流式細(xì)胞儀介紹

流式細(xì)胞儀介紹第1頁/共51頁流式細(xì)胞儀產(chǎn)品介紹第2頁/共51頁主要內(nèi)容流式細(xì)胞儀基本原理MACSQuant流式的性能流式的競爭分析第3頁/共51頁流式細(xì)胞儀基本原理第4頁/共51頁

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）：就是對在高速流動(dòng)的鞘液包括下的細(xì)胞、粒子進(jìn)行分析和分選的技術(shù)，這種細(xì)胞或粒子是經(jīng)過特異熒光標(biāo)記的。其特點(diǎn)是測量速度快，每秒鐘能測數(shù)千個(gè)乃至上萬個(gè)細(xì)胞，且可進(jìn)行多參數(shù)測量。流式細(xì)胞術(shù)的概念第5頁/共51頁流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展趨勢單純到復(fù)雜檢測熒光參數(shù)定量手動(dòng)到自動(dòng)熒光試劑第6頁/共51頁液流檢測器

光源電子計(jì)算機(jī)層流鞘液細(xì)胞樣本鞘液注射口激光流動(dòng)室流式細(xì)胞檢測原理第7頁/共51頁細(xì)胞可被檢測的參數(shù)(無探針標(biāo)記)散射光信號(hào):

細(xì)胞內(nèi)在的結(jié)構(gòu)參數(shù)細(xì)胞大小

前向角散射(FSC)細(xì)胞內(nèi)部顆粒性

側(cè)向角散射(SSC)

ForwardLightDetector

CellSurfaceAreaIncidentLightSource第8頁/共51頁

是細(xì)胞或細(xì)胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長不同。區(qū)分陰陽性：通過熒光強(qiáng)度可將同一個(gè)細(xì)胞群體中的有熒光標(biāo)記的細(xì)胞與無熒光標(biāo)記的細(xì)胞區(qū)分開來。

區(qū)分陽性強(qiáng)弱：也可以將陽性細(xì)胞中的高FL的細(xì)胞與低FL的細(xì)胞區(qū)分開來。相對熒光強(qiáng)度（FL）(需探針標(biāo)記)第9頁/共51頁散點(diǎn)圖

密度圖二維等高圖直方圖圖報(bào)告中常見的幾種流式細(xì)胞圖如何看流式圖第10頁/共51頁流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用

染色體核型分析在分子遺傳學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用用于性別的預(yù)選擇在微生物學(xué)中的應(yīng)用在細(xì)胞周期研究中的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用在免疫學(xué)中的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)上的應(yīng)用在血液學(xué)研究中的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)新的應(yīng)用第11頁/共51頁流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用HIV免疫分型，CD4絕對計(jì)數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細(xì)胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細(xì)胞計(jì)數(shù)殘量白血病細(xì)胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關(guān)疾病12第12頁/共51頁臨床意義了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài)輔助臨床疾病的診斷探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后監(jiān)測、指導(dǎo)臨床治療方案免疫系統(tǒng)疾病免疫缺陷病，AIDS移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測腫瘤病人化療后免疫力檢測第13頁/共51頁流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用樹突細(xì)胞研究干細(xì)胞研究癌癥病人的多藥耐藥性細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究細(xì)胞系的鑒定細(xì)胞內(nèi)蛋白的分析細(xì)胞膜電位測定細(xì)胞內(nèi)鈣離子測定第14頁/共51頁流式細(xì)胞儀潛在客戶醫(yī)院：血液科，檢驗(yàn)科，風(fēng)濕免疫病科，腫瘤科，細(xì)胞治療科,開展移植（肝腎）的科室?？蒲性核按髮Ｔ盒＃好庖呦祷蛎庖邔?shí)驗(yàn)室，中心實(shí)驗(yàn)室，分子生物學(xué)室，腫瘤研究所，血液病研究所。第15頁/共51頁MACSQuant流式細(xì)胞儀

