微生物真題答案1原噬菌體prophage整合在溶源細(xì)胞染色體上的

原噬菌體：原噬菌體（prophage：整合在溶源細(xì)胞上的噬菌體核酸稱為原噬菌體，或前噬菌體史中的一半，故叫半知菌。細(xì)胞器：是細(xì)胞中通過生物膜與細(xì)胞中其他部分分隔開來的、功能上獨(dú)立的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)而且各種末端產(chǎn)物的抑制作用互不干擾。當(dāng)各種末端產(chǎn)物同時(shí)過量時(shí)，它們的抑制作用是累加的。原生融合育種將雙親株先經(jīng)酶法破壁原生然后用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法，促進(jìn)兩親株原生融合，經(jīng)交換、重組而達(dá)到雜交的目的，通過篩選獲得集兩親株優(yōu)良性狀于一身的穩(wěn)定融合子。兼性厭氧微生物：以在有氧的條件下生長為主也可兼在厭氧條件下生長的微生物。它們在有氧時(shí)靠呼吸產(chǎn)能，無氧時(shí)則借發(fā)酵或無氧呼吸產(chǎn)能；細(xì)胞含SOD和過氧化氫酶?；危河捎诨瘜W(xué)或者物理因子的刺激，阻礙了細(xì)胞的發(fā)育而引起的異常形態(tài)衰頹形：由于培養(yǎng)時(shí)間過久、細(xì)胞衰老、營養(yǎng)缺乏或自身的代謝產(chǎn)物積累過多等原因引起細(xì)胞衰老的異常形不好，我們的做法是將低pH培養(yǎng)基和瓊脂水溶液分開滅菌，用前等量混合，就可以解決不凝固的問題。瓊脂要加大量，這樣分開滅是對的，PH2上的酸度都沒問題。暗修復(fù)：這是一種不依賴可見光，只通過酶切作用去除嘧啶二聚體，隨后重新合成一段正常的DNAlag（prokaryote：簡要說明細(xì)菌、放線菌、酵母、霉菌的細(xì)胞壁的化學(xué)組成。答：（1）G+菌細(xì)胞壁化學(xué)組成以肽聚糖為主。①雙糖單位：由一個(gè)N-乙酰葡萄糖胺（NAG）和N-乙酰胞壁酸（NAM）通過β-1、4-糖苷鍵連接而成②短肽“尾L-Ala、D-Glu、L-Lys、D-Ala③肽“橋指把前一肽聚糖單體肽“尾”中的第四個(gè)氨基酸D-Ala與后一個(gè)肽聚糖單體肽“尾”中的第氨基酸L-Lys過肽鍵連接起來的短肽☆、革蘭氏菌細(xì)胞壁的組成和結(jié)構(gòu)比G+菌更復(fù)雜。主要成份為：脂多糖、磷脂、脂蛋白、肽聚糖①肽聚糖：埋藏在外膜層之內(nèi)，是僅由1~2層肽聚糖網(wǎng)狀分子組成的薄層（2~3nm），對機(jī)械強(qiáng)度的抵抗力較G+菌弱。沒有特殊的肽橋，只形成較為稀疏、機(jī)械強(qiáng)度較差的肽聚②短肽“尾”第三位L-Lys由內(nèi)消旋二氨基庚二酸（m-DAP）取代，只在原核微生物細(xì)胞壁上發(fā)現(xiàn)③外膜：位于G-菌細(xì)胞壁外層，由脂多糖、磷脂和脂蛋白等若干種蛋白質(zhì)組成的膜，有時(shí)也稱為外壁④脂多糖（LPS）：位于G-菌細(xì)胞壁最外層的一層較厚的類脂多糖類物質(zhì)，由類脂A、多糖和O-特異側(cè)鏈（或稱O-多糖或O-抗原）三部分組成。⑤外膜蛋白：嵌合在LPS磷脂層外膜上的蛋白酵母菌細(xì)胞壁的化學(xué)組成要成分為酵母纖維素。