文獻檢索與利用文件

化學與環(huán)境學院1302 ：噴霧電離/離子阱質(zhì)譜法HLCESI/MS對提取物中腺嘌呤進定和鑒別。方法：色譜條件為AgilntTCC85μ4.6mm250），流動相為甲醇：0.02molL195,pH46），1.0mLmin，檢測波長260nm30℃。結(jié)果：表明腺嘌呤濃度在0.5～60.0μgL-1r為0.999回收率在954～962%0.4%，測得金線蓮（產(chǎn)于廣西）提取物中腺嘌呤含量為1064μgg1，結(jié)論：法方法操作簡便，靈敏快速。迄今為止，首次金線蓮中含有重要藥理活性的物質(zhì)腺嘌呤，為金線蓮的藥理和臨床試驗研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)。：金線蓮；液－質(zhì)聯(lián)用；分析；腺嘌呤ysisoftheExtractionofAdeninefromHuangSchoolofChemistryand :Objective:ToextractadeninefromAnoectochilusroxburghiibyultrasonic-microwaveassistedextraction(UMAE),andtoidentifyanddetermineadeninebyhighperformanceliquidchromatography-electrosprayiontrapsmassspectrometry.Methods:ThechromatographicseparationwasachievedonAgilentTC-C18column(5μm,4.6mm×250mmi.d)usingmethanol-0.02mol·L-1acid-ammoniumacetatebuffersolution(5:95,v/v)asthephaseataflowrateof1.0mL·min-1,260nmasthedetectionwavelength.Results:The yteshowedgoodlinearregressionrelationshipbetweenpeakareaandconcentrationintherangeof0.5～60.0μg?mL-1(r=0.9999).Therecoveryratewas95.4%～96.2%withanRSDof0.45%.ThecontentofadnineextractedfromAnoectochilusroxburghiiwas10.64μg?g-1.Conclusion:Theproposedmethodissimple,accurateandrapid.SofarthereisnoreporttoindicatethatA.Roxburghiicontainsthisimportantbioactivecompound.ItprovidesascientificbasisforfurtherstudyclinicaltestandpharmacologyofA.Roxburghii.:Anoectochilusroxburghii;LC-MS;ysis;金線蓮（Anoectochilusroxburghii(WallLindlA.Roxburghii）要分布于亞洲的、中國、、和尼泊爾等國[2]。金線蓮全草皆稀藥材，廣泛用于治療肝炎、腎炎、、小兒驚風高熱、、高血壓、等[6-9]化學成分，而關(guān)于核苷類化學成分卻少有文獻。腺嘌呤，6-氨基嘌呤和鳥嘌呤是構(gòu)成DNA和RNA的基本單元，廣泛參與年來，隨著工業(yè)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)其在臨床醫(yī)學上有著更廣泛的用途，因此在很多品配方中常需添加腺嘌呤，故對于其含量的分析受到越來越多人提取，高效液相色譜法－電噴霧電離/離子阱質(zhì)譜法（highperformanceliquidchromatography-electrosprayionization/iontrapsmassspectrometry,HPLC-ESI/MS）對提取物中腺嘌呤進定和鑒別。首次發(fā)現(xiàn)在金線蓮藥材中含有腺嘌1200型HPLC-MSD高效液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀（Agilent公司拓微波溶樣測試技術(shù)）。金線蓮（購于福建同業(yè)，產(chǎn)于廣西，經(jīng)福建醫(yī)學藥學院水（），其余試劑均為分析純。色譜柱：AgilentTC-C18柱（5μm4.6mm×250mm）測波長：260nm；柱溫：30℃；進樣量：20μLESI離子源，檢測模式正離子（＋）；掃描范圍：m/z100～800；干燥氣流3500V；噴霧器壓力：40Psi精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的腺嘌呤對照品0.1000g-4、6mL分別至100mL量瓶中，得0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0稱金線蓮粉末（過80目篩），約1.0g，精密稱定，置于超聲－微波協(xié)同萃取儀玻璃容器中，加入10倍量體積的20%甲醇溶液，于超聲－微波協(xié)同萃取儀50℃恒溫條件下提取60min2少量注射用水溶解定容于10mL量瓶中，作為待用的供試品溶液。取腺嘌呤的8個濃度（0.5～60.0μg·mL1）的對照品溶液，按照上述色譜條橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y＝106618X-13395（r=0.9999）。結(jié)果表明，腺嘌呤在0.5～60.0μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。