DB3301T 1081-2018三葉青種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20B21浙江DB3301省杭州市地方標(biāo)準(zhǔn)DB/T1081—2018杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB3301/T1081—2018前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由杭州市農(nóng)業(yè)局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：杭州中澤生物科技有限公司、杭州萬(wàn)向職業(yè)技術(shù)學(xué)院、浙江省中藥研究所、浙江大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳加紅、李夢(mèng)君、沈曉霞、沈斌斌、吳殿星、周志丹、楊峰。1DB3301/T1081—2018三葉青種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了三葉青種苗生產(chǎn)的術(shù)語(yǔ)定義、扦插繁殖場(chǎng)地選擇和準(zhǔn)備、扦插育苗、組培育苗、病蟲害防治、出圃、檔案管理、模式圖等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于三葉青種苗生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB/T8321農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則GB15618土壤環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1三葉青又名三葉崖爬藤(學(xué)名：TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg)，葡萄科多年生草質(zhì)藤本，塊根入藥。3.2母本株生長(zhǎng)健壯，作為營(yíng)養(yǎng)繁殖材料采集對(duì)象的三葉崖爬藤植株。3.3組培苗利用側(cè)芽作為外植體，采用組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的種苗。4產(chǎn)地選擇及準(zhǔn)備4.1產(chǎn)地環(huán)境產(chǎn)地土壤環(huán)境應(yīng)符合GB15618規(guī)定的二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)；空氣質(zhì)量應(yīng)符合GB3095規(guī)定的二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)；灌溉水質(zhì)應(yīng)符合GB5084規(guī)定的二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。4.2溫室育苗2DB3301/T1081—2018扦插及組培苗移植通常選擇在配備各類移動(dòng)苗床的溫室中進(jìn)行，如無(wú)移動(dòng)苗床，地面需覆蓋園藝地布。遮光率為50%~60%。4.3露地育苗露地育苗場(chǎng)地表面應(yīng)平整無(wú)雜草，覆蓋園藝地布，搭建蔭棚，其上覆蓋遮光率為50%~60%的遮陽(yáng)網(wǎng)。5扦插育苗5.1扦插基質(zhì)以70%園土+20%泥炭+10%草木灰作扦插基質(zhì)，加施基質(zhì)量1.5%~2.5%的腐熟有機(jī)肥或緩釋肥作基肥，充分拌勻，消毒。扦插前裝入50孔穴盤，壓緊。5.2扦插時(shí)間3月上旬~6月中旬，10月上旬~11月下旬。5.3插穗選擇在母本株上選擇二年生健壯枝條，斜剪成2節(jié)~3節(jié)、8㎝~10㎝長(zhǎng)的插穗，上部留1葉。5.4插穗處理扦插前用甲基托布津(70粉劑)500倍液浸泡插穗全株1h~2h,然后用IBA500㎎/L浸泡插穗基部1min后馬上扦插。5.5扦插方法將插穗斜插入穴孔，每穴1株，入土深度為技條的1/3~1/2，插后壓緊，澆透水。5.6插后管理5.6.1澆水扦插后35d~40d生根出葉前，每天噴水(澆水)1次~2次，保持基質(zhì)潮濕。生根后減少澆水次數(shù)，增加單次澆水量。5.6.2保溫保濕可在穴盤上方搭建小拱棚，保持60%~80%的空氣相對(duì)濕度和15℃~25℃溫度。5.6.3施肥扦插后20d，每隔15d噴施1次濃度為0.3%磷酸二氫鉀肥液，一般噴施3次~4次。5.6.4煉苗扦插后60d~80d，視根系及枝葉生長(zhǎng)情況，分次逐步延長(zhǎng)通風(fēng)時(shí)間、提高光照強(qiáng)度，最后達(dá)到栽培正常條件。6組培育苗3DB3301/T1081—20186.1組培流程外植體選取——外植體消毒——外植體切段——初代培養(yǎng)——增殖培養(yǎng)——生根培養(yǎng)——煉苗——組培苗移植6.2外植體的獲得和處理6.2.1外植體的選取選擇無(wú)病蟲害、無(wú)病毒侵染的生長(zhǎng)健壯的當(dāng)年生嫩枝。6.2.2外植體的消毒將采取的外植體嫩枝，用洗滌劑水刷洗，經(jīng)自然水沖洗干凈。