醫(yī)學(xué)科研入門-科研設(shè)計和撰寫申報書

Background–minireviewUnclearControversialNotreportedFurtherinvestigationShortcomingsHypothesisExperimentsConclusionFutureInvestigationSignificanceMethodResultsDiscussion第一頁，共91頁?？蒲性O(shè)計第二頁，共91頁?？蒲性O(shè)計概論醫(yī)學(xué)科研的基本要素科研設(shè)計的基本原則科研設(shè)計的基本步驟統(tǒng)計學(xué)設(shè)計第三頁，共91頁。定義

醫(yī)學(xué)科研設(shè)計是研究醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中如何科學(xué)、合理地安排實驗因素，提高實驗效應(yīng)，及如何排除影響實驗的非處理因素?？紤]周全、設(shè)計合理的研究方案可收事半功倍之效，而設(shè)計不佳的研究方案常招致失敗及時間、經(jīng)費的浪費。

專業(yè)設(shè)計：指運用專業(yè)理論知識和技術(shù)進(jìn)行設(shè)計,主要是解決研究的有用性、獨創(chuàng)性和科學(xué)性,以回答、解決科學(xué)問題，驗證專業(yè)假說。統(tǒng)計學(xué)設(shè)計：運用數(shù)理統(tǒng)計學(xué)理論和方法進(jìn)行設(shè)計,包括資料的收集、整理、分析全過程的統(tǒng)計學(xué)設(shè)想和科學(xué)安排，以保證樣本的代表性和樣本間的可比性,以最少的調(diào)查、實驗觀察例數(shù)進(jìn)行高效率的統(tǒng)計分析，得出準(zhǔn)確的結(jié)果和可靠的結(jié)論。

第四頁，共91頁。專業(yè)設(shè)計錯誤蘇聯(lián)一神經(jīng)論權(quán)威設(shè)計了免疫抗體形成的神經(jīng)反射機(jī)制的實驗：他將動物后肢與軀體分離，僅保留由肢體傳入軀體的神經(jīng)干，然后在“離體”后肢注射抗原，不久將該神經(jīng)干切斷。過些時候動物血中出現(xiàn)特異性抗體。該權(quán)威認(rèn)為特異性抗體是由于抗原作用于神經(jīng)感受器經(jīng)反射而形成的。設(shè)計用動物急性感染實驗?zāi)Ｐ脱芯縏h1/Th2細(xì)胞在炎癥中的作用。第五頁，共91頁。定義

醫(yī)學(xué)科研設(shè)計是研究醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中如何科學(xué)、合理地安排實驗因素，提高實驗效應(yīng)，及如何排除影響實驗的非處理因素?？紤]周全、設(shè)計合理的研究方案可收事半功倍之效，而設(shè)計不佳的研究方案常招致失敗及時間、經(jīng)費的浪費。

專業(yè)設(shè)計：指運用專業(yè)理論知識和技術(shù)進(jìn)行設(shè)計,主要是解決研究的有用性、獨創(chuàng)性和科學(xué)性,以回答、解決科學(xué)問題，驗證專業(yè)假說。統(tǒng)計學(xué)設(shè)計：運用數(shù)理統(tǒng)計學(xué)理論和方法進(jìn)行設(shè)計,包括資料的收集、整理、分析全過程的統(tǒng)計學(xué)設(shè)想和科學(xué)安排，以保證樣本的代表性和樣本間的可比性,以最少的調(diào)查、實驗觀察例數(shù)進(jìn)行高效率的統(tǒng)計分析，得出準(zhǔn)確的結(jié)果和可靠的結(jié)論。

第六頁，共91頁。實驗設(shè)計實驗設(shè)計主要為了保證科研結(jié)果符合四個性：－有用性：目的性和可行性－獨創(chuàng)性：先進(jìn)性－可重復(fù)性－經(jīng)濟(jì)性第七頁，共91頁?？蒲性O(shè)計概論醫(yī)學(xué)科研的基本要素科研設(shè)計的基本原則科研設(shè)計的基本步驟統(tǒng)計學(xué)設(shè)計第八頁，共91頁。是否主動施加干預(yù)?1.實驗研究(干預(yù)):

