細胞培養(yǎng)的應(yīng)用和培養(yǎng)細胞的特性及條件課件

細胞培養(yǎng)

為什么要做細胞培養(yǎng)？細胞在體外生長的基本條件培養(yǎng)細胞的特性主要講3方面問題：細胞培養(yǎng)的有益應(yīng)用細胞培養(yǎng)應(yīng)用前景：（1）保存優(yōu)良的動物品種（2）拯救瀕臨滅絕的珍惜動物（3）利用克隆動物工廠生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物（4）利用克隆技術(shù)生產(chǎn)人體器官

培養(yǎng)條件下細胞的特性離體培養(yǎng)的動物細胞可分為：

貼壁依賴型(anchorage-dependent)非貼壁依賴型(anchorage-independent)兼性貼壁細胞1）貼壁依賴型

簡稱為貼壁細胞，包括成纖維細胞型、上皮細胞型、游走細胞型、多形性細胞型。2）非貼壁依賴型

也稱懸浮型，這類細胞培養(yǎng)時不貼附于支持物上，可在培養(yǎng)液中懸浮生長。來源于血液、淋巴組織的細胞，許多腫瘤細胞等均屬于此類，細胞一般呈圓形。

3）兼性貼壁細胞

動物細胞培養(yǎng)中，有些細胞呈現(xiàn)雙重性，既可以貼壁生長，也可以懸浮培養(yǎng)，如中國地鼠卵巢細胞、小鼠L929細胞等。

培養(yǎng)條件下動物細胞的生理特點1）動物細胞的分裂周期長動物細胞分裂周期一般為12～48小時，它不僅隨細胞種屬的不同而有差異，即使是同一種屬，不同部位的細胞所需的時間也不同。此外，培養(yǎng)條件如溫度、pH、培養(yǎng)基的成分等，也會影響分裂周期的長短。動物細胞的環(huán)境敏感性動物細胞與微生物和植物細胞相比，其培養(yǎng)難度要大一些，其主要原因是動物細胞只有細胞膜，而沒有細胞壁的保護。動物相比對培養(yǎng)環(huán)境十分敏感，一切影響細胞膜變形的因素都會影響動物細胞存活。動物細胞培養(yǎng)對營養(yǎng)條件的要求也十分復(fù)雜。

1.動物細胞培養(yǎng)的環(huán)境要求1）無污染環(huán)境2）溫度

昆蟲細胞培養(yǎng)溫度一般是25～28℃哺乳動物細胞的培養(yǎng)溫度一般是37℃。

總體上講，動物細胞忍受低溫的能力比忍受高溫的能力強。如哺乳動物細胞在45℃下只能存活1小時，但在25℃條件下仍然能慢速生長，并維持長時間不死，甚至在4℃下數(shù)小時后，再置于適宜溫度下細胞仍然可以正常生長。液氮凍存。4）氣體環(huán)境及溶氧一般細胞在培養(yǎng)初期要求較低的溶氧水平，而在對數(shù)生長期或培養(yǎng)后期，對溶氧水平要求增加，如果供氧不足，將導(dǎo)致細胞缺氧而死亡。除了氧氣供應(yīng)外，還應(yīng)注意培養(yǎng)基的氧氣和CO2的平衡。5）滲透壓動物細胞培養(yǎng)滲透壓包括兩個方面的問題：培養(yǎng)基的滲透壓維持細胞體內(nèi)的滲透壓維持

大多數(shù)動物細胞對滲透壓的忍耐程度較強，