿菌，因有分枝生長(zhǎng)的趨勢(shì)而命名主要特點(diǎn)細(xì)長(zhǎng)彎曲，分枝狀生長(zhǎng)細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)（分枝菌酸）常用抗酸染色鑒定，呈抗酸染色陽(yáng)性引起疾病都呈慢性，并伴肉芽腫第6頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二抗酸染色－齊尼二氏（Ziehl-Neelson)由于細(xì)菌細(xì)胞壁中含大量脂質(zhì)，一般不易著色，若經(jīng)加溫或延長(zhǎng)染色時(shí)間而著色后又能抵抗強(qiáng)脫色劑鹽酸酒精的脫色，故又稱抗酸桿菌(acid-fastbacilli)5%石炭酸復(fù)紅初染加熱3%鹽酸酒精脫色1min鏡檢堿性美蘭復(fù)染5min1min第7頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二M.tuberculosis第8頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二M.aviumsubsp.paratuberculosis(Z-N)第9頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二結(jié)核分支桿菌俗稱結(jié)核桿菌，引起人類結(jié)核病致病菌主要為結(jié)核分支桿菌（M.tuberculosis)、牛分支桿菌（M.bovis)世界上1/3人感染，70%在亞洲世界防治結(jié)核病日：3月24日第10頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二結(jié)核分支桿菌第11頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二形態(tài)與染色特性細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲，分枝狀，無(wú)莢膜、鞭毛或芽孢，抗酸染色陽(yáng)性牛分支桿菌菌體較短而粗；禽分支桿菌呈多形性。第12頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二培養(yǎng)特性特點(diǎn)專性需氧生長(zhǎng)緩慢（10-30d）營(yíng)養(yǎng)要求高，常用羅杰二氏培養(yǎng)基生長(zhǎng)液體：表面生長(zhǎng)（菌膜）固體：表面粗糙、隆起、不透明、邊緣不整齊、呈顆粒、結(jié)節(jié)、花菜狀菌落，乳白或米黃饞懶癩第13頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二生化反應(yīng)不發(fā)酵糖類觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，而熱觸酶試驗(yàn)陰性（細(xì)菌懸液68度加熱20min，加入過(guò)氧化氫不產(chǎn)生氣泡）

四不怕干燥（存活6-8個(gè)月）酸（3%HCl或6%H2SO4)或堿（4%NaOH)有抵抗力堿性染料（結(jié)晶紫或孔雀綠）青霉素等抗生素

四怕乙醇濕熱（62-63度，15min）紫外線抗癆藥物（鏈霉素、異煙肼、利福平等）抵抗力第14頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二形態(tài)結(jié)構(gòu)變異結(jié)核桿菌的L型：異煙肼誘導(dǎo)，胞壁消失，呈多形性，顆粒狀、絲狀毒力變異卡介苗BCG：Calmette和Guerin將牛分支桿菌經(jīng)13年230次傳代而獲得的減毒活疫苗株耐藥性變異耐異煙肼及其他抗結(jié)核藥物的結(jié)核菌株日益增多變異性第15頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二致病性致病物質(zhì)，沒(méi)有內(nèi)毒素和外毒素脂質(zhì)索狀因子（破壞細(xì)胞呼吸，引起肉芽腫）磷脂（形成結(jié)核結(jié)節(jié)）硫酸腦苷脂（抑制吞噬體與溶酶體結(jié)合）蠟質(zhì)D（引起遲發(fā)性過(guò)敏反應(yīng)）蛋白質(zhì)結(jié)核分枝桿菌菌體內(nèi)含有多種蛋白質(zhì)，其中重要的是結(jié)核菌素（tuberculin）。結(jié)核菌素與蠟質(zhì)D結(jié)合，能引起較強(qiáng)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。第16頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二致病機(jī)理以細(xì)胞內(nèi)寄生和形成局部病灶為特點(diǎn)。細(xì)菌主要通過(guò)呼吸道侵入機(jī)體肺泡，被肺泡巨噬細(xì)胞吞噬，但不被消化降解，相反在其內(nèi)繁殖，形成病灶，產(chǎn)生干酪樣壞死。壞死灶被吞噬細(xì)胞、免疫細(xì)胞等包圍，形成結(jié)核結(jié)節(jié)，此時(shí)細(xì)菌停止增殖，病理?yè)p傷局限化，病灶鈣化而痊愈；但是免疫低下者，細(xì)菌繼續(xù)增殖，病灶可能破潰，菌體隨痰咳出體外傳染或散布全身。第17頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二所致疾病結(jié)核桿菌 主要引起人的結(jié)核病，靈長(zhǎng)類動(dòng)物、犬及其他與人接觸的動(dòng)物均可感染。牛分支桿菌 主要引起牛結(jié)核病，其他家畜、野生反芻動(dòng)物、人、靈長(zhǎng)目動(dòng)物、犬、貓等肉食動(dòng)物均可感染。禽分支桿菌 主要引起禽結(jié)核，包括家禽與野禽，也可引起豬的局限性病灶。第18頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二Acinous,acino-nodosustuberculosis(cattlelung)第19頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二Tuberculosis(wildboar)第20頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二7.免疫性與變態(tài)反應(yīng)帶菌免疫，也叫傳染性免疫；細(xì)胞免疫與體液免疫存在分離現(xiàn)象，細(xì)胞免疫隨著病情的加重而減弱，體液免疫隨著病情的加重而增強(qiáng)；大量結(jié)核桿菌繁殖產(chǎn)生的特異性蛋白和脂質(zhì)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，加強(qiáng)了對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損傷；細(xì)胞免疫和遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)共存。第21頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二診斷技術(shù)試紙條γ-干擾素檢測(cè)ELISAPPD皮試免疫學(xué)診斷分子生物學(xué)體液免疫細(xì)菌學(xué)診斷細(xì)胞免疫8.微生物學(xué)診斷第22頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第23頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二細(xì)菌學(xué)診斷顯微鏡檢查