受試對象：人——臨床試驗（clinicaltrial）動物——動物實驗（animalexperiment

）臨床試驗：治療——臨床療效實驗預(yù)防——社區(qū)干預(yù)實驗（communityinterventiontrial）2.調(diào)查研究(無干預(yù)):被動地觀察、如實記錄

聯(lián)系：調(diào)查研究可為實驗研究提供線索，而實驗研究還需要通過調(diào)查研究加以證實。第九頁，共91頁。實驗研究的基本要素降壓藥高血壓病人血壓值處理因素受試對象實驗效應(yīng)三要素：1.處理因素；2.受試對象；3.實驗效應(yīng)其他因素其他效應(yīng)第十頁，共91頁。處理因素(studyfactor，treatment)

例：藥劑、手術(shù)方法、毒物抓住主要處理因素區(qū)分處理與非處理因素處理因素必須標(biāo)準(zhǔn)化

處理因素是指外界施加于受試對象的因素，是在實驗中需觀察并闡明其效應(yīng)功能的因素。第十一頁，共91頁。單因素單水平表3-1細(xì)菌脂多糖對人外周血單個核細(xì)胞干擾素γ分泌的影響組別目的LPS觀察LPS（1μg/ml）刺激后人外周血單個核細(xì)胞干擾素γ分泌水平對照溶劑（PBS），其他條件與實驗組一致，排除非處理因素引起的變化第十二頁，共91頁。單因素多水平孕激素對滋養(yǎng)細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)的影響

組別目的孕激素1×10-7mol/L觀察不同濃度的孕激素對滋養(yǎng)細(xì)孕激素1×10-6mol/L胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶-9的影響

孕激素1×10-5mol/L空白對照排除非處理因素的干擾第十三頁，共91頁。多因素單水平

美托康對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

組別腦缺血再灌注美托康目的

處理組

++觀察美托康對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

對照A

假手術(shù)+觀察美托康的影響對照B+-觀察腦缺血再灌注的影響對照C假手術(shù)-排除手術(shù)的影響對照D不手術(shù)-排除其他因素的影響第十四頁，共91頁。多因素多水平

地塞米松抗過敏效應(yīng)實驗研究組別口服肌注目的處理組A0.1mg/kg口服小劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組B0.5mg/kg口服中劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組C1.0mg/kg口服大劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組D0.1mg/kg肌注小劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組E0.5mg/kg肌注中劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用處理組F1.0mg/kg肌注大劑量地塞米松對過敏反應(yīng)的作用對照組G溶劑排除口服因素造成的影響對照組H

生理鹽水排除肌注因素造成的影響對照組I排除其他因素的影響

第十五頁，共91頁。受試對象(studysubjects)病例的選擇：納入標(biāo)準(zhǔn)、剔除標(biāo)準(zhǔn)動物的選擇：種類、品系、年齡、體重、窩別、營養(yǎng)……離體器官、組織

細(xì)胞分子

須對處理因素敏感反應(yīng)須穩(wěn)定體內(nèi)外實驗相結(jié)合invitro，invivo，exvivo第十六頁，共91頁。人體實驗常見的設(shè)計類型病例報告為疾病的發(fā)病表現(xiàn)、機(jī)理及診治提供詳盡的感性資料。病例報告往往是識別新出現(xiàn)或不常見的疾病或疾病罕見表現(xiàn)的第一線索。橫斷面研究包括普查和抽樣調(diào)查。

病例對照研究回顧病例組暴露因素，通過與對照組進(jìn)行比較，研究這些暴露因素的發(fā)生頻率與某疾病之間的關(guān)系。(由果到因）隊列研究按照所研究人群是否暴露于某種因素將受試對象分為實驗組和對照組，隨訪觀察兩組人群某病的發(fā)病率，判斷暴露因素與疾病發(fā)病率的關(guān)系。分為前瞻性隊列研究(由因到果）和回顧性隊列研究。臨床試驗臨床試驗中的受試對象一般采用隨機(jī)化原則分為治療組和對照組，觀察治療手段的療效。

