農(nóng)藥毒理學(xué)課件 農(nóng)藥毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)

農(nóng)藥毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)植物保護(hù)學(xué)院農(nóng)藥毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)植物保護(hù)學(xué)院農(nóng)藥教研室2008-08-01

Ⅰ驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一殺蟲(chóng)劑對(duì)昆蟲(chóng)表皮的穿透作用--生測(cè)法一、試驗(yàn)原理和目的殺蟲(chóng)劑進(jìn)入有機(jī)體內(nèi)的途徑有多種，其中以對(duì)表皮的穿透作用最為重要。藥劑的穿透性在很大程度上決定于昆蟲(chóng)表皮的結(jié)構(gòu)和組成。由于表皮對(duì)化學(xué)物質(zhì)具有一定的選擇吸收作用，因此不同種類的昆蟲(chóng)對(duì)同一種藥劑的滲透性表現(xiàn)不同；不同的昆蟲(chóng)個(gè)體或同一個(gè)體的不同部位，其滲透性也有較大差異；不同的物質(zhì)或同一藥劑的不同濃度，其穿透性也有所不同。本實(shí)驗(yàn)用點(diǎn)滴蟲(chóng)體不同部位的藥效比較及用點(diǎn)滴和注射法的藥效比較，來(lái)測(cè)定藥劑對(duì)昆蟲(chóng)表皮的穿透作用，以深入理解表皮的結(jié)構(gòu)對(duì)藥劑穿透的影響。二、儀器、試劑和材料1.儀器電子天平、容量瓶(10ml12個(gè))、微量點(diǎn)滴器（1μl）、青霉素小瓶若干、培養(yǎng)皿（10cm40套）、鑷子、吸管（1ml3支，5ml1支）2.試劑丙酮、乙醚、馬拉硫磷原藥、魚(yú)藤酮原藥3.供試?yán)ハx(chóng)黃粉甲成蟲(chóng)、粘蟲(chóng)或棉鈴蟲(chóng)老齡幼蟲(chóng)三、操作步驟1.不同部位施藥法取黃粉甲成蟲(chóng)50頭，分成5組，每組10頭。用乙醚麻醉后，以0.1%的馬拉硫丙酮溶液1微升分別滴涂于觸角、附節(jié)、胸部背板及腹部腹面節(jié)間膜上。對(duì)照蟲(chóng)僅以丙酮滴涂觸角。處理后分別移至小養(yǎng)蟲(chóng)皿內(nèi)，經(jīng)4、8、12、24、48小時(shí)觀察蟲(chóng)體反應(yīng)及其死亡情況。將觀察情況列于表1中，并計(jì)算24小時(shí)后的死亡率%，對(duì)照組若有死亡則需校正。死亡率（%）=死蟲(chóng)數(shù)/總蟲(chóng)數(shù)×100樣正死亡率（%）=（處理組死亡率-對(duì)照組死亡率）/（100-對(duì)照組死亡率）×100以不同時(shí)間作橫坐標(biāo)，死亡率為縱坐標(biāo)，制出不同時(shí)間的死亡曲線。比較分析點(diǎn)清蟲(chóng)體不同部位后死亡情況與表皮穿透的關(guān)系。表1蟲(chóng)體不同部位施藥后的死亡情況時(shí)間地點(diǎn)部位農(nóng)藥濃度（%）施藥量（μl/頭）藥后不同時(shí)間（h）死亡率（%）24h校正死亡率（%）48122448背板腹部觸角跗節(jié)CK2.體表及體腔內(nèi)施藥法(點(diǎn)滴及注射法)配制0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%的魚(yú)藤酮丙酮溶液作注射用，同上另配制0.5%、1%、2%、3%、4%的藥液作點(diǎn)滴用。取蛻皮后0.5-1天的粘蟲(chóng)或棉鈴蟲(chóng)老齡幼蟲(chóng)360頭，分成兩批，每批分5個(gè)處理，每處理30頭蟲(chóng)，第一批各處理分別注射各濃度藥液1微升于試蟲(chóng)第二對(duì)腹足，對(duì)照組注射等量丙酮。第二批分組處理與第一組相同，以所配點(diǎn)滴用藥液以1μl/頭的量分別滴涂于蟲(chóng)體胸部背板，對(duì)照組施等量丙酮。按上述方法處理完畢后，分別置于小養(yǎng)蟲(chóng)皿內(nèi)，每皿放5頭蟲(chóng)，并投入少許飼料，隔2、4、6、12、24小時(shí)分別觀察其死亡情況，記錄于表2。