——細(xì)胞分析的里程碑第16頁/共51頁多參數(shù)細(xì)胞分析MACSQuant光學(xué)參數(shù)Excitation(nm)OpticalchannelFiltersFluorochromes405nmFL1450/50VioBlue?/PacificBlue?488nmFL2525/50FITCFL3585/40PEFL4655-730PI/7-AAD/PE-Cy5.5/PerCPFL5750(LP)PE-Cy7635nmFL6655-730APCFL7750(LP)APC-Cy7488nmSSC/FSC488/10FSC/SSC三激光紫色

(405nm) 40mW藍(lán)色

(488nm) 25mW紅色

(635nm) 20mW

9個(gè)光學(xué)參數(shù)FSC/SSC+7個(gè)熒光通道第17頁/共51頁MACSQuant光路系統(tǒng)第18頁/共51頁MACSQuant流式細(xì)胞儀的創(chuàng)新特性：集成，臺(tái)式數(shù)字化流式細(xì)胞儀強(qiáng)大并且直觀的軟件多參數(shù)：3激光，9個(gè)參數(shù)（FSC,SSC,FL1-7)12寸觸摸屏（內(nèi)置）不同用戶登錄模式，可用密碼進(jìn)行保護(hù)2種不同的模式（針對有豐富經(jīng)驗(yàn)和無流式經(jīng)驗(yàn)的人員）分析速度可達(dá)10000個(gè)細(xì)胞/秒,無需計(jì)數(shù)微珠進(jìn)行絕對計(jì)數(shù)不同的流速控制：25/50/100uL/分鐘自動(dòng)化處理樣本，自動(dòng)進(jìn)樣，自動(dòng)清潔，自動(dòng)補(bǔ)償,自動(dòng)標(biāo)記矩陣補(bǔ)償和脫機(jī)補(bǔ)償小巧（60X35X40cm）、低噪、低熱。流式細(xì)胞儀基本特征第19頁/共51頁細(xì)胞富集系統(tǒng)絕對計(jì)數(shù)，無需微珠自動(dòng)補(bǔ)償自動(dòng)進(jìn)樣自動(dòng)標(biāo)記AnewmilestoneincellanalysisMACSQuant?分析儀功能強(qiáng)大、操作簡單的多參數(shù)細(xì)胞分析的理想工具

(高端儀器–操作簡單–多種自動(dòng)化選擇)

第20頁/共51頁MACS?富集系統(tǒng)使用MACS微珠磁性富集細(xì)胞細(xì)胞被富集后再進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析預(yù)富集的應(yīng)用：內(nèi)皮祖細(xì)胞檢測——頻率:每105PBMCs中有1個(gè)細(xì)胞(如CD34的預(yù)富集)腫瘤細(xì)胞檢測——頻率:每107PBMCs中有1個(gè)細(xì)胞(如EpCAM的預(yù)富集)抗原特異性T細(xì)胞檢測——(如CD154的預(yù)富集)成分檢測可以只檢測富集后組分或者同時(shí)檢測原始標(biāo)本、陰性組分和陽性組分MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：高靈敏度地分析稀有細(xì)胞第21頁/共51頁每次反應(yīng)后，自動(dòng)計(jì)算每μL體積中的細(xì)胞數(shù)——無須計(jì)數(shù)磁珠，細(xì)胞培養(yǎng)后往往需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，可以完全替代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀CD4絕對計(jì)數(shù)用于輔助HIV監(jiān)測治療CD34絕對細(xì)胞計(jì)數(shù)用于干細(xì)胞移植MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：絕對細(xì)胞計(jì)數(shù)(容積型)第22頁/共51頁自動(dòng)化的多樣本處理：使用MACS?MiniSampler和MACS?冷凍試管架靈活性高，可使用不同的試管

