消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案

制藥有限公司

GMP

文件文件編碼：

ZL

?

YF

? 005?

05CleaningandSanitizingCompoundstheEffectofthe

ProgrammeValidation

Protocol消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案起審草：

日期：

核：

頒發(fā)部門：質(zhì)量部分發(fā)部門：質(zhì)量部、工程部批 準(zhǔn)：

日期

：

實(shí)施日期：

l姓 名職務(wù)／職稱部 門姓 名職務(wù)／職稱部 門驗(yàn)證小組名單組長成員文件編碼：

R—VP-CV-006—a-00立項(xiàng)申請審批表立項(xiàng)題目消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)

I

立項(xiàng)編號VP-

CV-

006- a-

OO立項(xiàng)部門生產(chǎn)部申請日期年 月 日確認(rèn)對象1 消毒劑3、文件確認(rèn)2、人員資質(zhì)確認(rèn)5、菌種確認(rèn)l、先決條件確認(rèn)4、檢測儀器儀表確認(rèn)6、培養(yǎng)基和稀釋液的配制確認(rèn)7、中和劑鑒定試驗(yàn)確認(rèn)內(nèi)容9、75％乙醇

溶

液

、

0.

2％新潔

爾滅

溶

液

消

毒

效

力的確認(rèn)10、消毒效力現(xiàn)場考察試驗(yàn)l

l、消毒劑儲存有效期確認(rèn)12 0.2％新潔爾滅溶液和

75％乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn)審核意見簽 名：年月日方案編制要求：，

消

毒

劑

消

毒

效

果

及

有

效

期

確

認(rèn)

方

案由生產(chǎn)部起草。方案編制及實(shí)施要求1 實(shí)施要求：消

毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案實(shí)施的時間為

2012

年月文件名稱：

消

毒

劑

消

毒

效

果

及有效期確認(rèn)文件編碼：

VP-

CV-

006

—a

-

00編寫

人日期

：年月日審 核人姓名職

務(wù)簽名日期批準(zhǔn)人：日期 ：年月日執(zhí) 行日期：年月日～年月日確認(rèn)總負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)簽 名：年月日方案審核和批準(zhǔn)小組職務(wù)姓名所在部門職務(wù)組長生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員生產(chǎn)部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)量部成員質(zhì)蜇部成員質(zhì)噩部成員質(zhì)噩部成員質(zhì)量部成員質(zhì)噩部成員工程部驗(yàn)證小組人員名單：Tabletof

Content目錄1.

目的和范圍．．…．….．..．.......…..…....….......…..…..............….........…..…...........…..…...........…..….....錯．誤！

未定義書簽。2. ……...........…..…............…..….

............….................….................…..…..…...............…..............….......錯.．誤！

未定義書簽。3.

.....

........................................................

....................

..........................

..................

.......................．錯誤！

未定義書簽。4.

定義與縮寫…………………………………………………………………………………………

………錯誤！

未定義書簽。5.

參考文件．．．．．．．．………............……................……............……….錯..誤！...未..定..義..書..簽…。….6.

概述

．．．．．．…．...．..．..．…..．…..．…...．..．..…...…..…...…........…..…..….......…................….............….......….錯.．誤！

未定義書簽。7.

確認(rèn)前準(zhǔn)備．．…．.….................….................…............…..............…...............…..…...........…..…..........…..…...........8...8. 消毒劑消毒效力試驗(yàn)…………….....…………........………….........….

……….......………….....……………....."．錯誤！

未定義書簽。9.

消毒劑有效期確認(rèn)試驗(yàn)．．．．…．…．..．..．..．..

.．….…．..….......…..…...…........…..….….......…..…..…..........….......….......…..…....…...1.3.10. 驗(yàn)證偏差和變更．………………..…………·………·……錯．誤！

未定義書簽。11.

附錄列表．．…．…．..．..．...．...…........…...... .…..…................·..…...…..…...........…..…...........…..….....錯．誤！

未定義書簽。l 目的通過消霉劑消毒效果及有效期的確認(rèn)，

科學(xué)制訂消霉程序，

以保證各潔凈級別的操作間及設(shè)備外表面按照規(guī)定的消毒程序消毒能夠達(dá)到消毒防止污染的效果，適用范圍本方案適用千潔凈區(qū)的墻面、天花板、門窗、機(jī)器設(shè)備、儀器、操作臺、地漏、推車、記錄臺、凳子等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。職責(zé)3.

1 消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)小組組長職責(zé)3.

1.