在超凈工作臺(tái)上，將外植體嫩枝先放入75%的乙醇溶液中浸泡10s后，用無(wú)菌水洗凈，再放入0.1%HgCl2或2%次氯酸鈉溶液中消毒10min~20min后，用無(wú)菌水沖洗3次~5次。6.2.3外植體的切段在超凈工作臺(tái)上，用火焰滅菌的解剖刀、鑷子將嫩枝均勻切分成長(zhǎng)0.8cm~1.0cm的小段，每段含1個(gè)腋芽，接種于事先準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶5株~10株。芽朝上插入培養(yǎng)基中。6.3初代培養(yǎng)6.3.1初代培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。植物激素為：0.3mg/L~0.5mg/L濃度的芐氨基腺嘌呤(6-BA)；0.01mg/L~0.05mg/L濃度的萘乙酸(NAA)。6.3.2培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度為25℃±2℃。前期暗培養(yǎng)，待有芽萌發(fā)后光照強(qiáng)度3000lx~5000lx培養(yǎng)，光照時(shí)間為10h/d~12h/d，待組培苗生長(zhǎng)滿瓶后再增殖培養(yǎng)。6.4增殖培養(yǎng)6.4.1增殖培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。植物激素為2.0mg/L~4.0mg/L濃度的芐氨基腺嘌呤(6-BA)；0.1mg/L~0.3mg/L濃度的萘乙酸(NAA)。6.4.2培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度為25℃±2℃。光照強(qiáng)度3000lx~5000lx，光照時(shí)間為10h/d~12h/d。待組培苗生長(zhǎng)至大于2cm后，可以將小苗切斷進(jìn)行生根培養(yǎng)。6.5生根培養(yǎng)6.5.1生根培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基。植物激素為0.5mg/L~2.0mg/L濃度的吲哚丁酸(IBA)。6.5.2培養(yǎng)條件4DB3301/T1081—2018培養(yǎng)溫度為25℃±2℃。光照強(qiáng)度3000lx~5000lx，光照時(shí)間為10h/d~12h/d。待組培苗生長(zhǎng)至大于5cm后，可以將小苗移至溫室進(jìn)行煉苗。6.6煉苗移植前，將培養(yǎng)瓶放置在溫室自然散射光下，封口煉苗3d~7d。然后再開口煉苗3d~7d，開口煉苗時(shí)可在培養(yǎng)基表面灑薄薄一層水，溫度控制在25℃±3℃。6.7組培苗移植6.7.1基質(zhì)以60%泥炭土+40%珍珠巖作移栽基質(zhì)，要求疏松透氣且有一定肥力。調(diào)節(jié)pH值至5.5~6.0。6.7.2移栽煉苗完成后，加水將培養(yǎng)基打散倒出，再將小苗清洗干凈后，栽植于穴盤中。6.8移植后的管理6.8.1水分管理移栽時(shí)澆足水，以后每2d~3d淋水一次。2周~3周后，相對(duì)濕度控制在80%~90%，當(dāng)?shù)谝黄氯~完全張開后，降低濕度至60%~70%。6.8.2光照和溫度管理移栽后，光照強(qiáng)度控制在2000lx~3000lx。整個(gè)育苗期，溫度宜控制在15℃~30℃之間。6.8.3施肥移栽后第4周~8周，每周噴施1次濃度為0.3%磷酸二氫鉀肥液。7病蟲害防治三葉青苗期病蟲害較少，可通過(guò)降低濕度、加強(qiáng)通風(fēng)、保持生產(chǎn)環(huán)境清潔等方法防治病害；可采用殺蟲燈、沾蟲板、防蟲網(wǎng)減輕蟲害。如有必要也可采取藥劑防治，使用農(nóng)藥應(yīng)符合NY/T1276和GB/T8321的規(guī)定。8出圃組培苗移栽培育80d~100d，扦插苗完成煉苗后，新根5條以上，平均根長(zhǎng)超過(guò)3㎝，新葉3片~5片以上，植株生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害、葉色翠綠即可出圃。9檔案管理9.1生產(chǎn)單位應(yīng)完整保存真實(shí)的產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量資料、管理和銷售記錄。9.2管理和銷售記錄包括投入物品品種、來(lái)源、數(shù)量、購(gòu)買時(shí)間和地點(diǎn)、使用方法、使用時(shí)間、生產(chǎn)管理操作時(shí)間與方法、操作人員、種苗出圃時(shí)間及銷售情況等。5DB3301/T1081—201810模式圖三葉青種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程模式圖參見(jiàn)附錄A、附錄B。6DB3301/T1081—2018附錄A(資料性附錄)三葉青種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程模式圖(扦插育苗)三葉青種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程模式參見(jiàn)圖A.1。圖A.1三葉青種苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程模式