——

5mLtubes——15mLtubes——50mLtubes通量高(從Chill96rack到96孔板)MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：自動(dòng)進(jìn)樣第23頁/共51頁MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：自動(dòng)標(biāo)記MACS微型載樣器上的試劑架，可最多放置4支染色試劑，如：PI/7-AAD熒光素標(biāo)記的抗體抗體混合物(如MACSMCCocktails)全系列試劑(抗體和試劑盒),如:MACS對照抗體混合物:MCCD14MonocyteCocktail,human

MCCD19BCellCocktail,human

MCCD34/CD133Cocktail,human

MCCD34Cocktail,human

MCCD4TCellCocktail,mouse

MCCD90PanTCellCocktail,mouse

MCCD19BCellCocktail,mouse

…

第24頁/共51頁MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征：完全自動(dòng)化的儀器設(shè)置全自動(dòng)的儀器校準(zhǔn)(使用MACSCalibrationBeads)7x7矩陣補(bǔ)償自動(dòng)補(bǔ)償，對多色分析自動(dòng)生成補(bǔ)償值手動(dòng)補(bǔ)償?shù)?5頁/共51頁儀器操作簡單、易行:溶液瓶(1.5L)附著在儀器兩側(cè)(通過瓶子上不同的指示燈來顯示機(jī)器狀態(tài))結(jié)構(gòu)：數(shù)字化分析速率>10,000events/秒流速:25/50/100μL/minMACSQuant?Analyzer第26頁/共51頁自動(dòng)化的儀器設(shè)置自動(dòng)校準(zhǔn)儀器（使用MACS校準(zhǔn)微珠）自動(dòng)補(bǔ)償7X7自動(dòng)矩陣補(bǔ)償自動(dòng)清洗自動(dòng)化進(jìn)樣和抗體標(biāo)記帶有清洗工作站（washingstation）的進(jìn)樣針自動(dòng)化進(jìn)樣針臂（y,z方向移動(dòng)）無加壓系統(tǒng)溶液瓶附著在儀器上儀器狀態(tài)能夠通過溶液瓶的不同顏色來指示用戶友好的儀器操作第27頁/共51頁12‘’觸摸屏（內(nèi)嵌）Livesupport遠(yuǎn)程網(wǎng)絡(luò)服務(wù)，德國工程師進(jìn)行遠(yuǎn)程在線檢修機(jī)器VGA接口(連接第二個(gè)顯示器或者代替的顯示器)功能強(qiáng)大、易于操作——直觀的操作界面(用于儀器控制,數(shù)據(jù)獲取和數(shù)據(jù)分析)——不同的用戶模式——拖拉式安裝——含預(yù)設(shè)程序——在個(gè)人電腦上進(jìn)行獨(dú)立數(shù)據(jù)分析——MACSQuant數(shù)據(jù)（MQD)文件

-FCS格式-FCS3.0-與其它流式軟件兼容軟件基本特征第28頁/共51頁簡捷的數(shù)據(jù)處理:個(gè)人用戶登錄數(shù)據(jù)自動(dòng)保存在對應(yīng)的用戶文件夾中MQD–文件(內(nèi)部格式)數(shù)據(jù)儲(chǔ)存/備用:可用硬盤驅(qū)動(dòng)器/DVDRW驅(qū)動(dòng)器,USB接口,以太網(wǎng)絡(luò)連接軟件基本特征軟件簡單易操作:鍵盤在顯示屏上(觸摸式顯示屏)USB接口–可用來連接外設(shè)的鼠標(biāo)、鍵盤條形碼讀碼器第29頁/共51頁MACSQuant?Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第30頁/共51頁MACSQuant?Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第31頁/共51頁MACSQuant?Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis第32頁/共51頁流式相關(guān)抗體針對流式檢測的全系列抗體。。。。-FITC-PE-APC-Vioblue-……第33頁/共51頁北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所流式細(xì)胞儀檢測報(bào)告姓名：