1 負(fù)責(zé)組織編寫消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案，

組織消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案的培訓(xùn)和實(shí)施。3.

1.

2 負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案實(shí)施過程的監(jiān)控。3.

1.

3 負(fù)責(zé)組織收集各項(xiàng)確認(rèn)數(shù)據(jù)，

并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，

制

訂消毒操作程序。3.

2 生產(chǎn)部3.

2.

1 負(fù)責(zé)消毒劑的配制，

及消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)的實(shí)施。3.

2.

2 負(fù)責(zé)消毒劑配制相關(guān)記錄的填寫，

及消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)實(shí)施過程關(guān)鍵項(xiàng)目參數(shù)的記錄。3.

2.

3 負(fù)責(zé)配合質(zhì)量部進(jìn)行消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)的實(shí)施。3.

3 質(zhì)量部3.

3.

1 負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)方案的審核、實(shí)施、實(shí)施過程的監(jiān)控、歸檔；確

認(rèn)報(bào)告的發(fā)放、文件資料的保存。3.

3.

2 負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)實(shí)施過程中的取樣送檢，

檢驗(yàn)結(jié)果的跟蹤。3.3.3 負(fù)責(zé)消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)實(shí)施過程中樣品的檢驗(yàn)，并

出檢驗(yàn)報(bào)告。3.

3.

4 負(fù)責(zé)組織對確認(rèn)過程中的偏差進(jìn)行調(diào)查、處理、評估。3.

4 工程部3.4.

1 負(fù)責(zé)保證提供消毒劑消毒效果及有效期確認(rèn)各項(xiàng)試驗(yàn)的條件。4 描述4.

1 本公司的潔凈區(qū)分為十萬級、萬級和百級，

擬

定

用

千潔凈區(qū)表面消毒的有

2

種消毒劑：

7

5％乙

醇、0.2％新潔爾滅溶液。本次驗(yàn)證方案將選用以上

2

種消毒劑分別進(jìn)行驗(yàn)序虧仁刁名稱消毒對象消毒方法有效期175%乙醇用于地面、墻面、器具、工作服、清潔布、拖布、潔凈鞋水池、地漏和手的消毒。采用擦拭、噴灑、浸泡和液封方式密閉保存試驗(yàn)

6

天20.2%新潔爾滅溶液用于地面、墻面、器具、工作服、清潔布、拖布、潔凈鞋水池、地漏和手的消毒。采用擦拭、噴灑、浸泡和液封方式密閉保存試驗(yàn)

6

天1表面實(shí)驗(yàn)法定量懸浮試驗(yàn)法75％乙

醇0.

1％新潔爾滅溶液75％乙

醇0.

1％新潔爾滅溶液234序號名稱序列號1金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]2大腸埃希菌[CMCC(B)44102]證試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為兩部分：

一是實(shí)驗(yàn)室考察部分；

二是現(xiàn)場考察部分。4.

2 消毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期如下表：消

毒劑的種類、消毒對象、消毒方法和有效期4.

3 作用對象一樣的消毒劑每月輪換使用，

避免表面微生物產(chǎn)生耐藥菌株。在利用消毒劑進(jìn)行表面擦拭消毒過程中消毒劑的作用時間應(yīng)不少于

10

分鐘，

利用消毒劑進(jìn)行浸泡消毒的不少千

10

分鐘。4.4 實(shí)驗(yàn)室考察部分，

定

量

懸

浮

試

驗(yàn)法適用于浸泡或液封方式的消毒方法；表

面實(shí)驗(yàn)法適用于擦拭或噴灑方式的消毒方法。潔凈區(qū)設(shè)施表面材質(zhì)有不銹鋼、鍛鋅板及玻璃三種，

故

表

面

試

驗(yàn)法

選用

不銹鋼載片、鎖鋅板及玻璃裁片模擬潔凈區(qū)設(shè)施表面進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。兩種試驗(yàn)方法作用的消毒劑試驗(yàn)方法消毒劑序號4.

5 現(xiàn)場考察試驗(yàn)部分選擇

10

萬級潔凈區(qū)、萬級的微生物限度室、超凈工作臺設(shè)備表面消毒前和消毒后分別進(jìn)行取樣，

測

定

其

微

生

物

數(shù)

量

。5 確認(rèn)程序5.