根據(jù)記錄結(jié)果，計(jì)算24小時(shí)后的死亡率(或校正死亡率)，將劑量轉(zhuǎn)換成對(duì)數(shù)(X)，死亡率(或校正死亡率)轉(zhuǎn)換成機(jī)率值(Y)，用計(jì)算器求注射及點(diǎn)滴試驗(yàn)的致死中量(LD50),并計(jì)算點(diǎn)滴LD50與注射LD50的比率，以此推定魚(yú)藤酮對(duì)試蟲(chóng)表皮的滲透性。表2點(diǎn)滴和注射法施用魚(yú)藤酮毒力實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)間地點(diǎn)處方法理處理劑量（μg/頭）劑量對(duì)數(shù)logx+2死亡蟲(chóng)數(shù)死亡率（%）校正死亡率（%）校正死亡率機(jī)率值（Y）注射點(diǎn)滴

實(shí)驗(yàn)二幾種不同類型殺蟲(chóng)劑對(duì)昆蟲(chóng)致毒癥狀觀察一、試驗(yàn)原理和目的當(dāng)殺蟲(chóng)劑作用于昆蟲(chóng)后，昆蟲(chóng)在行為、形態(tài)、體征等方面發(fā)生異?；蚋淖?，即為中毒癥狀。不同類型的殺蟲(chóng)劑，其作用機(jī)理不同，中毒癥狀也有所不同。研究新殺蟲(chóng)化合物的致毒癥狀可為研究其作用機(jī)理提供思路和依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)的目的在與：觀察不同類型殺蟲(chóng)劑致使昆蟲(chóng)中毒在癥狀上的差異。聯(lián)系各類殺蟲(chóng)劑的致毒機(jī)理，根據(jù)蟲(chóng)中毒癥狀進(jìn)行分析與綜合，加深理解幾類重要?dú)⑾x(chóng)劑的作用特點(diǎn)，并以此解釋生產(chǎn)實(shí)踐中的具體現(xiàn)象，特別是為某些緩效型、新型、特異性殺蟲(chóng)劑的應(yīng)用和推廣提供理論依據(jù)。二、儀器、試劑和材料1.儀器培養(yǎng)皿(Φ:7cm)、養(yǎng)蟲(chóng)盒(Φ:4cm、h:7cm)、微量點(diǎn)滴儀、打孔器(0.4cm,lcm各l個(gè))、解剖鏡。2.試劑a、有機(jī)磷類殺蟲(chóng)劑：馬拉硫磷、久效磷b、有機(jī)氯類殺蟲(chóng)劑：林丹、DDTc、氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)劑；西維因、呋喃丹d、沙蠶毒類殺蟲(chóng)劑:巴丹、殺蟲(chóng)單(雙)e、脒類殺蟲(chóng)劑:殺蟲(chóng)脒f、除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑:氯氰菊酯、功夫g、礦物油類殺蟲(chóng)劑:機(jī)油乳劑h、植物性殺蟲(chóng)劑：魚(yú)藤酮、印楝油、川楝素、苦皮藤i、生物性殺蟲(chóng)劑:B·T·乳劑3.供試?yán)ハx(chóng)a.粘蟲(chóng)(leucaniaseprata)：室內(nèi)飼養(yǎng)，試驗(yàn)時(shí)挑選發(fā)育良好的5齡中期幼蟲(chóng)供試。b.棉鈴蟲(chóng)(Heliothisarimgera)：室內(nèi)飼養(yǎng)，試驗(yàn)時(shí)挑選健康的5齡中期幼蟲(chóng)供試。c.小菜蛾(Plutellaxylostella)：室內(nèi)飼養(yǎng)，試驗(yàn)時(shí)挑選健康的3齡中期幼蟲(chóng)供試。d.玉米象(SitopHiluszeamais)：室內(nèi)飼養(yǎng)，試驗(yàn)時(shí)挑選羽化3天后的成蟲(chóng)供試。e.黃粉甲(Tenebriomolitor)：室內(nèi)飼養(yǎng)，試驗(yàn)時(shí)挑選羽化3天后的成蟲(chóng)供試。三、操作步驟1.點(diǎn)滴法試驗(yàn)時(shí)挑取適宜的試蟲(chóng)，用微量點(diǎn)滴儀在試蟲(chóng)的前胸背板上定量點(diǎn)滴藥劑的丙酮稀釋液(對(duì)照組只點(diǎn)等量丙酮)。