三明治狀——外層為甘露聚糖內(nèi)層為葡聚糖霉菌細(xì)胞壁有內(nèi)至外相應(yīng)的為幾丁質(zhì)層、蛋白質(zhì)層、葡聚糖蛋白網(wǎng)層和葡聚糖層討論純種擴(kuò)大培養(yǎng)微生物全過污染微生物的防止方法及原理答（1）染菌的防止方法：①保藏菌種的質(zhì)量控制；②嚴(yán)格無菌操作設(shè)備附件滲漏造成的染菌的防止方法：①發(fā)酵設(shè)備采用耐腐蝕材料，或設(shè)備內(nèi)壁用防腐涂料處理；②生產(chǎn)過腐蝕性液體的補(bǔ)充，應(yīng)緩慢流加并攪拌；③定期檢修；④采用蒸汽進(jìn)行滅菌。原理：培養(yǎng)基滅菌不徹底導(dǎo)致的染菌的防止方法：①準(zhǔn)確計(jì)算滅菌時(shí)間、壓力，嚴(yán)格操作證發(fā)酵設(shè)備結(jié)構(gòu)合理，生產(chǎn)結(jié)束后及時(shí)對設(shè)備進(jìn)行徹底；③培養(yǎng)基采用分配滅菌和連續(xù)滅菌法。原理：空氣系統(tǒng)導(dǎo)致的染菌的防止方法：①空氣凈化系統(tǒng)采用介質(zhì)過濾除菌。原理；介質(zhì)過濾除菌就是把空氣中的各種微粒和極少量的游離微生物捕集起來予以除掉；②定期檢修過濾器，更換過濾介質(zhì)。蒸汽在被滅菌物體表面凝結(jié)，同時(shí)放出大量的汽化潛熱，這種潛熱能迅速提高滅菌物體的溫度，縮短連續(xù)滅菌時(shí)，發(fā)酵罐在培養(yǎng)基滅菌之前，直接用蒸汽進(jìn)行空罐滅菌。原理（1）（2）（3）（4）（5）（6）（7GC（G+Cmol%（8和生理生化特征為分類依據(jù)（有主、副之分），并結(jié)合生態(tài)特征、學(xué)反應(yīng)、細(xì)胞壁成分、（G+C）mol%、核酸分子雜交、16S/18SrRNA是根據(jù)較多的特征（一般50~60個(gè)，可多達(dá)150個(gè)）進(jìn)行分類。在分類中，每一個(gè)特征的地位是特性為依據(jù)，最后將所測菌株兩兩進(jìn)行比較，并借用計(jì)算機(jī)計(jì)算出菌株間的總類似值。再結(jié)合上的判斷，排列出一個(gè)個(gè)分類群第二部α-淀粉酶生產(chǎn)用菌：bacillussubtilis枯草芽孢桿菌)；啤酒釀造：啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae；谷氨酸發(fā)酵：棒狀桿菌、Corynebacteriumcrenatum（純齒棒狀桿菌；檸檬酸發(fā)酵：Aspergillusnige（黑曲霉；酒曲：Rhizopusoryzae（米根霉）豆腐乳Mucorsufu（腐乳毛霉；醬油：Aspergillusoryzae（米曲霉；纖維素酶：Aspergillusnige（黑曲霉）三、選吐溫80的作用據(jù)說可以作為分散劑，使得細(xì)菌更均勻的分散在培養(yǎng)基中，細(xì)菌計(jì)數(shù)更準(zhǔn)對放線菌和霉菌的孢子，采用玻璃珠或石英砂振蕩打散孢子后，用濾紙或棉花過濾；對某些黏性大的孢子，常加入0.05％的分散劑(如吐溫80，Tween80)以獲得分散的單個(gè)孢子。兩個(gè)不同的子核。鎖狀聯(lián)合完成。如下圖所示。五、問答（1）單菌株純培養(yǎng)的應(yīng)用價(jià)值：是目前發(fā)酵工主要。單細(xì)胞微生物在液體培養(yǎng)時(shí)的生長規(guī)律，目前已研究的很透徹。酵工業(yè)上可以根據(jù)單細(xì)胞微生物的生長規(guī)律指導(dǎo)生產(chǎn)低成本。補(bǔ)料分批培養(yǎng)和連續(xù)培養(yǎng)工藝，就是在對單細(xì)胞微生物的生長規(guī)律研究基礎(chǔ)上創(chuàng)新，目前已在工業(yè)生產(chǎn)中廣泛應(yīng)高的酶種類有限，不能單獨(dú)將簡單的物質(zhì)合成某些復(fù)雜的化合物，或者轉(zhuǎn)化效率低。