1

菌種序號消毒劑名稱中和劑備注175％乙醇l％卵磷脂

＋0

.1％聚

山梨酷

80中和劑經(jīng)

121·c, 20min

滅菌備用。20.1％新潔爾滅溶液序號名稱l無菌移液管2錐形瓶3無菌試管4璇渦混合器5恒溫水浴鍋6恒溫恒濕培養(yǎng)箱7恒溫恒濕培養(yǎng)箱－－3 I白色念珠菌[CMCC(F)

98001]5

.2

培養(yǎng)基序號名稱備注I營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基3改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基經(jīng)

121·c, 20min

滅菌備用4改良馬丁液體培養(yǎng)基5大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：

BZ W12085

)6玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)接觸碟規(guī)格：：的 5

mm, 取樣面積為

25m2（

編

號：BZW15129

)5.3 消毒液擬定選用的中和劑5.4

器具及設(shè)備5.

5 稀釋液 0.

9％無菌

氯

化

鈉

溶

液

、

PH7.

0

氯化鈉－蛋白脈緩沖液6

中和劑鑒定試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^該試驗(yàn)，

確

認(rèn)所

用

的

中

和

劑

對

對

應(yīng)

的

消

毒劑有良好的中和作用，

對

試

驗(yàn)

用

菌

劑及其恢復(fù)期培養(yǎng)示范有害或不良影響。菌液的制備及計(jì)數(shù)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌工作菌液的制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，

30

35

°C

培養(yǎng)

l

8

~

2

4

小

時

。

取上述培養(yǎng)物用

0.9

％

無菌氯化鈉溶液做

10

倍系列稀釋成

l

x

l08

~5x

l08

C

FU

/

ml

的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為

l

x108

~5x

l08

C

FU

/

ml,

可不再用

0.9％無菌氯化鈉溶液稀釋）。計(jì)數(shù)時，

將

l

x

l08

~5x108

C

FU

/ml

的

工作菌液

10

倍系列稀釋成含

so1OOC

FU

/m

l

菌

液

，并同時采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基

30~

35°C

培養(yǎng)

2

天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級的平均菌落數(shù)，

將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。6.2.2

白色念珠菌工作菌液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，23

,..._,2

8

°C

培

養(yǎng)

2

4

~

48

小

時。取上述培養(yǎng)物用

0.9％無菌氯化鈉溶液做

10

倍系列稀釋成

lx

l08

~5x

l08

C

FU

/ml

的

工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為

1x

108

~5x108C

FU

/m

l

，可

不

再用

0.9％無菌氯化鈉溶液稀釋）。計(jì)數(shù)時，

將

l

x

l08

~5x108

C

F

U/ml

的工作菌液

10

倍系列稀釋成含

SO

1OOCF

U/ml

菌液，并同時采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基

23~

28°C

培養(yǎng)

3

天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。鑒定試驗(yàn)操作配制

75％乙醇、0.2％新潔爾滅溶液，具

體

操作

執(zhí)

行《

清

潔

劑和消毒劑管理》。將配置好的消毒劑置

20

°C

士l

°C恒

溫

水

浴

鍋

中

備

用

。6

.3

.2

分

組操作試驗(yàn)分組及稀釋操作方法簡表組號

I

混合液A混勻作用

I

混合液B混勻作用

1 取混合液B

或混合液取

0.5ml 工作菌液加入下列溶液中l(wèi)Omin取混合液

A

0.5ml加入下列溶液IOminB的稀釋級溶液0.5ml平板計(jì)數(shù)

(

2

皿／組）1消毒劑4.5ml稀釋液4.5ml混合液B、10-l2消哥劑4.5ml中和劑4.5ml混合液B、10-l3中和劑4.5ml稀釋液4.5mll.

O

2、10-34中和產(chǎn)物4.5ml（消毒液與中和劑比例為1:1

)稀釋液4.5ml10·2、o·35稀釋液4.5ml稀釋液4.5ml10-2、

10-36稀釋液和中和劑各1.0ml

注入無菌平皿中，各

制備2

皿。具體操作第

1組目的：

觀察消毒液對試驗(yàn)菌有無殺滅或抑制能力。操作：取消毒劑

4.5ml＋工作菌液

0.5ml, 混勻作用

l

Omin

后，

取混合液

0.5ml＋稀釋

液

4.5ml,混勻作用

lOmin, 取

0.5ml

注皿，

平行制備

2

皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊桿菌芽玸菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒

置

30~

35°C培養(yǎng)

3

天計(jì)數(shù)；

白脂培養(yǎng)基，

倒置

23

~

28°C培養(yǎng)5

天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。第

2組目的：

觀察殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗(yàn)菌是否恢復(fù)生長。操作：取消毒劑