每藥劑處理用蟲(chóng)10-20頭，分置于培養(yǎng)皿(養(yǎng)蟲(chóng)盒)內(nèi)，用正常飼料飼喂，于養(yǎng)蟲(chóng)室(T:250C,RH:75%,L/D:12h/12h)內(nèi)飼養(yǎng)，定時(shí)觀察記載試蟲(chóng)中毒癥狀。2．飼喂法:A.粘蟲(chóng)打制葉蝶(Φlcm)，于一定濃度藥劑丙酮液中浸3-5秒鐘，晾干后，置于鋪有濕濾紙的培養(yǎng)皿中。接蟲(chóng)前將試蟲(chóng)饑餓5-8小時(shí)，每藥劑處理用試蟲(chóng)10-20頭，于養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)飼養(yǎng)，定時(shí)觀察記載試蟲(chóng)中毒癥狀。B.棉鈴蟲(chóng)配制加藥飼料，每皿中加入適量飼料，接入饑餓1天后的試蟲(chóng)，每藥劑處理用試蟲(chóng)10-20頭，于養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)飼養(yǎng)，定時(shí)觀察并記載試蟲(chóng)中毒癥狀。C.小菜蛾打制葉蝶(Φ0.4cm)，于一定濃度的丙酮藥液中浸3-5秒鐘，置于鋪有濕濾紙的養(yǎng)蟲(chóng)盒內(nèi)，接入饑餓4-5小時(shí)后的試蟲(chóng)，每藥劑處理用試蟲(chóng)30-50頭，于養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)飼養(yǎng)，定時(shí)觀察記載試蟲(chóng)中毒癥狀。四、結(jié)果處理詳細(xì)觀察并描述記錄各藥劑的致毒癥狀，歸納總結(jié)各類殺蟲(chóng)劑致毒癥狀的特點(diǎn)，分析癥狀與機(jī)理之間的關(guān)系，比較不同類殺蟲(chóng)劑在癥狀與機(jī)理上的區(qū)別，并闡述癥狀學(xué)在毒理學(xué)研究及生產(chǎn)實(shí)踐中的意義。

實(shí)驗(yàn)三羧酸酯酶活性測(cè)定一、試驗(yàn)原理和目的羧酸酯酶(carboxylesterases，CaE)是昆蟲(chóng)體內(nèi)的一類重要代謝酶，其相對(duì)分子量為60000u。和AchE相似，CaE也是絲氨酸酶，活性部位是絲氨酸羥基。催化水解底物羧酸酯的反應(yīng)可分為兩步：①羧酸酯?；疌aE的活性部位絲氨酸；②加水脫羧作用。測(cè)定該酶活性是探索昆蟲(chóng)對(duì)殺蟲(chóng)劑代謝作用及確定該酶的代謝作用增強(qiáng)是否參與了抗性的一項(xiàng)重要指標(biāo)，也是殺蟲(chóng)劑毒理學(xué)、昆蟲(chóng)對(duì)寄主植物適應(yīng)性中的重要研究?jī)?nèi)容之一。測(cè)定原理同酯酶活性測(cè)定。二、儀器、試劑和材料1.儀器恒溫水浴、勻漿器、離心機(jī)，分光光度計(jì)、試管、燒杯、移液管、滴管、量筒、鑷子等。2.供試?yán)ハx(chóng)粘蟲(chóng)、棉鈴蟲(chóng)、小菜蛾等鱗翅目高齡幼蟲(chóng)。3.試劑(1)0.2MPH7.0PBS；(2)0.04MPH7.0PBS；(3)O.OO1M毒扁豆堿丙酮液取毒扁豆堿0.0275g，用不同溶解并定容至100ml；(4)O.OOO1M毒扁豆堿：取10mlO.OO1M毒扁豆堿丙酮液加90m1水；(5)0.0003M底物：配置稱取α-乙酸萘酯酸0.558g溶于丙酮中，定容至100ml為0.03M，然后取該溶液1ml，加O.OOO1M毒扁豆堿1ml,加O.04MPBS98ml；(6)0.OO1Mα-萘酚溶液：準(zhǔn)確稱取α-萘酚0.0036g用少量丙酮溶解后，再用0.04MPBS定容至25ml；(7)顯色劑:使用前將5%十二烷基硫酸鈉溶液和1%堅(jiān)牢藍(lán)B水溶液按5:2混合；(8)殺蟲(chóng)劑原藥三、操作步驟1.試蟲(chóng)處理方法采用點(diǎn)滴發(fā)或飼喂法以定量的供試藥劑進(jìn)行處理，帶出現(xiàn)癥狀后，或間隔一定的時(shí)間取樣供試。2.酶液制備方法取供試?yán)ハx(chóng)20頭,用0.04MPBS冰浴勻漿，定容至4ml,在40C4000rpm離心10min,取上清液作為酶源。3.酶活性測(cè)定方法（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線按照下表加入試劑；將各管混勻后，室溫下放置30min,于600nm處比色測(cè)定OD值(重復(fù)3次取平均值)。