性別：

年齡：

標(biāo)本：病歷：

診斷：

編號(hào)：淋巴細(xì)胞占有核細(xì)胞

%CD3+細(xì)胞占有核細(xì)胞

%CD4+細(xì)胞占有核細(xì)胞

%CD8+細(xì)胞占有核細(xì)胞

%CD14+細(xì)胞占有核細(xì)胞

%簽名：審核者：日期：第34頁/共51頁競爭優(yōu)勢:預(yù)富集功能，高敏感性檢測罕見細(xì)胞，比如臨床最常用的造血干細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞、pDC等。非常節(jié)省細(xì)胞，對于科研珍貴標(biāo)本尤為重要！絕對的細(xì)胞計(jì)數(shù)，無需計(jì)數(shù)微珠，細(xì)胞培養(yǎng)后往往需要細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，可以完全代替細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。自動(dòng)標(biāo)記，自動(dòng)進(jìn)樣，自動(dòng)清洗，節(jié)省時(shí)間。自動(dòng)補(bǔ)償，對多色分析自動(dòng)生成補(bǔ)償數(shù)值小巧的臺(tái)式機(jī)設(shè)計(jì),低噪，低熱非加壓系統(tǒng)進(jìn)樣MACSQuant?Analyzer

Anewmilestoneincellanalysis35(25)第35頁/共51頁儀器的競爭分析

第36頁/共51頁BD的各種機(jī)型（一）caliburAriaLSRII第37頁/共51頁BD的各種機(jī)型（二）

CantoIIInflux第38頁/共51頁Beckman的各種儀器（一）EPICSXL-ADC

CytomicsFC500Gallios

MofloEPICSXL-Altra

Quanta

第39頁/共51頁P(yáng)artec公司各種機(jī)型（適合植物學(xué)研究）第40頁/共51頁Amnis公司的ImageStreamX圖像流式細(xì)胞儀

被評(píng)為2008年度生命科學(xué)十大創(chuàng)新產(chǎn)品之一，是流式細(xì)胞儀上的新突破.第41頁/共51頁Milipore公司的GuavaEasyCyteMini/EasyCytePlus無鞘液毛細(xì)管細(xì)胞分析儀

第42頁/共51頁Accuri的c6-流式細(xì)胞儀

一種全功能、二激光、六探測器分析流式細(xì)胞儀系統(tǒng)

第43頁/共51頁MACSQuant?Analyzer–“add-ons”MACS?MiniSamplerChillRacks(Chill5,15,50or96welladapter)MACSQuant?ColumnsAdditionalyearsofServiceFluorochromes,MACS?ControlCocktailsandMicrobeadsInstrumentTrainingMACSQuant?CalibrationBeadsMACSQuant?StartingBufferkitIndividualBuffer/Solutionboxes第44頁/共51頁

第45頁/共51頁MACSQuant?AnalyzersintheWorldBelgiumCanadaChinaFranceGermanyIcelandIrelandItalyJapanRussiaSouthKoreaSyriaUnitedKingdomUnitedStatesComingsoontothelistis:Australia第46頁/共51頁FlowCytometryMarketEstimatedtobe$1.5billionin2008(CAGR~10-15%,$3.7billionin2015)Instruments68%-$1.02billionReagents32%-$480millionSalesin2009Total–6.1million€(4.7million€)Instruments–2.632million€(~0.36%)Reagents–3.4million€(~0.99%)第47頁/共51頁WhobuystheMACSQuant?AnalyzerInnovatorsarethefirsttopurchaseinstrumentsandnewgadgetsMostcountriesarecurrentlysellingtotheearlyadoptersSomecountrieshavesoldafewMQandarenowsellingtotheresearcherswhowant/needgreaterscientificarguments...MustbetargetedtomaximizeoursuccessGuidelineshavebeenfollowedinseveralcountriesandsuccessisseen!第48頁/共51頁Whathavewelearned?MiltenyiBiotecisstillanewplayerinflowcytometryWhat