人絨毛膜促性腺激素(HCG)稀釋經(jīng)驗共享和臨床應(yīng)用介紹

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人絨毛膜促性腺激素(HCG)稀釋經(jīng)驗共享和臨床應(yīng)用介紹鄭州金域生化發(fā)光室

李利娟

概述

人絨毛膜促性腺激素(HCG)的簡單介紹人絨毛膜促性腺激素(HCG)的定量檢測人絨毛膜促性腺激素(HCG)的臨床應(yīng)用

關(guān)于人絨毛膜促性腺激素(HCG)HCG是由兩個非共價鍵相連的肽鏈組成的糖蛋白激素。其單個亞基不具有生物活性，當(dāng)連接成完整化合物時始具活性，分子量約為4.7萬。HCGα亞單位的氨基酸排列與黃體生成素(LH)α亞單位相像，故用完整的抗HCG分子的抗體測定HCG時與LH間有免疫交織反應(yīng)。但它們的β亞單位各不一致。因此為避免交織反應(yīng)，目前均采用抗β-HCG單克隆抗體進(jìn)持特異的HCG檢查，近年來還有報道采用抗β-HCG羧基末端肽單克隆抗體以進(jìn)一步提高檢測的敏感性和特異性。

HCG與其它激素的區(qū)別

HCG與LH、FSH、TSH有一個一致的α亞基和一個不同的β亞基。LH的β亞基含121個氨基酸，HCG的β亞基相當(dāng)于在LH的β亞基的C末端延伸了24個氨基酸，共有145個氨基酸。

HCG的檢測

最初為膠體金法進(jìn)行定性檢測(試紙條定性)上世紀(jì)九十年代，使用放射免疫法目前主流使用化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光(貝克曼庫爾特Access,雅培Axsym,德普DPC系列，羅氏Elecsys,強(qiáng)生Eci)

定性檢測局限

定性檢測的應(yīng)用與局限1、由于是定性的方法也就是說只是給出陽性陰性的結(jié)果，而不能給出正確的數(shù)值。因此在用于判定其它疾病方面用定量檢測血清HCG來代替。2、由于檢測者可能是取隨機(jī)尿液檢測，就有可能在妊娠早期出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。3、一些與HCG有一致或相適片斷的激素可能會與尿試紙條上的抗體結(jié)合而造成假陽性。如黃體生成素(LH)、某些前列腺素、某些激素類避孕藥

定量檢測

放射免疫分析由于其靈敏度及穩(wěn)定性不如現(xiàn)在的化學(xué)發(fā)光也已被淘汰。

(電)化學(xué)發(fā)光檢測(電)化學(xué)發(fā)光檢測相比較放射免疫分析靈敏度，確鑿度，穩(wěn)定性及線性范圍均有明顯的優(yōu)勢，但是由于臨床所需檢測HCG范圍極廣，且由于免疫檢測鉤狀效應(yīng)的存在使得(電)化學(xué)發(fā)光檢測HCG檢測依舊存在一定的局限。在日常檢測中我們通過利用HCG試紙條聯(lián)合應(yīng)用達(dá)到儉約試劑的目的，同時可以有效避免鉤狀效應(yīng)的出現(xiàn)。

鉤狀效應(yīng)

鉤狀效應(yīng)是指免疫檢測中由于抗原、抗體濃度比例不適合而致檢測結(jié)果呈假陰性的現(xiàn)象。1929年Heidelberger利用等量抗體檢測濃度遞增抗原，當(dāng)抗原濃度較低，抗體濃度相對較高時，沉淀反應(yīng)不明顯；當(dāng)抗原濃度增加到與抗體濃度比例適合時，沉淀反應(yīng)明顯；繼續(xù)增加抗原濃度時，沉淀

反應(yīng)反而減弱。據(jù)此繪出雙相應(yīng)答曲線，曲線高峰區(qū)域，抗體、抗原濃度呈最適比，沉淀反應(yīng)明顯，稱等價帶。高峰區(qū)域左側(cè)，由于抗體濃度過高，沉淀反應(yīng)不明顯，稱前帶；高峰區(qū)域右側(cè)。由于抗原濃度過高，沉淀反應(yīng)也不明顯，稱后帶?？贵w濃度過高所致結(jié)果稱前帶現(xiàn)象，抗原濃度過高所致結(jié)果稱后帶現(xiàn)象，統(tǒng)稱為帶現(xiàn)象。1977年Green把此現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)(hookeffect),包括了前后帶現(xiàn)象。