混合培養(yǎng)又稱混菌培養(yǎng)，有時(shí)也稱混合發(fā)酵，這是在深入研究微生物純培養(yǎng)基礎(chǔ)上的人工“微生物生得新型的或優(yōu)質(zhì)的發(fā)酵產(chǎn)品，有時(shí)比單菌培養(yǎng)反應(yīng)更快、更有效，更簡便。舉例：①二步發(fā)酵法生產(chǎn)維生素C（二步發(fā)酵法是指反應(yīng)中有兩步由微生物發(fā)酵，其余各步仍為化學(xué)轉(zhuǎn)化反應(yīng)。②傳統(tǒng)的固態(tài)白酒和醬油的發(fā)酵都是采用多菌培養(yǎng)發(fā)酵。連續(xù)培養(yǎng)又稱開放培養(yǎng)。連續(xù)培養(yǎng)如用于生產(chǎn)實(shí)踐，就稱為連續(xù)發(fā)酵連續(xù)發(fā)酵的應(yīng)用價(jià)值：①微生物可長期保持在指數(shù)期的平衡生長狀態(tài)和穩(wěn)定的生長速率；②可簡化裝料、滅菌、出料和發(fā)酵罐等單元操作，從而減少了非生產(chǎn)時(shí)間和提高設(shè)備利用率；③便于自動化控制；④產(chǎn)品質(zhì)量較穩(wěn)定；⑤節(jié)省大量的人力、動力、水和蒸汽，且使水、汽、電的負(fù)荷均勻合理。連續(xù)發(fā)酵的缺點(diǎn)：菌種易；易污染雜菌；營養(yǎng)物質(zhì)利用率低于分批發(fā)酵四、名（10分鐘DNA一、填棒桿菌Corynebacteriumpekinense革蘭氏陽性桿菌化能異養(yǎng)菌性厭解脂假絲酵母(Candidalipolytica)用正烷烴產(chǎn)生檸檬酸的研究舉例分析發(fā)酵工業(yè)上使用的培養(yǎng)基組成原料的選擇依答：①原料組成能滿足微生物生理功能要求，濃度恰當(dāng)②培養(yǎng)基組成理化性質(zhì)穩(wěn)定，不相互干度和滲透壓適④培養(yǎng)基的品種和濃度要利于產(chǎn)物的合⑤原料不影響通氣和攪拌，利于產(chǎn)物提料價(jià)廉易得，經(jīng)子囊孢子：子囊菌亞門的真菌產(chǎn)生于子囊中經(jīng)減數(shù)后形成的有性孢子k12（λ：culturetime（n（G1碳源：凡是可以作為微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)或代謝產(chǎn)物中碳架來源的營養(yǎng)物。除水外，碳源是需要量最大的營養(yǎng)生理功能：①提供C氮源：凡是構(gòu)成微生物細(xì)胞物質(zhì)或代謝產(chǎn)物中氮素來源的營養(yǎng)物質(zhì)。氮源分為無機(jī)氮與有機(jī)氮，速效性氮源NCHO”或“N·C·H·O·X”類優(yōu)于“N·HN·O”類，而最不易利用的則是“N”類。，生理功能：①提供N元素；②氮源一般不提供能量數(shù)細(xì)菌能通過氧化NH4+或NO3-中的N獲取能量，化學(xué)物質(zhì)（化能營養(yǎng)型（同碳源（不同于碳源Zn，Co）及酶的激活劑（Mn，Mg）；③參與能量轉(zhuǎn)移，如P；K，Na（被磷酸化）米曲Aspergillus黑曲霉是制醬、釀酒、制醋的主要菌種。是生產(chǎn)酶制劑（蛋白酶、淀粉酶、果膠酶）（如檸：，：，增殖培養(yǎng)基：通過控制培養(yǎng)基的工業(yè)營養(yǎng)成分和/生長受到抑制或繁殖減緩，從而提高樣品中目的菌的數(shù)量和比例。4-5說明瓊脂塊中有抗生素，抑菌圈大小說明抗生素單位的高低。