第十七頁，共91頁。動物分類按微生物學(xué)要求，實驗動物可分為4個等級：I級：普通動物II級：清潔動物III級：無特殊病原體動物（SPF）IV級：無菌動物（GF）按照遺傳學(xué)特性要求，實驗動物也可分為4類：I類：近交系或稱為純系動物II類：突變系動物，包括轉(zhuǎn)基因動物和基因敲除動物III類：遠(yuǎn)交系動物，又稱封閉群IV類：雜交群或稱異系雜交第十八頁，共91頁。第十九頁，共91頁。家兔對體溫變化十分敏感，宜選用做發(fā)熱、解熱及致熱源檢查實驗。觀察避孕藥對排卵影響的實驗宜選用兔、貓；對具有雌激素活性的藥物進(jìn)行避孕藥效研究，不能選用小鼠與大鼠。以高膽固醇膳食飼喂兔、雞、豬、狗、猴等動物，均可誘發(fā)高脂血癥或動脈粥樣硬化，而猴和豬的心臟冠狀動脈前降支還形成斑塊及大片心肌梗死，情況與人更為相似，故動脈粥樣硬化實驗多選用豬、猴及兔。家犬的胰腺、胃較小，宜用于胰腺摘除術(shù)及胃腸道生理的研究。大鼠無膽囊，不會嘔吐，故不能用于膽功能觀察；狗、貓、猴等動物嘔吐反應(yīng)敏感，適宜用于嘔吐實驗。BALB/c小鼠與其他近交系相比，肝、脾與體重的比值較大，對放射線甚為敏感，故常用于制備單克隆抗體。C57BL/6小鼠具有干擾素產(chǎn)量高、對放射物質(zhì)中等耐受、補(bǔ)體活性高、易誘發(fā)免疫耐受等特性，是腫瘤學(xué)及免疫學(xué)研究的常用品系。如遺傳性高血壓大鼠、糖尿病小鼠、自身免疫病小鼠等。還可利用某些特殊缺陷型小鼠，如胸腺缺陷的裸鼠，由于缺乏T細(xì)胞，故可接種人腫瘤，用以篩選抗腫瘤藥等。第二十頁，共91頁。細(xì)胞原代細(xì)胞：經(jīng)特殊分離方法從胚胎、組織器官及外周血等初分離的細(xì)胞在體外培養(yǎng)。傳代細(xì)胞：經(jīng)傳代方式進(jìn)行再次培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。細(xì)胞株：單細(xì)胞大量擴(kuò)增后形成生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細(xì)胞群，稱為細(xì)胞株。包括正常細(xì)胞株和腫瘤細(xì)胞株?；蛉毕莺娃D(zhuǎn)基因細(xì)胞株。懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞。第二十一頁，共91頁。用細(xì)胞做實驗的優(yōu)缺點不受機(jī)體內(nèi)環(huán)境因素影響，從而避免個體差異，有利于探討各種物理、化學(xué)和生物因素對腫瘤細(xì)胞生命活動的影響。便于同時從細(xì)胞、分子與基因三個水平研究腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能及癌變發(fā)生機(jī)制。能長期傳代、保存，便于觀察腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性和遺傳行為的改變。能快速篩選抗癌藥物，適宜進(jìn)行耐藥機(jī)制、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究。研究周期較短，經(jīng)濟(jì)。

缺點：不能完全反映體內(nèi)狀況，常與體內(nèi)實驗互相驗證。長期培養(yǎng)易改變原有的性狀。易發(fā)生支原體感染。優(yōu)點：第二十二頁，共91頁。細(xì)胞庫資源ATCC(AmericanTypeCultureCollection)，即美國細(xì)胞、菌種保藏中心，目前能提供3000余種細(xì)胞系、15000余種細(xì)菌和噬菌體、2500余種動植物病毒、700余種人癌細(xì)胞系。CascadeBiologics,Inc.：該公司主要產(chǎn)品為人原代細(xì)胞，包括正常人皮膚細(xì)胞、心血管內(nèi)皮細(xì)胞、角膜上皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞等。網(wǎng)址：第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心：該中心保存多種腫瘤細(xì)胞株。網(wǎng)址：武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心：是國內(nèi)較大且保存品種較多的細(xì)胞保藏中心。E-mail:中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會細(xì)胞庫：是國內(nèi)較大且保存品種較多的細(xì)胞保藏中心。網(wǎng)址：中山醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院。第二十三頁，共91頁。分子研究DNA、RNA和蛋白質(zhì)常用的重要數(shù)據(jù)庫為：基因數(shù)據(jù)庫（http://www.ncbi.nlm./Genbank/）非編碼RNA數(shù)據(jù)庫（）蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫（或）蛋白質(zhì)組分析數(shù)據(jù)庫（）第二十四頁，共91頁。分子研究基因與蛋白分子的檢測：單個、幾個與芯片的檢測；基因多態(tài)性研究、SNP、微衛(wèi)星等基因組、蛋白組和代謝酶組的變化基因和蛋白的調(diào)控、分子表觀遺傳學(xué)基因和蛋白的結(jié)構(gòu)基因和蛋白的關(guān)系、蛋白與蛋白的相互作用第二十五頁，共91頁。實驗效應(yīng)(experimentaleffect)