取結(jié)核結(jié)節(jié)或病變與非病變交界處組織直接涂片，抗酸染色后鏡檢，如發(fā)現(xiàn)紅色成叢桿菌時(shí)，可做出初步診斷。分離培養(yǎng)

常用羅杰二氏培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)8周，培養(yǎng)陽(yáng)性時(shí)，進(jìn)行培養(yǎng)特性和生化特性鑒定。動(dòng)物接種

病料接種動(dòng)物：禽分支桿菌→雞；結(jié)核桿菌→豚鼠；牛分支桿菌→兔，接種后3周至3個(gè)月死亡。第24頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二免疫學(xué)檢測(cè)細(xì)胞免疫水平結(jié)核菌素皮試：純蛋白衍生物(PPD)γ干擾素釋放試驗(yàn)(IGRA)體液免疫酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：PPD、ESAT-6、CFP-10、Ag85、MPB83、MPB70方便,快速,適合大批量檢測(cè)（IDEXX公司）試紙條第25頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二變態(tài)反應(yīng)

剃毛測(cè)量皮皺厚,記錄,標(biāo)記皮內(nèi)注射結(jié)核菌素測(cè)量皮皺厚,記錄,標(biāo)記皮厚差大于或等于4.0mm為陽(yáng)性第26頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二采用結(jié)核菌素（PPD）皮內(nèi)注射法，牛頸部皮內(nèi)注射72h后皮腫脹厚度差≥4mm為陽(yáng)性；皮腫脹厚度差在2-4mm為疑似；30d后需復(fù)檢一次，如仍為疑似，經(jīng)30-45d再次復(fù)檢，如仍為疑似可判為陽(yáng)性;皮膚腫脹厚度差≤2mm為陰性。第27頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二γ干擾素釋放試驗(yàn)流程第28頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二分子生物學(xué)聚合酶鏈反應(yīng)：普通PCR、巢式PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等能快速擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌DNA檢測(cè)假陽(yáng)性和假陰性問(wèn)題是影響其應(yīng)用的關(guān)鍵問(wèn)題環(huán)等溫PCR擴(kuò)增(LAMP)操作十分簡(jiǎn)單，對(duì)儀器設(shè)備要求低肉眼觀察白色渾濁或綠色熒光的生成來(lái)判斷16s～23srDNA(rRNA)序列法用于分枝桿菌的菌種鑒定基因芯片基因芯片耐多藥檢測(cè)試劑已獲得歐盟體外診斷試劑證書(shū)（CE-IVD）操作較復(fù)雜，不適于基層檢測(cè)第29頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二9.免疫與治療結(jié)核?。喝蛉笠卟　鞍滩　⒎谓Y(jié)核、瘧疾”之一人類廣泛采用卡介苗免疫接種，免疫期達(dá)4-5年。接種卡介苗的牛一年后仍維持變態(tài)反應(yīng)陽(yáng)性，在用結(jié)核菌素檢疫時(shí)無(wú)法與自然感染牛區(qū)別。飼養(yǎng)牛群不接種卡介苗，每年春、秋需進(jìn)行檢疫，對(duì)檢出的患結(jié)核病動(dòng)物要撲殺處理。該病為人畜共患病，凡對(duì)人結(jié)核病有效的藥物，對(duì)動(dòng)物也有效。但除珍稀或觀賞動(dòng)物外，不提倡用藥物治療。第30頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二可引發(fā)反芻獸慢性消耗性傳染病，牛的主要臨床癥狀為持續(xù)性腹瀉和進(jìn)行性消瘦。與禽分支桿菌有較多的相似性，變態(tài)反應(yīng)也與禽分支桿菌有明顯交叉反應(yīng)，現(xiàn)歸屬于禽分枝桿菌副結(jié)核亞種。副結(jié)核分支桿菌M.paratuberculosis第31頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第32頁(yè)，共34頁(yè)，2023年，2月20日，星期二主要特性短桿菌，無(wú)