將空氣中的微生物過濾后變成無菌空氣吹向操作臺，可防止周圍有菌空氣流入，能保證操作臺始終保持無菌狀答：啤酒釀造所利用的主要微生物是啤酒酵母，主要作用是通過發(fā)酵將麥汁中存在的可發(fā)酵性糖轉(zhuǎn)換為，同一般接入的酵母生長時(shí)期在對數(shù)期。發(fā)酵開始后，幾天會迅速增殖，直到穩(wěn)定期，達(dá)到最大。此時(shí)屬于高泡期，降糖最快，產(chǎn)生乙醇和二氧化碳也最多。隨著乙醇的積累、其他不利于酵母生存的環(huán)境因子的產(chǎn)生酵糖降小于0.2-0.3°/d時(shí)，主酵結(jié)束，進(jìn)入后酵階段。后酵過酵母數(shù)已經(jīng)很少，且仍逐漸降低，其發(fā)酵降9.（A，走乙醛酸循環(huán)同化成三碳、四碳化合物，再糖異生成葡萄TCA）（40%輻射和很多的化學(xué)物質(zhì)都有很強(qiáng)的抗性。一般可采用高壓滅菌法121度30分鐘才能徹底消滅它。經(jīng)典分類法：是一種隨機(jī)的和不系統(tǒng)的根據(jù)少數(shù)幾種特征進(jìn)行分類的方法。主要以形態(tài)特征和生理生化特征為分類依據(jù)（有主、副之分），并結(jié)合生態(tài)特征、學(xué)反應(yīng)、細(xì)胞壁成分、對噬菌體的敏感性等特征進(jìn)行分（MM）多糖、脂類、維生素等。何謂溶源性細(xì)菌？有哪些基本特征⑤溶源菌的復(fù)愈：溶源性細(xì)胞有時(shí)了其中的前噬菌體，由整合態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闋I養(yǎng)態(tài)細(xì)菌的抗生素抗性突變株如何篩選5ml37℃條件下培養(yǎng)至對數(shù)期。離心（3500r/min，10min）5ml無菌生理鹽水中，用玻璃珠充分振蕩分散細(xì)胞，制成108個(gè)/ml的菌懸液。5ml6cm的無菌培養(yǎng)皿（含轉(zhuǎn)子）15W30cm20min1min2min后，立即蓋上皿蓋，照射完畢，將全部菌液于含有3ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的離心管中，混勻后用黑紙包裹，3710ml9cm（此濃度要高于對出發(fā)菌株的臨界致死濃度）瓊脂培養(yǎng)基10ml。凝固后在皿底做一個(gè)“↑”符號標(biāo)記，以示藥物濃度由底到高的方向。平板放置過夜。將經(jīng)后培養(yǎng)的菌液進(jìn)行離心（3500r/min，10min）0.2ml生理鹽水，制成濃的菌液后全部涂布于梯度平板上，倒置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)2d，然后將出現(xiàn)于高藥物濃度區(qū)域內(nèi)的單菌落分別接種到斜面上。371~2d，觀察生長情況，確定抗藥性水平，選擇優(yōu)良菌種轉(zhuǎn)接至斜面上，放入冰箱微生物與人類的生產(chǎn)、生活和生存關(guān)。有很多食品（如醬油、醋、味精、酒、酸奶、奶酪、蘑菇、工業(yè)大豆根瘤菌）與動植物殘?bào)w降解者（如纖維素的降解（1）分離得一株酵母突變株，其在葡萄糖降解的過從乙醛到乙醇已經(jīng)被阻斷，若以葡萄糖為碳源，這突變化下，脫羧產(chǎn)生乙醛，乙醛在醇脫氫酶催化下被NADH還原成乙醇。在糖分解及代謝產(chǎn)物生產(chǎn)過程產(chǎn)生大量NADH，為了維持細(xì)胞正常生長和代謝流順利進(jìn)行，NADH氧化還原必須保持平衡。