定量檢測HCG現(xiàn)狀

在HCG的定量檢測中經(jīng)常會遇到一些高值標(biāo)本，超過儀器的分析范圍，只能報告：線性。而臨床要求檢驗科提供確鑿的檢驗結(jié)果，以便采取適當(dāng)?shù)闹委煷胧榱吮苊饷つ窟x擇稀釋倍數(shù)，造成不必要的試劑浪費(fèi)和延長檢驗時間。我們發(fā)現(xiàn)可以借助HCG試紙條先定性檢測血HCG,根據(jù)檢測帶(以下簡稱T帶)出現(xiàn)或不出現(xiàn)的時間和顏色的深淺，經(jīng)過與質(zhì)控帶(以下簡稱C帶)比較來選擇稀釋倍數(shù)，從而使超過儀器分析范圍的高值標(biāo)本盡快地、并盡可能地一次就報告確鑿結(jié)果。

定量檢測HCG現(xiàn)狀

由于HCG在體內(nèi)的變化很快，個體差異極大。而且在妊娠期的不同時間(平均2.2天，HCG上翻一倍)HCG水平差異極大。特別是對于葡萄胎，惡性葡萄胎，絨毛膜癌等疾病，血清HCG極高。這樣就有一些極高值的HCG標(biāo)本，無法確鑿報告結(jié)果。但臨床又要求一個確鑿的檢驗結(jié)果，以便采取適當(dāng)?shù)闹委煼椒?。這樣，有的試驗室盲目地選擇稀釋倍數(shù)，必定浪費(fèi)試劑和時間。假使稀釋倍數(shù)選擇太小，稀釋后仍大于儀器分析范圍，必然要試著增加稀釋倍數(shù)后重新測定。假使稀釋倍數(shù)過大，會造成過度稀釋后的標(biāo)本中HCG含量極微量而測不出，或者不在儀器的線性范圍內(nèi)造成很大的誤差，必然要縮小稀釋倍數(shù)再進(jìn)行測定。雖然該儀器有機(jī)內(nèi)稀釋功能，但是固定為某一稀釋倍數(shù)如2、3、5、10、20、50、100。而且只有在第一次測試超線。才會采用機(jī)內(nèi)稀釋。這樣就有兩個問題：第一，不稀釋或稀釋倍數(shù)過小必然會浪費(fèi)試劑。其次，在大多數(shù)狀況下，固定高稀釋倍數(shù)，會造成稀釋后的標(biāo)本，不在測試線性范圍內(nèi)，造成很大的測定誤差，影響臨床的判斷。

試紙條初篩與定量檢測聯(lián)合應(yīng)用

試紙條顯示狀況判斷稀釋倍數(shù)結(jié)果

123456789

1005050202055不稀釋不稀釋

100000038782720388190725930191495619509327.6194.7

試紙條顯色分析

T帶不出現(xiàn)，C帶出現(xiàn)。血HCG定性試驗陰性，說明HCG含量為零或極低，可直接原倍檢測T帶出現(xiàn)，顏色很淺，說明HCG含量較低，可直接定量測定。T帶出現(xiàn)，顏色略淺于C帶。有就T帶分析有兩種狀況，就T帶本身

而言為一長方形，a:此長方形內(nèi)左側(cè)顏色比右側(cè)深，這種標(biāo)本一般濃度不會太高，只需選擇較低倍數(shù)(不超20倍)稀釋上機(jī)檢測即可。b:右側(cè)顏色深者，標(biāo)本HCG濃度一般很高，至少在就我們經(jīng)驗來看，在羅氏E601儀器上一般要選至少20倍上機(jī)稀釋檢測。其濃度至少在七八萬，高者達(dá)兩三百萬。T帶出現(xiàn)，但顏色與C帶深淺相當(dāng)或是深于C帶，前提是T帶長方形內(nèi)著色均勻，此類標(biāo)本血HCG較高，但其濃度一般低于b種狀況下濃度