標準溶液和金線蓮提取物的HPLC-UV圖1和圖2分別顯示了在上述的色譜條件下，采用UV檢測方法獲得的腺嘌呤對照品、金線蓮萃取產(chǎn)物的HPLC分離色譜圖。標準品的色譜圖1，腺嘌呤的保留時間是11.53min。根據(jù)保留時間，圖2中1圖1腺嘌呤對照品高效液相色譜圖（濃度：10μg·mL-Figure1HPLCchromatogramsofstandardsubstance(concentration:10μg·mL-圖2金線蓮萃取產(chǎn)物高效液相色譜圖（1-腺嘌呤）（濃度：10μg·mL-Figure2HPLCchromatogramsofextractfromA.Roxburghii(1-adeline))(concentration:10μg·mL-LC-ESIMS在設(shè)定的HPLC-ESI（+）/MS條件下，分別超聲微波協(xié)同萃取樣品和腺嘌呤的對照品進樣，經(jīng)色譜分離后對保留時間為14.56min的峰進行ESI/MS分析，得到各離子峰的精確質(zhì)量數(shù)，所得到的質(zhì)譜圖見圖3(A)和(B)。m/z136.2為腺嘌呤質(zhì)子化準分子離子峰[M+H]+，m/z119.2對應(yīng)特征碎片離子峰[M+H-NH3]+，m/z94.0對應(yīng)碎片離子峰[M+H-NC-NH2]+，圖4為腺嘌呤的質(zhì)譜裂解圖譜?；趍/z值、保留時間、對照品和文獻[13]數(shù)據(jù)進行比較和分析，保留時間為14.56min處的色譜峰對應(yīng)的物質(zhì)鑒定為腺嘌呤。將同一濃度的對照品溶液連續(xù)進樣6次，測得峰面積的RSD為0.56。表明取同一樣品溶液分別于、、、、 、h進樣，測得峰面積的為3.49%。表明樣品溶液在24h取同一批金線蓮粉末6份，分別依樣品溶液的方法操作，測得腺嘌呤含量的RSD為1.92%。表明本法重復性良好。圖3MS質(zhì)譜圖（樣品濃度：1.0mg·mL1，腺嘌呤對照品濃度：10μg·mL-1）A和B分別是樣品和腺嘌呤對照品在保留時間為14.56min處色譜峰對應(yīng)的MS2質(zhì)譜圖Figure3Massspectrumofsampleandstandard(thesampleconcentrationwas1.0mg·mL-1,thestandardconcentrationwas10μg·mL-1)AandBarethemasssoectrumatthepeakof14.56minofsampleandstandard,圖4

Figure4Fragmentationof精密稱取已知含量的金線蓮粉末（過80目篩）6份，每份約0.5g，按腺嘌呤在藥材中含有量分別加入對照品溶液適量，按“2.4”項下方法供試液，測定并計算加樣回收率，結(jié)果腺嘌呤平均加樣回收率和RSD分別為96.4%和1.03%1金線蓮中腺苷的含量（nTable1ThecontentofadenineinA.Roxburghii(nRSD/12345金線蓮供試品溶液與腺嘌呤對照品溶液在260nm波長處均有最大吸收，故選擇260nm作為檢測波長。本實驗曾比較了不同系統(tǒng)和比例的流動相，如甲醇－水，乙腈－水（0.1甲酸），甲醇－1甲酸水溶液，甲醇－1冰醋酸水溶液，甲醇－0.02比較了不同比例條件的流動相，最后確定了在甲醇∶0.02mol·L1醋酸－乙酸銨緩沖溶液（5:95）的條件下，色譜峰分離效果最好，保留時間適宜，簡單[14]，以腺嘌呤的含量為指標，采用L9(34)正交設(shè)計的方法優(yōu)選出超聲－微波協(xié)數(shù)(D)為試驗因素。由正交試驗結(jié)果確定最優(yōu)化提取工藝為超聲微波提3次，10倍量的20%甲醇，提取時間為60min。另外也了加熱回流、超聲提取等方[1]忠，，，等．金線蓮研究的現(xiàn)狀與展望[J]．科學（2）：58-中國植物．中國高等植物圖鑒（第五冊）[M]．，1998：198-ChenCM,WangLF,ChengKT,etal.EfectsofAnoec-tochilusformosanusHayataextractandglucocorticoidonlungmaturationinpretermrats[J].Phytomedicine,2004,11(6):509–ShihCC,WuYW,LinWC,etal.AqueousextractofAnoec-tochilusformosanusatenuatehepaticfibrosisinducedbycar-bontetrachlorideinrats[J].Phytomedicine,2005,12(6-7):453-460.ChangCJ,WuSM,YangPW,etal.High-presurecarbondi-oxideandco-solventextractionsofcrudeoilsfromntmate-rials[J].InnovativeFoodScience&Emerging,2001(1):187- gCC,ShangHF,WangLF,etal.Antitumorandimmu-nostimulatingefectsofAnoectochilusformosanusHayata[J].Phytomedicine,2006,13(5):366-370.RojaRahimi,ShekoufehNikfar,BagherLarijani,etal.Are-viewontheroleofantioxidantsinthemanagementofdiabetesanditscomplications[J].BiomedPharmacothe,2006,59(7):366-730.2006，8：65-CangaprasadA,LathaPG,SeniS.Micropropagationofter-restrialhideAnorchidsAnoectochilussikkimensi