酵母菌從乙醛到乙醇的路徑NADH還原成乙醇，NADH就不能被氧化，NAD+再生受阻，也就不能在無氧條件下的葡萄糖平板上生長。在好氧生長條件下，酵母中NADHNADH氧化還原可以保持平衡，故可以在有氧條件下的葡萄糖平（Streptomycesgriseus）2試簡述菌種保藏的目的及各種保藏方法的原理及適用對象。隔絕空氣，減少氧的供應(yīng)，從而降低微生物的代謝，因此，可延長保藏期。適用對象：產(chǎn)孢子（芽孢）原生及細(xì)胞膜的損傷。因?yàn)樵谶m當(dāng)濃度的甘油中，將會有少量甘油分子滲入細(xì)胞，使菌種細(xì)胞在冷凍過程中緩解了其由于強(qiáng)烈脫水及胞內(nèi)形成冰晶體而引起的破壞作用。再將甘油保存菌種放在-20（甘油或二甲基亞砜）降低變異率和長期保持原種的性狀。是當(dāng)前保藏菌種最理想的方法。葡萄糖效應(yīng)：將大腸桿菌培養(yǎng)在含有乳糖和葡萄糖的培養(yǎng)基上，發(fā)現(xiàn)該菌有先利用葡萄糖，在葡萄糖耗盡后才誘導(dǎo)（inducer）酶產(chǎn)生的效應(yīng)物?；钚宰瓒舻鞍捉Y(jié)使阻遏蛋白構(gòu)象改變而失活，結(jié)2.L-（3種以上）（1）選育方法：出發(fā)菌株的培養(yǎng)→誘變菌懸液的→誘變處理→后培養(yǎng)→淘汰野生型→檢出缺陷型→鑒別缺陷型。依據(jù)：由于編碼合成高絲氨酸脫氫酶的發(fā)生突變使高絲氨酸脫氫酶的催化部位發(fā)生改變，失去催化活性或催在限量補(bǔ)充Hser或（Met+Thr）菌體生長的情況下，可解除Thr和Lys對天冬氨酸激酶的協(xié)同反饋抑制，即使賴氨酸過剩，也能大量形成天冬氨酸半醛，由于產(chǎn)生菌失去了合成Hser的能力，使天冬氨酸半醛這個(gè)中間產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入Lys的合成而大量生產(chǎn)Lys。（Hserl選育方法：出發(fā)菌株的培養(yǎng)→誘變菌懸液的→誘變處理→后培養(yǎng)→經(jīng)后培養(yǎng)的菌液10倍系列稀釋后涂布于MMMMCMMMCMMMCM上生長慢的菌株即為Hserl突變株。HserlHser，僅能維持細(xì)胞的最低生LysHserMetIle濃度達(dá)不到進(jìn)行反饋調(diào)節(jié)的濃度，從而能大量積累Lys。AEC抗性突變株（AECr：AECS-（2氨基乙基）-L-半胱氨酸，為Lys于臨界致死濃度的平板上→培養(yǎng)→抗性平板上長出的小菌落即是AECr。依據(jù)：AECr改變了Lys主動系統(tǒng)，使菌體在胞外Lys濃度比胞內(nèi)濃度高5倍的情況下，仍能繼續(xù)排出胞內(nèi)合成的Lys，從而獲得高產(chǎn)。選育方法：出發(fā)菌株的培養(yǎng)→誘變菌懸液的→誘變處理→后培養(yǎng)→淘汰野生型→檢出缺陷型→鑒別缺陷型。依據(jù)：由于編碼合成r→Thr途徑中的某一酶的發(fā)生突變使該酶的催化部位發(fā)生改變，失去催化活性或催化部位和調(diào)節(jié)部位同時(shí)改變，導(dǎo)致該酶失活，則代謝途徑將在此處受阻，導(dǎo)致Thr的合成途徑中斷，在限量補(bǔ)充Thr菌體生長的情況下可解除Thr和ys對天氨酸激酶的協(xié)同反饋抑制，即使賴氨酸過剩，也ys。culture廠中如何根據(jù)生長曲線指導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)（以谷氨酸發(fā)酵為例）。