按回歸分析法得出回歸式y(tǒng)=a+bx，式中x為α-萘酚含量，y為OD值。試劑管號(hào)012345671.OmMα-萘酚(ml)00.040.060.080.100.120.160.200.04MPBS(ml)65.965.945.925.90.5.885.845.80顯色液(ml)1.01.01.01.01.01.01.01.0(2)羧酸酯酶活性測(cè)定將酶液稀釋10倍，取0.2-0.5ml加入0.04MPBS，使總體積為lml,再加入5.0m10.0003M底物，370C水浴振蕩30min,加入顯色劑1.0ml,混勻后室溫下靜置30min,于600nm處比色測(cè)OD值；對(duì)照管中不加酶液，其它條件不變。(重復(fù)3次取平均值)(3)羧酸酯酶Km及Vmax的測(cè)定×0.0010.30.0750.150.30.61.22.44.8底物（ml）5.05.05.05.05.05.05.05.00.04MPBS(ml)1.00.60.60.60.60.60.60.6酶液(ml)00.40.40.40.40.40.40.4將上述三種溶液混勻，370C水浴振蕩15min后加人顯色劑1.0毫升，室溫下放置30min，于600nm處比色測(cè)OD值。(以Lineweaver-Bank法求出Km及Vmax)(4)酶液中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定(考馬司亮藍(lán)法)四、結(jié)果處理將測(cè)得的OD600值，用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求出相應(yīng)的α-萘酚μM數(shù)。計(jì)算出酶液中的蛋白含量，以用15每分鐘每毫克蛋白可催化水解α-萘酚的微摩爾數(shù)作為酶活性的指標(biāo)，比較分析藥劑對(duì)酶活力的影響。

實(shí)驗(yàn)四血淋巴蛋白及酯酶同工酶的分離一、試驗(yàn)原理和目的聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的凝膠，具有機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、透明、化學(xué)穩(wěn)定性高、無(wú)電滲作用、設(shè)備簡(jiǎn)單、樣品最?。?～100μg）、分辨率高等優(yōu)點(diǎn)，并可通過(guò)控制單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例，聚合成不同孔徑大小的凝膠，可用于蛋白質(zhì)、核酸等分子大小不同的物質(zhì)的分離、定性和定量分析。根據(jù)凝膠支柱形狀不一，可分為盤狀電泳和垂直板型電泳。盤狀電泳是在直立的玻璃管內(nèi)利用不連續(xù)的緩沖溶液、pH和凝膠孔徑進(jìn)行的電泳。垂直板型電泳是將聚丙烯胺凝膠聚合成方形或長(zhǎng)方形薄片狀，薄片可大可小。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)分離蛋白質(zhì)和酯酶同工酶，其分離效力遠(yuǎn)大于醋酸纖維薄膜電泳，可以得到滿意的蛋白譜和酯酶同工酶譜，這種方法也適用于其它酶系同工酶的分離。這些譜帶在昆蟲(chóng)生理、生態(tài)、病理、毒理及分類學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握凝膠電泳基本方法，并測(cè)定各種昆蟲(chóng)在殺蟲(chóng)藥劑處理后其血淋巴及各種組織的蛋白譜和酯酶譜，比較它們與正常主體之差異，有助于殺蟲(chóng)劑致毒機(jī)理的深入探討。二、儀器、試劑和材料1.儀器高壓電泳儀與垂直平板電泳槽；冰箱、組織勻漿器；玻璃紙、吸水紙；離心機(jī)(6000g)；微量注射器(50u1)；刻度吸管、小試管或毛細(xì)吸管；注射器(5ml)及長(zhǎng)針頭(8一1Ocm)；玻璃培養(yǎng)皿(直徑20cm)。2.供試?yán)ハx(chóng)粘蟲(chóng)和棉鈴蟲(chóng)等鱗翅目昆蟲(chóng)的幼蟲(chóng)。，3.