處理因素作用于受試對象的結(jié)果，通過觀察指標(biāo)表達(dá)。觀察指標(biāo)應(yīng)相關(guān)聯(lián)、客觀、精確、靈敏、特異。1.客觀性：主觀指標(biāo)和客觀指標(biāo)。2.精確性：

準(zhǔn)確度(accuracy)或真實性（validity）：觀察值與真值的接近程度，受系統(tǒng)誤差的影響(如靈敏度、特異度)。精密度(precision)或可靠性（reliabiliy）或重復(fù)性（repeatability）：重復(fù)觀察時觀察值與其均值的接近程度，受隨機(jī)誤差的影響（如一致百分率、Kappa值）。3.

靈敏性和特異性：指標(biāo)的互補(bǔ)性、可靠性和穩(wěn)定性（標(biāo)準(zhǔn)化）第二十六頁，共91頁。科研設(shè)計概論醫(yī)學(xué)科研的基本要素科研設(shè)計的基本原則科研設(shè)計的基本步驟統(tǒng)計學(xué)設(shè)計第二十七頁，共91頁。試驗設(shè)計的原則對照的原則：

-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異

-類型：空白對照、陽性對照、陰性對照、自身對照、相互對照隨機(jī)的原則：

-對照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。

-動物實驗隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野重復(fù)的原則：

-隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以反映客觀真實性。

-表現(xiàn)為一定的試驗樣本數(shù)（人、動物、細(xì)胞株）第二十八頁，共91頁。對照(control)的原則

對照的意義：①區(qū)分處理因素與非處理因素的效應(yīng)，是比較的必要基礎(chǔ)藥物治療例:老年性慢性支氣管炎氣候轉(zhuǎn)暖,自然緩解②消除和減少實驗誤差處理組：對照組：比較結(jié)果處理因素非處理因素+處理效應(yīng)+非處理效應(yīng)非處理因素非處理效應(yīng)處理因素處理效應(yīng)第二十九頁，共91頁。直接凝集和間接凝集試驗

診斷血吸蟲、RA、鉤端螺旋體陽性對照和陰性對照可監(jiān)控方法的正確性和特異性第三十頁，共91頁。對照的形式

㈠空白對照(blankcontrol)：對照組不加任何處理因素。

例如：試劑空白、血樣空白、無酶解空白、底物空白等。包括：空白對照、實驗對照、標(biāo)準(zhǔn)對照、自身對照、相互對照、歷史對照第三十一頁，共91頁。對照的形式

實驗對照(experimentalcontrol)：施加每一因素均需設(shè)置對照+非處理因素對照（安慰劑對照）。含賴氨酸面包+非處理因素→賴氨酸效應(yīng)

+面包效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)

面包+非處理因素→面包效應(yīng)+非處理因素效應(yīng)賴氨酸賴氨酸效應(yīng)

非處理因素→+非處理因素效應(yīng)第三十二頁，共91頁。對照的形式

標(biāo)準(zhǔn)對照(standardcontrol)：以現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)或正常值作對照。

例①某種新的方法能否代替?zhèn)鹘y(tǒng)方法的研究；②某病患者與正常人的某生理、生化指標(biāo)是否相同。

——實驗室應(yīng)用較多第三十三頁，共91頁。對照的形式

自身對照：實驗在同一受試對象上進(jìn)行特點：簡單易行，使用廣泛。但若試驗前后某些環(huán)境或自身因素發(fā)生改變，并且會影響試驗結(jié)果，就難以說明問題。