（一生長線在微生的分批培養(yǎng)過定時(shí)取樣，測單位體積里的細(xì)胞數(shù)或重量，以養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)4成的曲線，稱之為生長曲線。應(yīng)環(huán)境，可能產(chǎn)生特異的酶；③對外界理化因子的抵抗能力減弱；RNArRNA間代謝產(chǎn)物等。為產(chǎn)生誘導(dǎo)酶或合成中間代謝產(chǎn)物，就需要一段適應(yīng)期。影響延遲期長短的因素很多，除菌種外，主要有3種：①接種齡如果以對數(shù)期接種的接種，則延滯期就短；反之，如以延滯期的接種，則子代培養(yǎng)物的延滯期就長。②接種量接種量的大小明顯影響延滯期的縮短延遲期的措施：①通過遺傳學(xué)方法改變種的遺傳特性使遲縮短；②利用對數(shù)生長期的細(xì)胞作為種子；③盡量使接種前后所使用的培養(yǎng)基組成不要相差太大；④適當(dāng)擴(kuò)大接種量。對數(shù)期的特點(diǎn)（細(xì)胞生理特性）：①生長速率常數(shù)R最大，因而細(xì)胞每一次所需的代時(shí)或原生質(zhì)增加一倍所需的倍增時(shí)間最短；②細(xì)菌形態(tài)、化學(xué)組成和生理特性等均較一致；③酶系活躍，代謝旺盛，影響微生物增代時(shí)間（代時(shí)）穩(wěn)定期：微生物生長速率降低，繁殖率和率趨于平衡，活菌數(shù)基本保持穩(wěn)定，從而進(jìn)入穩(wěn)定期穩(wěn)定的特（胞生理特性①細(xì)胞速度降低率于繁殖率，糖原等細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含物；②②因細(xì)胞本身所產(chǎn)生的酶和代謝產(chǎn)物的作用而使菌體分解衰亡期到來的原因是：營養(yǎng)物質(zhì)耗盡和代謝產(chǎn)物的大量積累,細(xì)菌速率超過新生速率，整個(gè)群體呈（二）酵培養(yǎng)基的差異等來縮短延遲期，采用分批補(bǔ)料發(fā)酵等來降低成本。保持紫色。革蘭氏菌的細(xì)胞壁肽聚糖層薄和交聯(lián)度差，外膜層類脂含量高，遇脫色劑乙醇后，16~24h③初染：于制片上滴加結(jié)晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余④媒染：用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1min95%乙醇從2min以嚴(yán)格規(guī)定。一般可用已知革蘭氏陽性菌和菌做練習(xí)，以掌握脫色時(shí)間。當(dāng)要確認(rèn)一個(gè)未知菌的革蘭氏反應(yīng)時(shí)，應(yīng)同時(shí)做一張已知革蘭氏陽性菌和菌的混合涂片，以資對照。②染色過勿使染色液干涸，用水沖洗后，應(yīng)甩去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果③選用培養(yǎng)18~24h菌齡的純培養(yǎng)物為宜，因?yàn)榫w或自溶常常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈反應(yīng)。噬菌體快速顯微鏡直接檢查定時(shí)取發(fā)酵液進(jìn)行涂片染色，在顯微鏡下檢查有無異常菌體取賴氨酸發(fā)酵正常發(fā)酵液和異常發(fā)酵液，涂片染色，顯微鏡觀察菌體形態(tài)及生長情況平板交叉劃取平皿按常規(guī)倒入培養(yǎng)基，制成平板，然后取指示菌液劃線，再取與其交叉劃線。