4.5ml＋工作菌液

0.5ml, 混勻作用

lOmi

n

后，

取混合液0.5ml

＋中和劑

4.5ml,混勻作用

lOmin,

用稀釋液稀釋成

10-L

分別取未稀釋溶液（混合液

0.5mll＋中和劑4.5ml的混合液）及10-1

0.5ml

注皿，

各平行制備2

皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草念珠菌用玫瑰紅鈉桿菌芽玸菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒

置千

30~

35°C培養(yǎng)

3

天計(jì)數(shù)；白色瓊脂培養(yǎng)基，

倒

置千

23 28°C培養(yǎng)5

天計(jì)數(shù)。第

3組目的：

觀察中和劑是否有抑菌性操作：取中和劑4.5ml＋工作菌液

0.5ml, 混勻作用

lOmin, 取混合液0.5ml

1＋稀釋

液

4.5ml, 混勻作用

lOmin

后，用

稀釋液進(jìn)行

10

倍系列稀釋成

102-

、

103-

。

取相應(yīng)稀釋級

0.5ml

注皿，第

1

組平板平均菌落數(shù)。第

2

組平板平均菌落數(shù)〉

5X〉(x+5)各

稀釋

級

平

行

制

備

2

皿

。金

黃

色

葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽袍菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒

置

30~

35

°C

培養(yǎng)

3

天計(jì)數(shù)；白色 念

珠

菌

用

玫

瑰

紅

鈉

瓊脂 培

養(yǎng)

基

，倒置

30~

35°C培養(yǎng)

3

天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。第

4組目的：

觀

察

中

和

產(chǎn)

物

，

或未被完全中和殘留消毒劑對試驗(yàn)菌的生長繁殖是否有影響。操作：取消毒劑和中

和

劑 1:1 的混

合

液 4

.5ml ＋工作菌液

0.5ml，混

勻

作

用l

Omi

n，取

混合液

0.5mll＋稀

釋

液

4

.5

ml

,

混勻作用

l

Omi

n

后，

用

稀

釋

液

進(jìn)行

10

倍系列稀釋成

l-O2

、

10·

3。取相應(yīng)稀釋級

0.5ml

注皿，

各

稀

釋

級

平行

制

備

2

J]]]。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽袍菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置

30~

35°C培養(yǎng)

3

天計(jì)數(shù)；白

色

念

珠菌

用玫瑰

紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，

倒置

30~

35

°C

培養(yǎng)

3

天計(jì)。數(shù)

對

照

用第

5組目的：

作

菌

落操

作

：取稀釋液

4.5ml＋工作菌液

0.5ml, 混勻作用

IOrnin, 取混合液

0.5ml

1＋稀

釋

液

4

.5

ml, 混勻作用

IOmin

后，用稀釋

液進(jìn)行

10

倍系列稀釋成

1·02 、

10 主

取相應(yīng)稀釋級

0.5ml

注皿，各

稀

釋

級平行制備

2

皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽玸菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置

30~

35

°C培養(yǎng)

3

天計(jì)數(shù)；

白

色

念

珠

菌

用

玫

瑰

紅

鈉

瓊脂 培

養(yǎng)

基

，倒置

30~

35°C培養(yǎng)

3

天計(jì)數(shù)。第

6組目的：

作

為陰性對照用操作：

分

別

取稀釋液和中和劑各

1.0ml

注入無菌平皿中，

各制備

2

皿。結(jié)果判斷試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件，

判斷所選中和劑合格。第

1

組無菌生長，

或僅有少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長。第

2

組菌落數(shù)比第

l

組菌落數(shù)多，

但比第

3、4、5

組菌落數(shù)少，

且符合下表要求5

分鐘組10

分鐘組15

分鐘組金黃色葡萄球菌m1 l／支，

共

3

支1ml／支，

共

3

支m1 l／支

，

共

3

支y〉(y+0.5y)第

3、4、5

組有相似菌落數(shù)生長，

其每組間菌落數(shù)誤差率不超過

15%。計(jì)算公式如下：(

3 組間菌落平均數(shù)-各

組菌落平均數(shù)）的絕對值之和誤差率＝x100

%3x3

組間菌落平均數(shù)第

6

組無菌生長。否則，

說明試劑有污染，

應(yīng)

