實驗MS培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制課件

實驗1胡蘿卜愈傷組織的誘導培養(yǎng)實驗內(nèi)容：1-1MS培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制1-2胡蘿卜愈傷組織誘導培養(yǎng)基的配制1-3胡蘿卜愈傷組織的誘導1-4胡蘿卜愈傷組織繼代培養(yǎng)基的配制1-5胡蘿卜愈傷組織的繼代培養(yǎng)實驗1-1MS培養(yǎng)基母液

和常用試劑的配制1實驗目的通過本次實驗，使學生能熟練準確配制MS培養(yǎng)基母液和組培室常用的化學試劑，鞏固相關理論基礎知識。2實驗原理培養(yǎng)基是植物離體培養(yǎng)組織和細胞賴以生存的營養(yǎng)基質(zhì)。配制培養(yǎng)基時，為了減少試劑稱取時的工作量和少量稱取時出現(xiàn)的誤差，以及避免多種營養(yǎng)成分混合導致沉淀產(chǎn)生或相互反應而失去培養(yǎng)效果，預先要將各種營養(yǎng)成分配制為一定倍數(shù)的培養(yǎng)基母液，待使用時稀釋到要求的濃度。母液的濃度為培養(yǎng)基濃度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。4藥品和試劑硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、碘化鉀、硫酸錳、硫酸鋅、鉬酸鈉、硫酸銅、氯化鈷、乙二胺四乙酸二鈉、硫酸亞鐵、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆素、煙酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、6-BA（6-芐基腺嘌呤）、KT、濃鹽酸、氫氧化鈉、濃硫酸、重鉻酸鉀、95%酒精、蒸餾水等。5MS培養(yǎng)基母液和

常用試劑的配制流程5.1培養(yǎng)基的成分

目前，不論液體培養(yǎng)還是固體培養(yǎng)，大多數(shù)植物組織培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基都是由無機營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機附加物等幾大類物質(zhì)組成。5.2培養(yǎng)基的配制方法配制培養(yǎng)基的最簡單的方法是用市售培養(yǎng)基干粉溶解在蒸餾水里，加上蔗糖、瓊脂和其他必要的補加物，再加入蒸餾水使之達到最終的容積。最后調(diào)節(jié)pH值，高壓滅菌，于是制成所需要的培養(yǎng)基。5.3MS培養(yǎng)基母液的配制母液的配制有兩種方法：一種是配制成單一化合物母液。此法適合配制多種培養(yǎng)基都需要的同一種母液。另一種是配成幾種不同化合物的混合母液。此法在大量配制同種培養(yǎng)基時省時省力。由于MS培養(yǎng)基較為常用，故配制MS培養(yǎng)基母液。配好的母液應放在試劑瓶中貯存。在配制MS培養(yǎng)基母液時，為減少工作量可以把幾種藥品（如培養(yǎng)基中的大量元素或微量元素）配在同一母液中，但應注意各種化合物的組合以及加入的先后順序，以免發(fā)生沉淀。通常把每種試劑單獨溶解后再與別的也已完全溶解的藥品混合，或者待前一種化合物完全溶解后再加入后一種化合物。混合已溶解的各種礦質(zhì)鹽時還應注意先后順序，力求把Ca2+與SO42-和PO43-錯開，以免形成硫酸鈣或磷酸鈣的不溶物。同時，要慢慢地混合，邊混合邊攪拌。5.3.1大量元素母液的配制MS培養(yǎng)基中的9種大量元素除C、H、O外，剩下的六種可由KNO3、NH4NO3、CaCl2

?2H20、MgSO4

?7H2O、KH2PO4幾種無機鹽來供應，它們可配在同一母液中（具體配制見下表）。配制的步驟為：確定母液的濃度和體積→計算各種化合物用量→稱量→分別溶解→混合→定容→裝瓶→貼標簽→放入冰箱保存。注意：CaCl2?2H2O最后加入5.3.2微量元素母液的配制MS培養(yǎng)基中的微量元素可由MnSO4

?

4H2O、ZnSO4

?

7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4

?

2H2O、CuSO4

?

5H2O、CoCl2

?

6H2O幾種無機鹽來供應，它們也可配在同一母液中（具體配制見下表）。配制步驟同大量元素（混合時不要求先后順序）。母液種類

成分

規(guī)定用量/mg?L-1

濃縮倍數(shù)稱取量/mg

母液定容體積/ml

配1L培養(yǎng)基吸取量/ml

微量元素

MnSO4?

H2O16.9200338010005ZnSO4?

7H2O8.61720H3BO36.21240KI0.83166Na2MoO4?

2H2O0.2550CuSO4?

5H2O0.0255CoCl2?

6H2O

0.0255

5.3.3有機成分母液的配制MS培養(yǎng)基中所需的維生素和氨基酸等有機成分母液應分別單獨配制（具體配制見下表）。配制的步驟為：確定母液的濃度和體積→計算各種化合物用量→稱量→溶解→定容→裝瓶→貼標簽→放入冰箱保存。亦可配制成混合母液（不主張采用）。5.3.4鐵鹽母液的配制鐵鹽母液宜單獨配制，其配制步驟為：確定母液的濃度和體積→計算各種化合物用量→稱量→分別溶解→混合→煮沸數(shù)分鐘→調(diào)節(jié)pH值至5.8→定容→裝瓶（棕色）→貼標簽→放入冰箱保存。用時每配lL培養(yǎng)基取該溶液5ml。母液種類

成分

規(guī)定用量/mg?L-1

濃縮倍數(shù)稱取量/mg

母液定容體積/ml

配1LMS培養(yǎng)基吸取量/ml

鐵鹽

Na2EDTA?

2H2O37.320037305005FeSO4?

7H2O27.827805.3.5植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制對于植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，配制成母液時，通常用mg·ml-1或ppm較為方便，一般配制成0.1-1mg·ml-1的母液，這樣的濃度便于計算也可避免冷藏時形成結(jié)晶。2,4-D/NAA用少量95％酒精溶解，再加水定容；6-BA/KT應先溶于少量1mol·L-1的HCl中，再加水定容。具體配制見下表：5.3.6其它常用試劑的配制鹽酸（lmol·L-1

）：用濃度36.5%、密度1.19g/cm3的濃鹽酸配制氫氧化鈉（lmol·L-1）：用固體氫氧化鈉配制75%酒精(v/v)：用95%的酒精來配制稀鉻酸洗滌液：重鉻酸鉀50g溶于1000ml蒸餾水中，冷卻后緩慢加入工業(yè)用硫酸90ml。配制好的各種母液應分別貼上標簽，寫明母液名稱、配制倍數(shù)、配制者、配制日期。母液最好在2～4℃的冰箱中