第三十四頁，共91頁。對照的形式

相互對照：幾個實驗組互相對照例如：比較幾種藥物治療同一疾病的療效常用半數(shù)有效量、半數(shù)致死量比較幾種藥物之間的效應(yīng)和毒性。第三十五頁，共91頁。對照的形式

歷史對照：以過去的研究結(jié)果作對照。與本人或他人過去的研究結(jié)果作比較——不好?。。。。?！第三十六頁，共91頁。對照設(shè)置方法配對對照法：節(jié)省樣本數(shù)，抽樣誤差最小，統(tǒng)計效率最高

自體配對：指在同一個體處理前后或不同部位作為對照組和處理組，比較兩組間差異。

異體配對：選擇同窩，性別、體重一致的動物，或相同疾病、性別、年齡、病情等相當(dāng)?shù)牟∪伺鋵Γ诿總€對子內(nèi)部隨機(jī)分至對照組和實驗組，比較兩組間差異。組間對照法：組間對照是將條件基本一致的不同個體隨機(jī)分組，分別接受對照處理與實驗處理，比較兩組或幾組間差異。交叉對照法：即先接受對照處理的個體隨后接受試驗處理，先接受試驗處理的個體隨后接受對照處理，通過交叉而減少個體差異。第三十七頁，共91頁。試驗設(shè)計的原則對照的原則：

-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異

-類型：空白對照、陽性對照、陰性對照、自身對照、相互對照隨機(jī)的原則：

-對照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。

-動物實驗隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野重復(fù)的原則：

-隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以反映客觀真實性。

-表現(xiàn)為一定的試驗樣本數(shù)（人、動物、細(xì)胞株）第三十八頁，共91頁。隨機(jī)化(randomization)

分組的原則

隨機(jī)化原則：隨機(jī)≠“隨便”,指每個受試對象以機(jī)會均等的原則隨機(jī)地分配到試驗組和對照組。目的是使各組非實驗因素的條件均衡一致，以消除對實驗結(jié)果的影響。第三十九頁，共91頁。隨機(jī)化分組方法1.

抽簽等2.隨機(jī)數(shù)字表3.

計算器或計算機(jī)第四十頁，共91頁。隨機(jī)數(shù)字表分組例試將10頭動物應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表分配到甲、乙兩組。⑴按動物體重編號⑵從隨機(jī)表的第21行，第21列往上查10個隨機(jī)數(shù)⑶規(guī)定雙號為甲組，單號為乙組⑷調(diào)整：再接著查一個“6”以內(nèi)的隨機(jī)數(shù)，以決定甲組中哪一號撥到乙組。本例查得隨機(jī)數(shù)為4，將甲組第4個（5號）調(diào)到乙組。第四十一頁，共91頁。計算(器)機(jī)隨機(jī)化分組第四十二頁，共91頁。試驗設(shè)計的原則對照的原則：

-意義：消除系統(tǒng)誤差，鑒別處理和非處理因素的差異

-類型：空白對照、陽性對照、陰性對照、自身對照、相互對照隨機(jī)的原則：

-對照組和處理組除處理因素不同外，其余應(yīng)全部相同。

-動物實驗隨機(jī)分組；觀察切片也應(yīng)隨機(jī)選擇視野重復(fù)的原則：

-隨機(jī)原則可排除大部分非處理因素的影響，但不能全部消除；因此，有必要重復(fù)，以排除偶然因素的影響。

-表現(xiàn)為一定的試驗樣本數(shù)（人、動物、細(xì)胞株）第四十三頁，共91頁。重復(fù)的原則

重復(fù)(replication)是指各處理組與對照組要有一定樣本含量(samplesizes)。

無限地增加樣本含量，將加大實驗規(guī)模，延長實驗時間，浪費人力物力，反而增加系統(tǒng)誤差出現(xiàn)的可能性。樣本含量不足，檢驗效能（Power，1－β）偏低，導(dǎo)致總體中本來具有的差異無法檢驗出來。第四十四頁，共91頁?？蒲性O(shè)計概論醫(yī)學(xué)科研的基本要素科研設(shè)計的基本原則科研設(shè)計的基本步驟統(tǒng)計學(xué)設(shè)計第四十五頁，共91頁。最有成就的實驗家常常是這樣的人：他們事先對課題加以周密思考，并將課題分成若干關(guān)鍵的問題，然后，精心設(shè)計為這些問題提供答案的實驗．第四十六頁，共91頁。實驗設(shè)計步驟研究目標(biāo)主要實驗內(nèi)容實驗路線的設(shè)計實驗方案的設(shè)計第四十七頁，共91頁。確定研究目標(biāo)：即該課題解決的科學(xué)問題