重

新

進(jìn)行試驗(yàn)。7

定量懸浮試驗(yàn)0.2％新潔爾滅溶液、75％乙醇溶液消毒效力的確認(rèn)（定量懸浮試驗(yàn)法）目的：

由

千

0.2％新潔爾滅溶液、75％乙醇溶液要通過浸泡或液封消毒，采用將消毒劑置千無菌具塞試管中通過定量懸浮試驗(yàn)法，

確

定

其

消

毒效力是否符合要求。程序：（

1) 菌種的

選

擇 由

千

0.2％新潔爾滅溶液、75％乙醇溶液中低效消毒劑，

且

不

能殺

滅

芽

玸，

故定量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌；(2)菌液制備 ：取金

黃色 葡萄球菌、大腸埃希菌接種于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于

30~ 35°C培養(yǎng)

l

8~

24h

即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少千

106

c

fu/rnl。取白色念珠菌接種千改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于

23 28

°C

培養(yǎng)

24~

48h

即得，培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少于

106

c

fu/ml。(3

) 消毒劑的配制：

按

照

《

清

潔

劑、消毒劑配制使用程序》進(jìn)行配制

0.2％新潔爾滅溶液、75％乙醇溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。(

4

) 試驗(yàn)方法：（

a

) 在室溫條件下將配制

好

的 0.2

％新 潔爾滅溶液（或75％乙醇

溶液 ）按

9ml/支分注千

27支無菌具塞試管中，按

照

“5 分鐘組”、"

10 分鐘組”和

“

15 分鐘組“共

3組每組

9

支，

進(jìn)行分組編號。(

b

) 取供試菌液

(

106

c

fu

/ml

的金黃色葡萄球菌菌液，

106

c

fu

/ml

的大腸埃希菌菌液，10

6c

fu /ml

的白色念珠菌菌液）1ml

按照下表，

分

別

接

入

到

盛

有

9ml0 .2

％新

潔爾

滅

溶液（

或

75％

乙

醇溶液）的試管中（已進(jìn)行

10

倍稀釋），輕輕搖動，

混

合

均勻，并立即開始計(jì)時。大腸埃希菌1ml／支，

共3支1ml／

支

，

共3

支1ml／支，

共3

支白色念珠菌1ml／支，

共3支1ml／支

，

共3

支1ml／支，

共3

支與消毒劑作用時間菌種名稱試驗(yàn)組菌落數(shù)

(

cfu/ml)l

04平均菌落數(shù)(

cfu/ml)殺菌率l235

分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌10

分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌15

分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌（c

) 消毒劑的稀釋分別在

5

分鐘、10

分鐘和

15

分鐘時迅速吸取

1ml

菌藥混合液，加入到

9ml (

l％卵磷脂

＋0

.1％聚

山梨

酷

80)

中和劑中，迅速混勻中和

10

分鐘，

分

別

取

上

述經(jīng)中和的

'5

分鐘組”、`'

10

分鐘組”和 '

15 分

鐘

組

”的

接

種

細(xì)菌的消毒液，傾入過濾杯濾過，然后各用

0.9%無菌生理鹽水

50ml

清洗濾膜，濾過，重復(fù)用

50ml0.9％無

菌生理鹽水

的洗滌共

3

次。取下濾膜，

含

細(xì)菌的膜放入營養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，含真菌的膜放入玫瑰紅鈉瓊脂平板內(nèi)，含

菌膜

面

向上。細(xì)菌千

30-35°C的生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)

3d, 真菌千

23-2·s

c

的霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)

5d。培養(yǎng)后在明亮處，

對

平

板

上

的

菌

落

數(shù)

進(jìn)

行

計(jì)

數(shù)

，

記

錄

計(jì)

數(shù)

結(jié)果

。d 陽性對照分別將

106

c

fu/ml

金黃色葡萄球菌菌液、106

c

fu/ml

大腸埃希菌菌液、106

c

fu/ml

的白色念珠菌菌液用無菌注射用水進(jìn)行梯度稀釋至濃度為

1ol

OOc

fu/ml, 取稀釋液體

lml千平皿中，傾注冷卻至

45°C營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基混勻，待

凝

固

后

于

細(xì)菌千

30-35°C的生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)

3d, 真菌于

23-2·s

c

的霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)

5d。培養(yǎng)結(jié)束后對平板上的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果。0.2％新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)陽性對照菌＼種三名稱10-310

-4l

O-5平

均

菌

落數(shù)(

cfu/ml)金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日期

：年月日復(fù)核人：日

期：年月日與消毒劑作

用

時

間菌種名稱試驗(yàn)組菌落數(shù)