試劑(1)7.5%分離膠：4.93mlH2O，2.47ml30%Arc（丙烯酰胺）和Bis（N，N/甲叉雙丙烯酰胺），2.53mlPH8.9的Tris（三羥甲基氨基甲烷）-HCl，100μ110%AP,6μ1TMED（N，N，N/，N/-四甲基乙二胺）,共10ml。(2)3.5%大孔膠：3.74mlH2O，0.58ml30%Arc和Bis，0.63mlPH6.7的Tris-HCl，50μ110%AP,5μ1TMED,共10ml。(3)30%Arc和Bis：29gArc和1gBis,加蒸餾水定容至100ml。（溶解時(shí)需加溫，但要小于37度）(4)PH8.9的Tris-HCl：36.6gTris，48ml1M的HCl，加蒸餾水至100ml,過(guò)濾。(5)PH6.7的Tris-HCl：5.98gTris，48ml1M的HCl加，蒸餾水至100ml,過(guò)濾。(6)10%AP（過(guò)硫酸銨）：1g過(guò)硫酸銨加蒸餾水至10ml。(7)20%蔗糖：20g蔗糖加80g水。(8)40%蔗糖：40g蔗糖加80g水。(9)Tris-Gly(電極緩沖液)：Tris6g，Gly28.8g，加蒸餾水至1000ml。使用時(shí)稀釋10倍，一般每次電泳，加800ml稀釋液即可。(10)脫色液：450ml甲醇，450mlH2O,再加100ml冰乙酸。(11)0.1MPH6.5磷酸緩沖液：稱取11.79gNa2HPO4·12H2O和10.69gNaH2PO4·2H2O，加入蒸餾水定容至1000ml。三、操作步驟1.試蟲(chóng)處理方法根據(jù)所選藥劑的具體情況自定。2.樣品的制備(1)血淋巴樣品。用蒸餾水沖洗蟲(chóng)體，剪斷腹足，用20μ1采血管取血放入加有少許苯基硫脲的小試管中，加入1000倍體積的20%蔗糖溶液，12000r/min冰凍離心15min，取上清液置于冰箱中備用。(2)消化道樣品。解剖試蟲(chóng)，取中腸部分，拉出圍食膜，再用蒸餾水沖洗，定量加入20%蔗糖溶液（1.5ml/10頭蟲(chóng)）冰浴勻漿，在12000r/min冰凍離心15min，上清液置于冰箱中備用。3.電泳（1）制膠安裝電泳槽，并以2%瓊脂沸液快速加到玻璃與膠框下緣開(kāi)口（順大片玻璃兩側(cè)傾倒至封住底槽）。在膠框上做標(biāo)記（2/3約高一點(diǎn)），以保證各次所制膠片的分離膠高度一致（10-15ml），加入分離膠，在膠面上加2-5ml厚的一層正丁醇。30min后，倒出正丁醇，以蒸餾水沖洗幾次，吸去水分，倒入濃縮膠約5ml，插入梳子，凝膠后（約40min）取出梳子，用濾紙條吸干槽內(nèi)殘留的水分。（2）點(diǎn)樣以微量進(jìn)樣器吸取10μ1樣液，加入樣品槽，然后在上面逐孔滴40%的蔗糖，加入電極緩沖液，再沿點(diǎn)樣孔上方以10%溴酚藍(lán)指示劑劃一條線。（3）電泳將電泳槽置于冰箱中，開(kāi)始控制電源110V，約2h后，指示線進(jìn)入分離膠后，電壓升至300V。（約跑3h）（4）剝膠取出膠板，在點(diǎn)樣起始端正對(duì)左上角切下一角作為標(biāo)記，以蒸餾水沖若干次，再將膠片放在染液中染色。（5）染色α-乙酸萘酯20mg，β-乙酸萘酯20mg，固蘭50mg,5ml丙酮（丙酮∶水=1∶1），加入150ml0.1M磷酸緩沖液（PH6.5），染色30min。（6）脫色將染好色的膠片放入脫色葉液中，在脫色搖床上脫色，直到底色褪去為止。（7）固定及保存將膠片從脫色液中取出，以蒸餾水或自來(lái)水沖洗，放在7%的乙醇溶液中（10ml乙醇，加170ml水）固定，過(guò)夜。（8）制干膠取一塊比膠略大的玻璃板，鋪上一張比兩塊玻璃板略大的浸濕的玻璃紙，將凝膠移至玻璃紙上，將玻璃紙的另一半覆蓋在膠上，去除氣泡，用玻璃條壓緊。將玻璃紙的多余邊緣部分褶向玻板反面，用小鐵夾夾緊，自然干燥一周即成較硬透明的膠片。此膠片可長(zhǎng)期保存，并可照相、掃描。四、結(jié)果處理對(duì)染色后的膠板上tr及ck的酶帶進(jìn)行分析，掃描后看其酶帶差異，并解釋藥劑對(duì)昆蟲(chóng)的致毒機(jī)理。