-不要定的目標(biāo)太大：如解決腫瘤治療問題

-不要定的目標(biāo)太多：最多2-3個目標(biāo)。一個課題最好集中解決某個問題（總目標(biāo)），如TNF在內(nèi)毒素性休克中的作用

-不要定不可達(dá)到的目標(biāo)主要研究內(nèi)容：善于把要解決的問題分支成若干小的問題，從不同角度進(jìn)行研究。如研究某因素殺瘤作用：殺傷腫瘤譜、殺傷效率、誘導(dǎo)死亡方式，體內(nèi)外試驗、殺傷機(jī)制等。

第四十八頁，共91頁。研究路線的設(shè)計：根據(jù)研究內(nèi)容不同而不同：－對某基因表達(dá)的研究：mRNA、蛋白表達(dá)、定位及功能－基因調(diào)控：EMSA、報告基因等－新基因的研究：差顯表達(dá)、RACE、基因克隆、蛋白表達(dá)、功能研究－蛋白組研究：二維電泳、資料比對、消化、酶解、質(zhì)譜實驗方案：－試驗對象（包括試驗?zāi)Ｐ停喝恕游?、?xì)胞、分子等－處理因素：高糖、LPS、激素、細(xì)胞因子等；單因素多水平、多因素單水平、多因素多水平－檢測指標(biāo)：關(guān)聯(lián)性、客觀性、靈敏性、精確性、穩(wěn)定性

第四十九頁，共91頁。尼科爾屬于那種在制定實驗方案之前周密考慮，精心構(gòu)思，從而取得成功的人．他絕不象第二流人物，做那種心思來潮而常常是考慮不周的實驗，自己急得如熱鍋螞蟻?！鄬碚f，尼科爾做的實驗很少，很簡單。但是，他做的每一個實驗都是長時間智力孕育的結(jié)果，要考慮到一切可能的因素，并要在最后的實驗中加以檢驗。然后，他單刀直入，不做虛功。這就是巴斯德的方法，也是我們這個職業(yè)中所有偉大人物的方法。他們簡單的、結(jié)論明確的實驗，對于那些能夠欣賞的人來說，是一種莫大的精神享受。－津澤（美國細(xì)菌學(xué)家）第五十頁，共91頁。試驗設(shè)計方案簡述Fas和FasL的作用。請設(shè)計一個實驗方案，說明腫瘤細(xì)胞表達(dá)FasL后，可逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。

第五十一頁，共91頁。第五十二頁，共91頁。TumorcellsinduceapoptosisinTlymphocytesviaFASactivationCancercellsexpressFASligandBindtoFASreceptoronTlymphocytesleadingtoapoptosis腫瘤細(xì)胞表達(dá)FasL后，可逃避免疫系統(tǒng)的攻擊。第五十三頁，共91頁。實驗?zāi)康模罕磉_(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞可逃避免疫攻擊實驗內(nèi)容：－腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)FasL－腫瘤細(xì)胞對活化的淋巴細(xì)胞是否具有殺傷作用－體內(nèi)實驗觀察表達(dá)和不表達(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞的致瘤率實驗方案：－FACS:檢測腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)FasL

－凋亡檢測：腫瘤細(xì)胞對活化的淋巴細(xì)胞是否具有殺傷作用（活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞＋活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞＋非活化淋巴細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞＋活化淋巴細(xì)胞＋抗FasL抗體）體內(nèi)實驗

第五十四頁，共91頁。課題申請書

（開題報告）的撰寫第五十五頁，共91頁。課題設(shè)計書的撰寫對課題評價的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊和研究條件

第五十六頁，共91頁。國家自然科學(xué)基金的資助方向基礎(chǔ)理論研究2.應(yīng)用基礎(chǔ)研究以實驗醫(yī)學(xué)為基礎(chǔ)的第五十七頁，共91頁。國家自然科學(xué)基金的主要種類常規(guī)基金：