(

cf

um/ l

)l

O4平

均

菌

落數(shù)(

cfu/ml)殺菌

率l235

分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌10

分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌15

分鐘金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌陽性對照菌＼種名稱lO-310-4l

O-5平

均

菌

落數(shù)(cfu/ml

)金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌75％乙醇溶液消毒效力的確認(rèn)確認(rèn)結(jié)果評價：操作人

：日

期：年月日 復(fù)核人：日

期

：

年月日8

表面試驗(yàn)75％乙醇溶液、0.2％新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)（表面試驗(yàn)法）目的

由千

75％乙醇溶液、0.2％新潔爾滅溶液要通過擦拭消毒，

故選用不銹鋼載片、鎖鋅片及玻璃裁片進(jìn)行表面試驗(yàn)法，

確

定

其

消

毒

效

力

是

否

符

合

要

求

。程序：（

l)菌種選擇：由于75

％乙 醇、0.2％新潔爾滅溶液中低效消毒劑，

且不

能

殺滅

芽袍

，

故

表

面

試

驗(yàn)

用

菌

為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌。(

2

)

工作菌液制備

取金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌分別接種千營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，千

30~

35°C培

養(yǎng)

l

8

~

24

h

即得，

培養(yǎng)后微生物濃度應(yīng)不少千

l

06

c

fu/ml。取白色念珠菌接種千改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于

23

~

28

°C培養(yǎng)

24~

48h

即得，培

養(yǎng)

后

微

生

物

濃度

應(yīng)

不少

千

106

c

fu

/

ml。(3

) 染菌不銹鋼載片制備：

將

經(jīng)

滅

菌

的

不

銹

鋼

載

片

平鋪 于

無

菌

平

皿

內(nèi)

，

滴加金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌含菌量為

l

x

l08

~5x108

C

FU/ml

的

菌

液

0

.1ml,

并均勻涂布千整個載體表面。滴染菌液后，

載

片

置超凈工作臺晚干后備用。每種菌平行制備兩個染菌不銹鋼載片；

染

菌

鎖

鋅

載

片

制

備：

將

經(jīng)

滅菌的鎖鋅載片平鋪千無菌平皿內(nèi)，

滴

加金

黃

色

葡萄球菌、大腸埃希菌和白色念珠菌含菌量為

l

x

l08 ~5x108

C

FU/ml

的菌液

0.1ml,并均勻涂布千整個載體表面。滴染菌液后，載片置超凈工作臺晚干后備用。每種菌平行制備兩個染菌鎖鋅載片；染 菌

玻

璃

載

片

制

備

：

因

培養(yǎng) 皿

的材 質(zhì)

為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替序號消毒劑名稱工作菌液殺滅對數(shù)平均值(

K

L

)不銹鋼載片

(

min

)玻璃載片

(

min

)鎖鋅

載

片 (min

)510155101551015175％乙醇金萄黃球色菌節(jié)大腸菌埃希念l=珠I 菌巴20.2％新潔爾滅溶液．金萄黃球色菌葡大腸菌埃念l

習(xí)珠匕菌立可標(biāo)準(zhǔn)接受．

陰性對照無菌生長；殺滅對數(shù)們(KL)應(yīng)不低千

3

個對數(shù)單位確認(rèn)結(jié)果評價：玻璃載片進(jìn)行染菌試驗(yàn)。進(jìn)行菌液滴染前，用記號筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積

(

50mmx50mm)，標(biāo)注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。(

4

)取樣 試驗(yàn)組：將

消

毒劑

擦

拭

在

制

備

好

的

染

菌

載

片

上

，消

毒

劑

作

用

時

間

分

別

為

5min、

l

Omin、15min, 不銹鋼載片、鎖鋅載片及玻璃載片每個作用時間分別制備

2

個。作用結(jié)束后，

用

接

觸

碟

取

樣

（接

觸

碟

規(guī)

格

：

小55

mm, 取樣面積為

25m2)。取金黃色葡萄球菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：

BZW12085)；取大

腸

埃希菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：

BZW12085

)；取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號：

BZW15129)。接觸碟取樣方法：

打

開

接

觸

碟

蓋

，

使

無

菌

培

養(yǎng)

基

表

面

與

取

樣

面

直

接

接觸

，

均

勻

按

壓

接

觸

碟

底

板

，

確

保

全

部

瓊

脂

表

面

與

取

樣

面

表

面

均

勻

接

觸

1

0

秒

左

右

，

蓋上碟蓋。對照組：

對

照

組

的

活

菌

濃度

同

工

作

菌

液

的

制

備

。陰 性對照

：

用

接

觸

碟

在

已

滅

菌

的載

片

上

（

未

染

菌

片

的

載

片

）按 壓

取

樣

，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。

(

5

) 培養(yǎng)：

將

取

樣

金

黃

色

葡

萄

球

菌

和

大

腸

埃

希

菌

的

接

觸

碟

倒

置千

30,

,3

5

°C

培養(yǎng)