37.5℃恒溫培養(yǎng)10～12h見到由含噬菌體膠液線向敏感菌線析展的一條亮線（噬菌帶）。此法既可檢查噬菌體，又可檢查雜菌污染離心分離加熱法（快速檢查取生產(chǎn)中正常培養(yǎng)液和懷疑侵染有噬菌體的異常菌培養(yǎng)液，4000rpm心20min，分別取兩組發(fā)酵液的上清液(A1)，一部分于分光光度計(jì)上測定OD650光密度值，另外各取5mL上清液于試管中，置水浴中煮沸（A2，檢測A2溶液OD650光密度值，記錄結(jié)果，比較光密度的差異載玻片法快速檢單層平板法：單層平板法是液體和空氣檢測的常規(guī)方法具體操作步驟：無菌操作下吸取待測樣品1ml，指示菌液0.5ml，加入平皿內(nèi)，將冷卻至45℃的培養(yǎng)基倒入8ml，搖勻后，于37.5℃恒溫箱中培養(yǎng)18～24h，細(xì)心觀察有無噬菌空斑。雙層瓊脂平板首先倒入下層瓊脂培養(yǎng)基（2%，約10mL/皿）待用。融化上層培養(yǎng)基（1%，冷卻至50℃左右時(shí)，每管中加入敏感指示菌(枯草芽孢桿菌)菌液0.2mL混合后立即倒入上述平板鋪平。在待檢測角落空氣中幾分鐘，轉(zhuǎn)入恒溫培養(yǎng)箱，30℃恒溫培養(yǎng)6～12h觀察結(jié)果。噬菌體，則在雙層培養(yǎng)基的上層出現(xiàn)透亮無菌二、名DNADNADNADNADNA連接酶將外源DNA與載體共價(jià)連接的。DNA重組技術(shù)：工程是通過操作，將目的或DNA片段與合適的載體連接轉(zhuǎn)入目標(biāo)生物細(xì)胞，通、轉(zhuǎn)錄、翻譯外源目的以及蛋白質(zhì)的活性表達(dá)，使轉(zhuǎn)生物獲得新的遺傳性狀的操作結(jié)構(gòu)類似物：所謂結(jié)構(gòu)類似物（亦稱代謝拮抗物）是指那些在結(jié)構(gòu)上和代謝產(chǎn)物（氨基酸、嘌呤、嘧啶、維生素等）相似，可起到謝物所具有的調(diào)節(jié)作用而不具備其生理活性的一類化合物。（tyndalization37連續(xù)重復(fù)3天即可在較低的溫度下達(dá)到徹底滅菌的良好效果。（1）結(jié)合呈紅色，聚糖分子的β-1，4-糖苷鍵被木聚糖酶水解后，這種紅色可被NaCI溶液脫去，從而在菌落周圍形成明顯的透明圈。因此可根據(jù)單菌落透明圈直徑與菌落直徑比值大小初篩菌株。方法與步驟：首先查閱文獻(xiàn)，了解所需菌種的生長培養(yǎng)特性，確定試驗(yàn)方案；場地表5~15cm以2010g90ml無菌水和玻璃珠的三角瓶中振蕩培養(yǎng)25min，靜置30S；取上清液涂布到以木聚2d，通過計(jì)算HC值（等于透明圈直徑與單菌落直徑之比）初步比較酶活大小挑取單菌落；將挑取的單菌落轉(zhuǎn)接PDA斜面培養(yǎng)保藏。再通過三角瓶固態(tài)發(fā)酵試2從代謝調(diào)控的一般原理出發(fā)，試設(shè)計(jì)菌種選育方案從谷氨酸產(chǎn)生菌選育苯丙氨酸高產(chǎn)菌（要求三種不同的方案，（1）育種原理：由于編碼合成預(yù)苯酸→Tyr的某一種酶的發(fā)生突變使該酶的催化部位發(fā)生改變，失去催化活性或Tyr量補(bǔ)充Tyr菌體生長的情況下，可解除Tyr對Tyr分支途徑的第一步酶的反饋抑制和對分支酸變位酶的協(xié)同反饋抑制，同時(shí)也可解除對赤蘚糖-4-磷酸和磷酸烯醇式酸的縮合反應(yīng)的反饋抑制，又由于產(chǎn)生菌失去了合成Tyr的能力，使phe分支途徑增強(qiáng)。