Ⅱ設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)五新殺蟲(chóng)化合物作用機(jī)理初步推測(cè)一、試驗(yàn)?zāi)康臍⑾x(chóng)化合物對(duì)昆蟲(chóng)的致毒機(jī)理一般與昆蟲(chóng)體內(nèi)的一些生理生化指標(biāo)的改變有關(guān)，一般為酶或者為受體。本實(shí)驗(yàn)要求通過(guò)所學(xué)的毒理學(xué)知識(shí)及實(shí)驗(yàn)方法，針對(duì)一新的殺蟲(chóng)化合物設(shè)計(jì)出研究其作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)方案，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)初步推測(cè)其作用機(jī)理。二、試驗(yàn)要求1.設(shè)計(jì)出較為完善的實(shí)驗(yàn)方案；2.通過(guò)癥狀觀察及簡(jiǎn)單的生理生化指標(biāo)的測(cè)試，分析推測(cè)該化合物的作用機(jī)理。

Ⅲ綜合性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)六吡蟲(chóng)啉對(duì)昆蟲(chóng)的生理生化影響一、試驗(yàn)?zāi)康臍⑾x(chóng)劑對(duì)昆蟲(chóng)的致毒機(jī)理較為復(fù)雜，不但對(duì)靶標(biāo)具有影響，而且對(duì)昆蟲(chóng)的代謝酶、解毒酶及保護(hù)酶均有一定的影響。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定吡蟲(chóng)啉對(duì)粘蟲(chóng)羧酸酯酶、磷酸酯酶、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶、多功能氧化酶及保護(hù)酶的活性，結(jié)合所學(xué)的毒理學(xué)知識(shí)，分析討論吡蟲(chóng)啉對(duì)昆蟲(chóng)生理生化的影響及其致毒機(jī)理，可進(jìn)一步加深學(xué)生對(duì)農(nóng)藥毒理學(xué)的認(rèn)識(shí)。二、試驗(yàn)要求1.設(shè)計(jì)出較為完善的實(shí)驗(yàn)方案；2.通過(guò)癥狀觀察及對(duì)乙酰膽堿酯酶、羧酸酯酶、磷酸酯酶、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶和多功能氧化酶活性的影響測(cè)定，分析討論吡蟲(chóng)啉對(duì)昆蟲(chóng)生理生化的影響及其致毒機(jī)理。【實(shí)驗(yàn)七】殺菌劑對(duì)菌體細(xì)胞膜通透性的影響1.實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：4學(xué)時(shí)。2.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)定殺菌劑對(duì)菌體通透性的影響，有助于殺菌劑對(duì)細(xì)胞膜影響的致毒機(jī)理的有深入的理解。3.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：接種辣椒疫霉病菌于PDA液體培養(yǎng)基中（不加瓊脂的PDA培養(yǎng)基），搖培20d（25℃，150r/min）。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體用去離子水懸浮至數(shù)量為109cfu·mL，分別向其中加入多果定至濃度為0、10、100μg/mL，充分搖勻，在作用10min、30min、60min、90min、120min后，用電導(dǎo)儀測(cè)定電導(dǎo)率。4.實(shí)驗(yàn)要求：必做。5.實(shí)驗(yàn)設(shè)備及器材：搖床，電導(dǎo)儀，三角瓶，量筒?！緦?shí)驗(yàn)八】除草劑對(duì)雜草光合作用的抑制1.實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)：3學(xué)時(shí)。2.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私獬輨┮种谱魑锕夂献饔玫臏y(cè)定方法。3.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：采用圓葉片漂浮法測(cè)定除草劑對(duì)雜草光合作用的抑制。4.實(shí)驗(yàn)要求：掌握除草劑抑制作物光合作用的測(cè)定方法