3

天計(jì)置于

23,-...,28 °C培養(yǎng)

5

天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。數(shù)；取樣

白

色念

珠

菌的

接

觸

碟

倒(

6

) 結(jié)果計(jì)算：

計(jì)

算

試

驗(yàn)

組和對照組的活菌濃度 (

CFU/ml

)，

并換算為對數(shù)值(N)

,并按下式計(jì)算殺滅對數(shù)值殺滅對數(shù)值

(KL)＝對照組平均活菌濃度的對數(shù)值

(

NO)

—試驗(yàn)組活菌濃度對數(shù)值

(

NX

)可接受標(biāo)準(zhǔn)：

殺

滅

對

數(shù)

值 (KL )應(yīng)不

低

于 3

個對數(shù)單位。75％乙醇溶液、0.2％新潔爾滅溶液消毒效力的確認(rèn)操作人

：日

期

：

年月日9 消

毒

效

力

現(xiàn)

場

考

察

試

驗(yàn)?zāi)?/p>

的

：

確

認(rèn)

消

毒劑對相應(yīng)設(shè)施的實(shí)際消毒效力。復(fù)核人：日期

：年月日操作：（

l

）生產(chǎn)車間崗位

操作 人員按照《潔凈區(qū)衛(wèi)生清潔程序

》、《地漏 的

清

潔

消

毒程序》、《10

萬級潔凈區(qū)潔具清潔消毒程序》、《萬級潔凈區(qū)潔具清潔消毒程序》、《地漏清潔程序》進(jìn)行清潔。(

2

)

生產(chǎn)車間崗位操作人員，

使用放冷的注射用水，

按照《清潔劑、消霉劑配制使用程序》進(jìn)行

75％乙醇溶液、0.2％的新潔爾滅溶液配制，

現(xiàn)

配

現(xiàn)

用

。

按照《潔凈區(qū)衛(wèi)生清潔程序》進(jìn)行清潔消毒，

分

別

清

潔

消

毒

10

萬級潔凈區(qū)各房間的頂棚、墻面、工作臺面和墻面、地漏、水池下水；

10萬

級

潔

凈

區(qū)

的

工作鞋、清潔布、拖布；萬

級

區(qū)微

生物限度室等房間頂棚、墻面、工作臺面和墻面、地漏、水池下水，萬

級

潔凈

區(qū)

的

工

作

鞋

、清潔

布

、

拖

布

等

區(qū)

域

。(3

)

消

毒

15

分鐘后，

由

Q

A

人員到車間按照《接觸碟法取樣程序》進(jìn)行潔凈區(qū)表面微生物的采樣；

用浸

泡

或液封

方式的

采

用無

菌

吸

管取浸

泡液或液

封液

1ml，連續(xù)逐日測定，共

測

定

3

次。記錄測定結(jié)果。可接受標(biāo)準(zhǔn)：

所監(jiān)

測

的

潔

凈

區(qū)

的

微

生

物均

在

公

司

環(huán)

境質(zhì)

量

控

制

范

圍

內(nèi)

，各潔凈區(qū)符合各自的潔凈級別要求。75％乙醇溶液消毒后環(huán)境監(jiān)測表面微生物測定結(jié)果單位：c

fu／皿監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪間10

萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間口是口否潔具間口是口否無菌檢查室萬級<25CFU/25cni2口是口否微生物限度室操作臺百級<l

CFU/25c

m2口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操

作

人

：日期

：年月日復(fù)核人

：日期

：年月日監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪間10

萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間口是口否潔具間口是口否無菌檢查室萬級<25CFU/25cm2口是口

否微生物限度室操作臺百級<l

CFU/25cm2口是口

否確認(rèn)結(jié)果評價

：操作人

：日期

：年月日復(fù)核人

：日期

：年月日監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪間地漏lO

萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間地漏口是口否0.2 ％新潔

爾

面

溶

液

消

毒

后

環(huán)

境

監(jiān)

測

表

面微生物測定

結(jié)果單位：

cfu/皿0.2 ％新潔爾滅溶液消毒后微生物監(jiān)測測定結(jié)

果單位：

cfu/皿潔具間水池下水口是口否微生物限度室地漏萬級<25CFU/25cm2口是口否微生物限度室水池下水口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操