Tyr-突變株的選育方法：谷氨酸產(chǎn)生菌的培養(yǎng)→誘變菌懸液的→誘變處理→后培養(yǎng)→淘汰野生型→檢出缺陷的合成與phe的合成不再受phe的累積抑制→反饋抑制解除。PAPrAEC備→誘變處理→涂布于含有高于臨界致死濃度的平板上→培養(yǎng)→抗性平板上長出的小菌落即是PAPr突變株。（原養(yǎng)型）Trp--MMphe的（1）（G+Cmol%）DNA（nucleoid（endospore（psychrophiles溫度在0℃以下的一類微生物。.13.載體：在重組DNA技術(shù)中攜帶外源DNA片段（目的）進(jìn)入受體細(xì)胞的一種能自我的DNA分子。1（1）G-（DAP）LLysD-AlaDAP酵母菌細(xì)胞壁化學(xué)組成：葡聚糖、甘露聚糖、蛋白質(zhì)、幾丁質(zhì)、脂類、無機(jī)物（磷酸鹽等）。①吸附：噬菌體的吸附與受體細(xì)胞的特殊位點(diǎn)的接觸與結(jié)合。f1、fdDNA自性纖毛中空管侵③增殖：噬菌體核酸物質(zhì)及蛋白質(zhì)在宿主細(xì)胞內(nèi)的合成。噬菌體核酸的：不同的噬菌體，其核酸的類型不同，方式也不同。（裝配）3抗反饋調(diào)節(jié)突變株：是指一種因變構(gòu)酶的結(jié)構(gòu)或編碼阻遏蛋白的調(diào)節(jié)發(fā)生突變，使變構(gòu)酶或阻遏蛋白不能與結(jié)構(gòu)類似物結(jié)合，而對反饋抑制不敏感或?qū)ψ瓒粲锌剐缘慕M成型突變株，或兼而有之的突變株。答：（1）涂布平板分離法：對樣品進(jìn)行10倍系列稀釋；取適當(dāng)稀釋度的稀釋液0.1ml，加至瓊脂培養(yǎng)基表傾注平板分離法：對樣品進(jìn)行10倍系列稀釋；取適當(dāng)稀釋度的稀釋液0.2ml4510~1ml加入含有樣品稀釋液的培養(yǎng)皿中；通過輕轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿使接種物和培養(yǎng)基在培真菌的單孢子分離法：采用的厚壁磨口毛細(xì)血管，吸取預(yù)先已適當(dāng)萌發(fā)的孢子懸液，多點(diǎn)的點(diǎn)種在作將待分離的真菌菌絲接種于平板。然后在上面覆蓋一片無菌的蓋玻片，并用無菌鑷子稍向下壓。將培養(yǎng)皿倒2848h無菌小刀將菌絲尖端連同瓊脂塊一起切下，移至適合該真菌生長的斜面培養(yǎng)基上，即可獲得純種。（1）氧下生長，不需要加入轉(zhuǎn)向劑，酵母可在較高的糖濃度生長發(fā)酵，能顯著提高糖的轉(zhuǎn)化率；④多元醇的發(fā)酵；⑤生產(chǎn)酵母細(xì)胞如果不能耐高滲壓，酵耐滲透壓微生物篩選方法與步驟：首先查閱文獻(xiàn)，了解耐滲透壓微生物的生長培養(yǎng)特性，確定試驗(yàn)方案；NaC1（LB或PDA培養(yǎng)基上添加不同質(zhì)量的NaC1，使0％、3％、6％、9％、12l5％）上，283d簡要說明微生物中核酸DNA的各種模型答：（1）直線雙向模型：單起點(diǎn)，雙向，T7；多起點(diǎn)，雙向，真核微生物DNA.coli.的DNA，都是對稱的，然而也有例外?？莶輻U菌DNA的雖是雙向的，但是兩個(gè)叉移動的距離不同；質(zhì)粒R6K兩個(gè)叉的移動是不對稱的。滾環(huán)模型：環(huán)狀DNA的一種模式，在該模式中，DNA聚合酶結(jié)合在一個(gè)缺口鏈的3端，繞DNADNADNAFDNAλ裂解途經(jīng)的，φX174，M13，G4等單鏈環(huán)狀DNA噬菌體第二階段都是滾環(huán)。（4）D環(huán)模型：雙螺旋的兩條鏈并