面上項目（青年基金和地區(qū)基金） 重點項目 重大項目 杰出青年基金特殊基金：

主任基金 專項基金 創(chuàng)新群體基金 合作基金（海外，港澳）

第五十八頁，共91頁。國家自然科學(xué)基金的評審程序初審（函審）評審專家1評審專家2評審專家5評審專家3評審專家4終審（會審）選擇超出擬批準(zhǔn)項目120-130%的預(yù)選項目進(jìn)行評審學(xué)部批準(zhǔn)第五十九頁，共91頁。申請人是否具有科研能力？課題是否有科學(xué)意義、創(chuàng)新性和可行性？是否具備研究條件？課題評審者主要考慮的問題第六十頁，共91頁。課題設(shè)計書的撰寫對課題評價的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊和研究條件

第六十一頁，共91頁。

所研究的是重要領(lǐng)域的重要問題具有重要的理論價值或應(yīng)用前景課題研究的意義第六十二頁，共91頁?？茖W(xué)性

研究的背景：國內(nèi)外目前的研究現(xiàn)狀；包括自己前期實驗結(jié)果與數(shù)據(jù)存在的問題：提出研究的切入點與假說研究設(shè)想：研究目標(biāo)及思路第六十三頁，共91頁。對國內(nèi)外研究現(xiàn)狀的了解廣度和深度：近5年的主要研究進(jìn)展 研究中存在的主要問題參考文獻(xiàn)： 國外文獻(xiàn) 近5年 數(shù)量：20-30

雜志等級第六十四頁，共91頁。學(xué)術(shù)思想及創(chuàng)新性

理論創(chuàng)新：新學(xué)說或理論方法創(chuàng)新：新方法技術(shù)創(chuàng)新：技術(shù)改進(jìn)或完善第六十五頁，共91頁。立項依據(jù)（2-2.5張）

該研究項目的重要性：2-3行即可

常見問題：寫得太多！介紹在這個領(lǐng)域的國內(nèi)外進(jìn)展，包括自己的工作，并引用自己發(fā)表的SCI文獻(xiàn)（注意圍繞主題）常見問題：寫得太多/太少、重點不突出、介紹與主題無關(guān)的進(jìn)展凝練科學(xué)問題，提出假說（創(chuàng)新性、科學(xué)性及實用性）常見問題：不知道問題在哪兒？或提與主題無關(guān)的問題根據(jù)自己前期工作（最好已發(fā)表SCI文章）提出假說常見問題：沒有形成假說、無邏輯性簡介本項目擬開展的工作、思路及意義

常見問題：不寫第六十六頁，共91頁?？茖W(xué)問題凝練過程問項：科學(xué)問題是在一定科學(xué)知識背景下,存在于科學(xué)知識體系內(nèi)和科學(xué)實踐中有待解決的疑難，需要深層思考及高度凝練。答域：是對求解范圍的限定。

-全域：對解答范圍不給予任何限制的科學(xué)問題。（瘧疾是什么引起的？）

-類域：若對某科學(xué)問題有了初步認(rèn)識,希望能進(jìn)一步深入,問題的解答范圍即相應(yīng)有了一定程度的限定。（清除污水為何減少瘧疾的發(fā)生？）-特域：一旦科學(xué)問題的答域限定為某個具體答案，此時的答域稱為特域。研究者根據(jù)科學(xué)推理給出嘗試性解答或假說。（瘧疾是由蚊子傳播的。）第六十七頁，共91頁。課題設(shè)計書的撰寫對課題評價的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)景研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊和研究條件

第六十八頁，共91頁。研究目標(biāo)、研究內(nèi)容

和擬解決的關(guān)鍵問題研究目標(biāo)：明確、集中，用2-3句話描述。

常見問題：太大、分散或不明確研究內(nèi)容：根據(jù)假說，將研究問題分支，從不同側(cè)面或角度進(jìn)行研究；每一分支就組成一個研究內(nèi)容。注意研究內(nèi)容要集中，圍繞假說從不同角度（平行）及不同層次（縱深）開展研究。常見問題：太細(xì)、與研究方案混淆擬解決的關(guān)鍵問題：包括解決的關(guān)鍵科學(xué)問題、整個研究中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)及技術(shù)難點（如模型的制備、分子表達(dá)率和純化等）常見問題：找不準(zhǔn)第六十九頁，共91頁。研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題范圍合適：3-5個內(nèi)容重點突出：1-2個重點關(guān)鍵問題選擇準(zhǔn)確：1-3個關(guān)鍵問題第七十頁，共91頁。課題設(shè)計書的撰寫對課題評價的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)景研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊和研究條件