試紙條初篩與定量檢測聯(lián)合應(yīng)用

我們在定量測定前，首先用HCG定性試紙條定性測定血HCG,根據(jù)T帶與C帶出現(xiàn)的時間以及顏色的深淺等來選擇相應(yīng)的稀釋倍數(shù)進(jìn)行定量測定，不必屢屢進(jìn)行定量測定。極大地提高了一次報告成功率，而且定性試紙條相對于定量試劑來說，要廉價得多。這樣既儉約了試劑成本；又可以避免鉤狀效應(yīng)的出現(xiàn)同時縮短了時間，可以說是達(dá)到了事半功倍得效果。

在我們之前發(fā)現(xiàn)的幾例鉤狀效應(yīng)的標(biāo)本中試紙條分析狀況均同于b種狀況，具體檢測數(shù)據(jù)見下表：以下數(shù)據(jù)來至于西門子標(biāo)本1稀釋檢測結(jié)果1825030鉤狀效應(yīng)原倍結(jié)果2023

2

3651863

1188

在此種狀況中，如缺少試紙條的先期判斷，生怕我們就會發(fā)出錯

誤報告了。

HCG的臨床意義

HCG的檢查對早期妊娠診斷有重要意義，對與妊娠相關(guān)疾病、滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等疾病的診斷、鑒別和病程觀測等有一定價值。

HCG的臨床意義

1.診斷早期妊娠：孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。6070天可達(dá)8萬IU/L,多胎妊娠者尿HCG常高于一胎妊娠。在妊娠最初3個月，HCG水平每(2.20.5)天約升高一倍，

HCG的臨床意義

2.異常妊娠與胎盤功能的判斷：①異位妊娠：如宮外孕時，本試驗只有60%的陽性率，在子宮出血3天后，HCG仍可為陽性，故HCG檢查可作為與其它腹癥的鑒別。HCG常為312-625IU/L。假使用HCG難以確認(rèn)，還可用血孕酮來做輔助性診斷。宮外孕患者的血孕酮水平低，這是公認(rèn)的。故可作為早期診斷方法之一。臨界值為63nmol/L.異位妊娠引起腹腔內(nèi)出血時，腹腔血β-HCG均大于正常值，且明顯高于靜脈血β-HCG。

HCG的臨床意義

婦女受孕后，從第9-11天起即可測出血中β-HCG升高，以后每兩天β-HCG的量可升高2倍(就算有先兆流產(chǎn)，HCG的增加比率不會變)。譬如今天是234,假使后天測出來是450左右就就可認(rèn)為是正常宮內(nèi)早孕。異位妊娠時,由于輸卵管肌層菲薄、滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育不良,血供差,合體滋養(yǎng)細(xì)胞合成hCG量顯著減少,每天升高幅度也減少假使連續(xù)兩次增加速度緩慢，說明宮外孕或者胚胎不正常發(fā)

育遲鈍。譬如今天是10,后天是15,再2天才17,這樣的HCG值確定不正常，保胎的成功率極低。假使HCG值持續(xù)而明顯的下降，就算B超測到胎心也最好做清宮手術(shù)，說明胎兒其實已經(jīng)腦死亡。

HCG的臨床意義

CA-125是一種來源于體腔上皮、生殖道粘膜和卵巢上皮細(xì)胞表面的衍生腫瘤相關(guān)抗原,胎兒絨毛膜羊水和母體脫膜中均有大量的CA-125。有資料說明異位妊娠流產(chǎn)患者血清CA-125水平顯著高于異位妊娠成活組;相反,βhCG水平顯著低于異位妊娠成活組;并且血清CA-125水平有隨著βhCG水平的降低而增高的趨勢,認(rèn)為CA-125水平升高是對β-hCG降低的一種補(bǔ)償,并有助于鑒別異位妊娠流產(chǎn)和成活性異位妊娠;但血清CA-125與βhCG之間無統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。對于流產(chǎn)型異位妊娠患者可在血清CA125和連續(xù)βhCG監(jiān)測條件下采用期待療法或藥物治療。

HCG的臨床意義

②流產(chǎn)診斷與治療：不完全流產(chǎn)如子宮內(nèi)尚有胎盤組織殘存，HCG檢查仍可呈陽性；完全流產(chǎn)或死胎時HCG由陽性轉(zhuǎn)陰性，因此可作為保胎或吸宮治療的參考依據(jù)。③先