作

人

：日

期

：年月日復(fù)核人

：日期

：年月日監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格第一次第二次第三次裁剪間地漏lO

萬級<50CFU/25cm2口是口否包裝間地漏口是口否潔具間水池下水口是口否微生物限度室地漏萬級<25CFU/25cm2口是口否微生物限度室水池下水口是口

否確認(rèn)

結(jié)果評價

：操作人

：日期

：年月日復(fù)

核人：日期

：年月日監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)第一次第二次第三次可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格工作鞋10

萬級<50CFU/25cm2口是口

否口是口否清潔布75

％溶液消毒后微生物監(jiān)測測定

結(jié)果單位：cfu

／皿75

％乙醇溶液消毒后微生物監(jiān)測測定

結(jié)果單位：

cfu／皿拖布口是口否工作鞋萬級<25CFU/25cm2口是口否清潔布口是口

否拖布口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操

作

人：日期

：年月日復(fù)核人：日期

：年月監(jiān)測區(qū)域潔凈級別平均菌落數(shù)第一次第二次第三次可接受標(biāo)準(zhǔn)是否合格工作鞋10

萬級<50CFU/25cm2口是口否清潔布口是口否拖布口是口否工作鞋萬級<25CFU/25cm2口是口否清潔布口是口

否拖布口是口否確認(rèn)結(jié)果評價：操作人：日期

：年月日復(fù)核人：日期

：年月0.2％新潔爾滅溶液消毒后微生物監(jiān)測測定結(jié)果單位：

cfu／皿1

0 消毒

劑儲 存有效期確認(rèn)試

驗(yàn)?zāi)?/p>

的

：

通過該試驗(yàn)，

確

定消毒劑在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的，

并

且消毒效力不會發(fā)生變化，

符合要求。程序：（

1

) 在進(jìn)行消霉劑有效期確認(rèn)時，每天開啟裝消毒劑的容器不少千

5

次，其每次開啟時間在~1

2

分鐘，

以模擬實(shí)際操作的最差條件。(

2) 按照《清潔劑、消毒劑管理規(guī)程》和《清潔劑、消毒劑配制使用程序》配制

75%乙

醇、0.

2％新潔爾滅溶液。(

3) 分別在消毒劑儲存的第

3

天、第

4

天、第

5

天、第

6

天進(jìn)行取樣做消毒劑消毒效力的確認(rèn)。分別按照上述

7

或

8

做

0.

2％新潔爾滅溶液、75％乙

醇溶液消毒效力的確認(rèn)。序I，了方法消毒劑名稱工作菌液殺滅對數(shù)平均值K（L

天）可接受標(biāo)準(zhǔn)34561定量」，倉、．浮試驗(yàn)75％乙醇金黃色葡萄球菌陰性對照無菌生長；

殺滅對數(shù)值(KL

)應(yīng)不低千3

個對數(shù)單位大腸埃希菌白色念珠菌20.2％新潔爾滅浴液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌3表面試驗(yàn)75％乙醇金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌40.2％新潔爾滅溶液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌白色念珠菌確認(rèn)結(jié)果評價：操作人： 日期 ： 年 月 日

復(fù)核人： 日期 ： 年 月 日(

4

) 結(jié)果計(jì)算：

計(jì)算

試

驗(yàn)組和對照組的活菌濃度 (

CFU/

m]

），并換算為對數(shù)伯

(

N)

,(KL)

＝對

照組平均活菌濃度的對數(shù)值

(

NO)

—并按下式計(jì)算殺滅對數(shù)值：

殺滅

對數(shù)值試

驗(yàn)組活菌濃度對數(shù)值

(

NX)可接受標(biāo)準(zhǔn)：

在消毒液有效期末，

殺滅對數(shù)值

(KL)

應(yīng)不低千

3

個對數(shù)單位。消毒劑儲存有效期確認(rèn)0.2％新潔爾滅溶液和75％乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn)0.2％新潔爾滅溶液和75％乙醇溶液消毒效力周期的確認(rèn)目的：

確認(rèn)消毒劑在實(shí)際應(yīng)用中，

其消毒效力能夠保待的期限。程序：（

l

)

在

萬

級

實(shí)

驗(yàn)室的墻面和百級級層流下設(shè)備表面作為驗(yàn)證對象。實(shí)驗(yàn)室墻面編號為

1

號、百級層流下設(shè)備表面

2

號，

分

別使用

0.2％新潔爾滅溶液、75％乙醇溶液進(jìn)行擦拭消毒

(

l

號為