第七十一頁，共91頁。研究路線和研究方案

研究路線：整個實驗流程及線路，可以用線路圖表示，但要簡明易懂。常見問題：未寫，或線路圖畫得太復(fù)雜研究方案：研究對象、處理因素、分組、用某種技術(shù)檢測某種指標(biāo)等?？砂凑昭芯績?nèi)容在分標(biāo)題下描述。

常見問題：將方法寫得太細(xì)、檢測指標(biāo)太多，不突出重點；或不寫具體檢測哪種信號分子；未設(shè)計正確對照；臨床病例要排除和納入標(biāo)準(zhǔn)及樣本數(shù)；僅做平行檢測，無深度；

注意問題：設(shè)計巧妙、盡量使用先進(jìn)技術(shù)、盡量從不同角度去驗證一個問題、注意合理應(yīng)用抑制性、促進(jìn)性和排除性實驗手段第七十二頁，共91頁。肝臟缺血－再灌注損傷及藥物的保護(hù)

（技術(shù)路線）培養(yǎng)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞缺氧－再氧化細(xì)胞凋亡缺血－再灌注損傷體外實驗體內(nèi)實驗肝臟缺血－再灌注功能評價活性氧NOMMPs

藥物保護(hù)（PGE、API、764-3)TunelstainingDNAladderFACS細(xì)胞凋亡第七十三頁，共91頁。技術(shù)路線

設(shè)計合理：基礎(chǔ)與臨床 體外與體內(nèi) 分子、細(xì)胞、整體第七十四頁，共91頁。研究路線和研究方案

研究路線：整個實驗流程及線路，可以用線路圖表示，但要簡明易懂。常見問題：未寫，或線路圖畫得太復(fù)雜研究方案：研究對象、處理因素、分組、用某種技術(shù)檢測某種指標(biāo)等?？砂凑昭芯績?nèi)容在分標(biāo)題下描述。

常見問題：將方法寫得太細(xì)；檢測指標(biāo)太多，不突出重點，不相關(guān)；或不寫具體檢測哪種信號分子；未設(shè)計正確對照；臨床病例要排除和納入標(biāo)準(zhǔn)及樣本數(shù)；僅做平行檢測，無深度；

注意問題：設(shè)計巧妙、盡量使用先進(jìn)技術(shù)、盡量從不同角度去驗證一個問題、注意合理應(yīng)用抑制性、促進(jìn)性和排除性實驗手段第七十五頁，共91頁。研究方案及手段方法先進(jìn)技術(shù)成熟可靠有創(chuàng)新，設(shè)計科學(xué)及可行要求：緊密相關(guān)、清晰、科學(xué)判斷、獨到模型和材料、先進(jìn)、創(chuàng)新、有替代方案第七十六頁，共91頁。研究的預(yù)期目標(biāo)明確，可以達(dá)到，留有余地。發(fā)表的研究論文申請的技術(shù)專利可應(yīng)用產(chǎn)品的開發(fā)第七十七頁，共91頁。課題設(shè)計書的撰寫對課題評價的標(biāo)準(zhǔn)立論依據(jù)景研究目的與研究內(nèi)容研究路線和研究方案項目的創(chuàng)新性和特色研究的前期工作研究團(tuán)隊和研究條件

第七十八頁，共91頁。創(chuàng)新性要充分利用這一欄，展示本項目的創(chuàng)新點、優(yōu)勢和特色實事求是，切忌吹噓或說絕對的話常見問題：國內(nèi)無報道、說過火的語言、沒有體現(xiàn)到創(chuàng)新在何處？

注意問題：為了更好地突出本項目的創(chuàng)新點，可在項目背景一欄，打下伏筆，直接說明關(guān)于此點尚未見